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實(shí)驗(yàn)七 牛乳中酪蛋白的制備 目的要求 學(xué)習(xí)從牛乳中分離純化酪蛋白的原理和方法,實(shí)驗(yàn)原理 牛乳中主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白,含量約為35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物,等電點(diǎn)為4.7。利用等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低的原理,將牛乳的pH調(diào)至4.7時(shí),酪蛋白就沉淀出來(lái)。用乙醇洗滌沉淀物,乙醚除去脂類(lèi)雜質(zhì)后便可得到純的酪蛋白,試劑和器材,試劑: 95%乙醇;乙醇乙醚混合液 (V/V=11);無(wú)水乙醚 0.2mol/L pH4.7醋酸醋酸鈉緩沖液,材料 純牛奶(蒙牛,1將25mL牛奶加熱至40。在攪拌下慢慢加入預(yù)熱至40、pH4.7醋酸緩沖液25mL。用精密試紙調(diào)pH值至4.7。 2. 將上述懸浮液冷卻至室溫。離心10min(3000r/min)棄去上清液,得酪蛋白粗制品。 3用水洗沉淀兩次,離心5min(3000r/min),棄去上清液,操作方法,3用乙醇洗沉淀1次,離心5min(3000r/min),棄去上清 液。用乙醇乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1次, 各離心5min(3000r/min) 。 4將沉淀攤開(kāi)在表面皿上,風(fēng)干;得酪蛋白純品。 5準(zhǔn)確稱(chēng)重,計(jì)算含量酪蛋白g/100mL牛乳(g%),并和 理論含量為3.5g/100mL牛乳相比較,
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