Agilent1260液相色譜系統(tǒng)操作規(guī)程

1、Agilent 1260液相色譜系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程 1 目的 規(guī)范Agilent 1260系列高效液相色譜的日常使用和維護(hù)保養(yǎng)，保證儀器的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，確保檢測(cè)工作的順利進(jìn)行。 2 適用范圍 適用于Agilent 1260系列高效液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護(hù)。 3 職責(zé) 實(shí)驗(yàn)室分析人員負(fù)責(zé)Agilent 1260系列高效液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護(hù)。 4 系統(tǒng)組成 4.1 Agilent 1260系列四元泵(G1311C)和脫氣機(jī)； 4.2可變波長紫外檢測(cè)器（VWD G1314F）； 4.3 Chemstation A.01.04 色譜工作站 4.4國產(chǎn)柱溫箱（AT-550）色譜柱； 4.

2、5 電腦、打印機(jī)等輔助設(shè)備。 5 定義 無 6 操作程序 6.1開機(jī)前的準(zhǔn)備 6.1.1檢查儀器校驗(yàn)標(biāo)識(shí)，確認(rèn)儀器處于校驗(yàn)周期內(nèi)。 6.1.2檢查上次實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備使用記錄表和儀器狀態(tài)，確認(rèn)儀器處于正常狀態(tài)； 6.1.3流動(dòng)相的制備： 6.1.3.1按高效液相色譜法流動(dòng)相配制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程配制需要的流動(dòng)相。 6.1.3.2用前超聲脫氣（一般1020min）。 6.1.4更換流動(dòng)相： 6.1.4.1將泵的吸濾器從舊流動(dòng)相中取出，用新流動(dòng)相沖洗后放入新流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶中，并蓋好瓶蓋； 6.1.4.2將排液管的出口端放入廢液瓶中，并蓋好瓶蓋。 6.1.5供試溶液的配制： 6.1.5.1供試品用規(guī)定溶劑配

3、制成供試品溶液。 6.1.5.2定量測(cè)定時(shí)，對(duì)照品溶液和供試品溶液均應(yīng)分別配制2份。 6.1.5.2如有必要，樣品需預(yù)處理，如過濾等，以免對(duì)色譜系統(tǒng)產(chǎn)生污染和色譜干擾。 6.1.6選擇色譜柱： 6.1.6.1根據(jù)待檢供試品的檢測(cè)方法確定所需的色譜柱； 6.1.6.2檢查儀器上安裝的色譜柱是否與其相同，若不同則需進(jìn)行更換。 6.1.7更換色譜柱 6.1.7.1拆卸原色譜柱： ? 先握住色譜柱，再松動(dòng)色譜柱出口端螺帽，取下出口端的管線； ? 松動(dòng)色譜柱入口端螺帽，取下入口端的管線； ? 用止動(dòng)塞將色譜柱的進(jìn)出口塞住擰緊后，將色譜柱放回原專用包裝盒內(nèi)。 6.1.7.2安裝新色譜柱： ? 從專用包裝盒

4、內(nèi)取出色譜柱，松動(dòng)并取下色譜柱出入口的止動(dòng)塞； ? 將與進(jìn)樣器相連的管線一端插入色譜柱入口端，擰緊螺帽； (注意:安裝時(shí)色譜柱上的流向標(biāo)志應(yīng)與管路的流動(dòng)相流向一致。) ? 將與檢測(cè)器相連的管線一端插入色譜柱出口端，擰緊螺帽。 6.2開機(jī) 6.2.1通電前應(yīng)檢查儀器設(shè)備之間的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。 6.2.2接通電源，打開計(jì)算機(jī)和打印機(jī)開關(guān)。 6.2.3等待計(jì)算機(jī)自檢完畢后，進(jìn)入Windows桌面，依次打開泵、進(jìn)樣器、檢測(cè)器各模塊電源。打開柱溫箱開關(guān)。 6.2.4待各模塊自檢完成后，點(diǎn)擊Windows桌面“”圖標(biāo)進(jìn)入化學(xué)工作站畫面。 6.2.5確定儀器與工作站已連接，若未連接，需

5、關(guān)閉工作站，重新連接。注意必須先打開檢測(cè)器，再連接工作站。 6.2.6從“視圖”菜單中選擇“方法和運(yùn)行控制”畫面,也可單擊工作站畫面左側(cè)的“方法和運(yùn)行控制”項(xiàng)，進(jìn)入方法和運(yùn)行控制窗口。 6.3 操作 6.3.1 泵的開啟和設(shè)置 6.3.1.1打開Purge閥（逆時(shí)針），右鍵點(diǎn)擊四元泵下面的空白處，選擇“方法”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。 Agilent 1260液相色譜系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程 Agilent 1260液相色譜系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程 6.3.1.2設(shè)流速：0ml/min，點(diǎn)擊“確定”。 右鍵點(diǎn)擊四元泵下面的空白處，選擇“控制”選項(xiàng)，選中“啟動(dòng)”，點(diǎn)擊“確定”，泵開始啟動(dòng)。 6.

6、3.1.3待泵啟動(dòng)完畢，泵的圖標(biāo)變綠色后，右鍵點(diǎn)擊四元泵下面的空白處，選擇“方法”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。設(shè)“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道設(shè)到100%，單擊“確定”。則系統(tǒng)開始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止（一般需要5min左右）。 6.3.1.3注意：為保護(hù)泵，不宜直接設(shè)置過高流速或直接將高流速降為低流速，宜緩慢梯度提高或降低流速； 6.3.1.4看柱前壓力，若大于10Bar，則應(yīng)更換排氣閥內(nèi)濾芯/過濾白頭。 6.3.1.5右鍵點(diǎn)擊四元泵下面的空白處，選擇“方法”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面，將流速設(shè)為0ml/min，點(diǎn)擊“

7、確定”，關(guān)閉Purge閥（順時(shí)針）。 6.3.1.6右鍵點(diǎn)擊四元泵下面的空白處，選擇“方法”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面，設(shè)置使用的流動(dòng)相比例和流速或選擇已有方法開始系統(tǒng)平衡。 6.3.1.7 點(diǎn)擊四元泵下面的瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積，點(diǎn)擊“確定”。 6.3.2 方法編輯 若已創(chuàng)建方法，可在“方法”菜單選擇“調(diào)用方法”，選擇相應(yīng)的方法。若無，需按下面步驟建立： 6.3.2.1 從“方法”菜單中選擇“編輯完整方法”，鉤選“方法信息”、“儀器/采集”、“運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表”三項(xiàng)，點(diǎn)擊確定； 6.3.2.2 出現(xiàn)“方法信息”對(duì)話框，如有需要可將方法的描述信息輸入，也可選擇不輸入任何

8、信息，點(diǎn)擊確定； 6.3.2.3 泵參數(shù)設(shè)定 在“流量”處輸入流量,如1ml/min，在“溶劑 B”處輸入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入 ”一行“時(shí)間表”,編輯梯度。在“壓力限”處輸入柱子的最大耐高壓,如300bar，以保護(hù)柱子。點(diǎn)擊“確定”進(jìn)入下一參數(shù)設(shè)定。 6.3.2.4 柱溫箱參數(shù)設(shè)定 在柱溫箱上手動(dòng)輸入規(guī)定的溫度即可。 6.3.2.5紫外檢測(cè)器（VWD G1314F）參數(shù)設(shè)定 在“波長”下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長,如254nm, 在“峰寬 (響應(yīng)時(shí)間)”下方點(diǎn)擊 下拉式箭頭,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間, 如0.1min (2s)。 在“時(shí)間表” 中可以“插入”一行，輸入

9、隨時(shí)間切換的波長，如1min ，波長=300nm。點(diǎn)擊“確定”，進(jìn)入下一參數(shù)設(shè)定。 6.3.2.6 在“ 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表 ”中選中“ 數(shù)據(jù)采集”，點(diǎn)擊“確定”。 6.3.2.7 完整方法編輯完畢。點(diǎn)擊“方法”菜單，選中“方法另存為”，輸入一方法名稱，點(diǎn)擊“確定”。 6.3.3 運(yùn)行樣品 6.3.3.1 從菜單 “視圖”中選中“在線信號(hào)”,選中“信號(hào)窗口1”,然后點(diǎn)擊“改變” 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊“確定”。 6.3.3.2從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“樣品信息”選項(xiàng)，輸入操作者名稱；在“數(shù)據(jù)文件”中選擇“手動(dòng)”或“前綴/計(jì)數(shù)器”。（區(qū)別:手動(dòng)-每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)

10、將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。Pr在前綴/計(jì)數(shù)器-“前綴”框中輸入前綴，在“計(jì)數(shù)器”框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如vwd數(shù)據(jù)0001，vwd數(shù)據(jù)0002。） 6.3.3.3 點(diǎn)擊“確定”，從“儀器”菜單選擇“系統(tǒng)開啟”。 6.3.3.4 手動(dòng)進(jìn)樣 6.3.4 數(shù)據(jù)處理 雙擊電腦桌面的“”圖標(biāo)，進(jìn)入脫機(jī)工作站，從“視圖”菜單中選擇“數(shù)據(jù)分析”，或點(diǎn)擊屏幕左下方的“數(shù)據(jù)分析”，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。 6.3.4.1 調(diào)用需要處理的數(shù)據(jù)：從“文件”菜單中選擇“調(diào)用信號(hào)”，或者點(diǎn)擊屏幕左上方的圖標(biāo)“”，跳出一個(gè)對(duì)話框，選擇相應(yīng)文件夾里的數(shù)據(jù)文件名稱，單擊“確定”即可。 6.3.4.2 調(diào)用方法：從“方法”菜

11、單里選擇“調(diào)用方法”，或者點(diǎn)擊屏幕左上方的圖標(biāo)“”，跳出一個(gè)對(duì)話框，選擇相應(yīng)的方法名稱，單擊“確定”即可。 6.3.4.3 積分： 6.3.4.3.1從“積分”菜單中選擇“積分”，當(dāng)前數(shù)據(jù)被積分。若積分不是很理想，則從“積分”菜單中選擇“積分事件”，選擇合適的“斜率靈敏度”、“最小峰面積”、“最小峰高”等。 6.3.4.3.2從“積分”菜單中選擇“積分”，則當(dāng)前數(shù)據(jù)被重新積分。 6.3.4.3.3 如積分不理想，則重復(fù)6.3.4.3.1和6.3.4.3.2，直到滿意為止，此時(shí)點(diǎn)擊圖標(biāo)“”進(jìn)行積分參數(shù)的保存并退出積分參數(shù)設(shè)定界面。 6.3.4.3.4 如果部分譜峰自動(dòng)積分不是很理想，也可選擇手動(dòng)

12、積分。點(diǎn)擊圖標(biāo)“”，繪制峰基線并積分；點(diǎn)擊圖標(biāo)“”，切線撇去一個(gè)峰并積分（適合拖尾峰的處理）；點(diǎn)擊圖標(biāo)“”，手動(dòng)分裂已積分的峰（適合未基線分離的峰的處理）；點(diǎn)擊“”，刪除已積分的峰；點(diǎn)擊圖Agilent 1260液相色譜系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程 標(biāo)“”，將當(dāng)前手動(dòng)積分事件保存到數(shù)據(jù)文件中。其他數(shù)據(jù)處理方式詳見工作站說明書。 6.3.5 打印報(bào)告 6.3.5.1 打開打印機(jī)電源開關(guān)，從“報(bào)告”菜單中選擇“設(shè)定報(bào)告”，或點(diǎn)擊屏幕中間的圖標(biāo)“”，跳出一對(duì)話框，選擇相應(yīng)的定量方法和報(bào)告格式，單擊確定后退出。 6.3.5.2 從“報(bào)告”菜單中選擇“打印報(bào)告”，或點(diǎn)擊屏幕中間的圖標(biāo)“”，則可預(yù)覽到報(bào)告。

13、若報(bào)告中顯示的時(shí)間范圍及響應(yīng)范圍不合適，則可點(diǎn)擊“關(guān)閉”退出預(yù)覽。進(jìn)入“報(bào)告版面設(shè)計(jì)”界面，選擇相應(yīng)的報(bào)告格式，雙擊圖譜，點(diǎn)“自定義量程”，輸入合適的時(shí)間范圍和響應(yīng)范圍，并選擇“全部使用相同量程”，點(diǎn)擊“確定”并保存當(dāng)前模版后退出，再重新進(jìn)入“數(shù)據(jù)分析”界面，重新預(yù)覽報(bào)告，若時(shí)間范圍和響應(yīng)范圍均合適，單擊“打印報(bào)告”，即可。 6.4 宏命令的使用 6.4.1 在“視圖”下拉單中調(diào)出“化學(xué)工作站工作日程表”； 6.4.2 輸入日期時(shí)間、命令并選好執(zhí)行命令的模式，點(diǎn)擊保存圖標(biāo)； 6.4.3 各宏命令代表意思及輸入方法： 開泵：pumpall on 關(guān)泵：pumpall off 開燈：lampall

14、 on 關(guān)燈：lampall off 載入一個(gè)方法：loadmethod xxx.M 開始一個(gè)方法：startmethod xxx.M 停止一個(gè)方法：stopmethod xxx.M 關(guān)閉整個(gè)系統(tǒng)：standby。 6.5.4 注意事項(xiàng)：日程表編輯完畢后，一定要保存，并且不能關(guān)閉；宏命令不區(qū)分大小寫。 6.6 關(guān)機(jī) 6.6.1 樣品測(cè)試完畢后，關(guān)機(jī)前，先關(guān)燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。 ? 5%乙腈/甲醇-水沖洗大約20min;（若使用了無機(jī)鹽流動(dòng)體系，則沖洗約30-60min.） ? 50%乙腈/甲醇-水沖洗大約20min; ? 80%乙腈/甲醇-水沖洗大約20min。 6.6.2退出化學(xué)工

15、作站，依次提示關(guān)泵及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。關(guān)閉Agilent 1260各模塊電源開關(guān)。 6.6.3 做好儀器使用登記，并填寫實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備使用記錄表。 Agilent 1260液相色譜系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程 Agilent 1260液相色譜系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程 6.7 系統(tǒng)日常維護(hù)和保養(yǎng) 6.7.1色譜柱 使用前仔細(xì)閱讀色譜柱的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、壓力范圍、溫度范圍、流動(dòng)相類型等。 6.7.2流動(dòng)相：5%乙腈/甲醇-水應(yīng)用棕色玻璃瓶存放，避免光照，防止長菌。 6.7.3試樣配制 ? 盡量用流動(dòng)相配制試樣。 ? 必要時(shí)使用超聲波處理試樣，確保試樣完全溶解并混合均勻。 ?

16、 若試樣中有肉眼可見的機(jī)械雜質(zhì)，則必須用針頭過濾器對(duì)試樣進(jìn)行過濾（根據(jù)試樣的性質(zhì)選擇有機(jī)相或水相針頭過濾器）。 ? 對(duì)含有顆粒的固體樣品，經(jīng)研磨均勻后方可取樣。 ? 手動(dòng)進(jìn)樣針：取樣前應(yīng)用試樣潤洗3次以上，使用后應(yīng)用甲醇/乙腈清洗3次以上。 ? 廢液處理：及時(shí)清理廢液瓶，以防廢液溢出。 6.8儀器安全保障 6.8.1 每天使用儀器之前，要打開Purge閥將各個(gè)通道沖洗45min左右； 6.8.2及時(shí)更換Purge Valve內(nèi)的過濾芯(當(dāng)打開Purge Valve，流速為5ml/min壓力高于10bar時(shí))。Purge閥在關(guān)閉狀態(tài)時(shí)，不宜過緊。 6.8.3 當(dāng)儀器使用緩沖溶液作業(yè)時(shí)，要用水進(jìn)行

17、過渡并將柱塞桿清洗開關(guān)打開。 6.8.4儀器暫停兩天以上不使用（包括兩天），過濾板最好選用甲醇浸泡。 6.8.5避免使用不相溶的溶劑作流動(dòng)相，避免水和緩沖液、酸、堿和含氯溶液在泵內(nèi)長時(shí)間的停留。 6.8.6每次使用前后，應(yīng)檢查泵頭、并清洗除去污染物或析出的固體鹽。 6.8.7 避免在泵壓過高的狀態(tài)下長時(shí)間工作，如果流速較大且壓力較高，關(guān)閉泵以前需將流速逐漸降低以避免壓力波動(dòng)過大，損壞色譜柱。 6.8.8 無壓力顯示或壓力波動(dòng)較大時(shí)，不能進(jìn)行分析，應(yīng)檢查排氣閥是否關(guān)閉，泵中氣泡是否已排除，排除故障后方能進(jìn)行操作。如壓力升高，甚至自動(dòng)停泵，應(yīng)檢查柱端有無污染、堵塞。 6.8.9每次使用、維護(hù)完畢后，應(yīng)當(dāng)詳細(xì)填寫使用記錄，包括柱子類型，遇到的問題、維護(hù)方法等。對(duì)實(shí)驗(yàn)中儀器的出錯(cuò)，應(yīng)當(dāng)詳細(xì)填寫具體的發(fā)生情況以及處理方法。未能處理的，應(yīng)向他人求證，并對(duì)下位使用者提出問題所在。每次使用儀器之前，應(yīng)當(dāng)查看使用記錄，確定有沒有尚未解決的儀器故障。 6.8.10儀器的移動(dòng)，安裝，更新或升級(jí)應(yīng)當(dāng)由儀器負(fù)責(zé)人或供應(yīng)商完成