健康嬰幼兒攜帶艱難梭菌的流行病學(xué)特征及跟蹤調(diào)查

1、健康嬰幼兒攜帶艱難梭菌的流行病學(xué)特征及跟蹤調(diào)查目的：艱難梭菌(Clostridium difficile,CD)是腸道內(nèi)一種專性厭氧的芽抱桿菌 , 有產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株 , 均能夠在健康人體內(nèi)無癥狀定植。 在受到某些因素影 響如抗生素的長期應(yīng)用或者免疫抑制劑的使用等使腸道菌群環(huán)境發(fā)生改變而引 發(fā)艱難梭菌感染 (Clostridium difficile infection,CDI),繼而發(fā)生艱難梭菌相關(guān)性腹瀉 (Clostridium difficile associated diarrhea,CDAD)等癥狀。CD在健康嬰幼兒體內(nèi)能夠長期的無癥狀定植，定植率在各個國家和地區(qū)變 異性較大 , 且

2、各地區(qū)定植株的型別及影響定植的因素也各不相同。本地區(qū)關(guān)于這 方面的流行病學(xué)資料相對有所欠缺 , 本研究擬對河北邯鄲地區(qū) 0-3 周歲的健康嬰 幼兒腸道內(nèi)CD的定植情況及影響其定植的因素進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，同時對若干嬰兒進(jìn)行為期12個月的跟蹤調(diào)查，了解其體內(nèi)CD定植的動態(tài)情況及發(fā)生變化的 影響因素。使河北地區(qū)健康嬰幼兒體內(nèi)CD定植的流行病學(xué)資料更加豐富，為臨床制定 預(yù)防和治療疾病策略提供證據(jù)。 方法：1 從2014年10月至2015年12月,共收集 河北邯鄲地區(qū) 0-3 周歲以內(nèi)健康嬰幼兒糞便標(biāo)本 1098份,每人收取一次 ,并記錄 每個嬰幼兒的基本資料。同時,對29名嬰兒從出生至 12月齡進(jìn)行為

3、期 1年的跟蹤調(diào)查 ,分別在出生時、 1 周、2 周、3周、1 月、2月、3月、4月、5月、6月、7月、8月、9月、10 月、11 月、12月等16個時間點收取糞便標(biāo)本 ,記錄每次當(dāng)時的資料情況。 2將 收集的糞便標(biāo)本應(yīng)用芽抱富集法進(jìn)行CD的分離培養(yǎng)，并對疑似菌落進(jìn)行鑒定。將鑒定得到的CD菌株按照細(xì)菌基因組DNA式劑盒的方法提取DNA后采用多 重PCR勺方法檢測毒素 A B及二元毒素 A B基因,包括tcd A、tcd B、cdt A cdt B 16Sr DNA3將提取的菌株DNA4行核糖體分型,分型結(jié)果用Quantity One 軟件做比對分析。分出的型別跟標(biāo)準(zhǔn)菌株類型比較并命名。4將一次

4、性標(biāo)本所得的CD采用瓊脂稀釋法進(jìn)行藥物敏感實驗 , 共選擇了非達(dá)霉素、萬古霉素、甲硝唑、利福平、 利福昔明、紅霉素、四環(huán)素、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢他啶、頭孢曲松、美 羅培南、氯霉素、克林霉素等14種抗生素,分別測定其MIC值(最低抑菌濃度)。結(jié)果:1 1098位 0-3 歲健康嬰幼兒的糞便標(biāo)本中共有 250份標(biāo)本分離培養(yǎng)出 250株艱難梭菌 , 總攜帶率為 22.77%(250/1098), 其中產(chǎn)毒株攜帶率為 12.57%(138/1098), 在所有產(chǎn)毒株中有 1 株為 tcd A+tcd B+cdt A+cdt B+, 其它 均為 tcd A+tcd B+cdt A-cdt B- 。

5、所有菌株通過核糖體分型共分出 15種不同的 核糖體型別,型別中數(shù)量最多為HB-3型,占所有菌株的19.6%,其次是HB9型 (14%)、HB1 型(13.6%)、HB2型(10.8%)和 HB5(10.4)。分析結(jié)果顯示母親的懷孕周期、 近期應(yīng)用抗生素和近期住院史可能是健康嬰 幼兒體內(nèi)艱難梭菌定植的影響因素。 本次研究中未發(fā)現(xiàn)高產(chǎn)毒株型別 027和 078 型。2抗生素耐藥性分析中，從250株艱難梭菌對14種抗生素的MIC值測定結(jié)果 可見 , 所有實驗菌株對萬古霉素、 甲硝唑和非達(dá)霉素三種藥均高度敏感 , 沒有耐藥 菌株;對美羅培南和氯霉素的耐藥率比較低 ,分別為 2%和6.8%;對其他幾種藥

6、物 耐藥率均較高 , 由高到低依次為克林霉素 (99.2%)、頭孢他啶(96.8%)、紅霉素 (94.4%)、環(huán)丙沙星(88%)、利福平(63.2%)、利福昔明(63.2%)、四環(huán)素(54.4%)、 左氧氟沙星(51 .6%) 、頭孢曲松(44.8%) 。 3跟蹤調(diào)查的結(jié)果 ,29 位嬰兒共收集 437份標(biāo)本，其中20個嬰兒的糞便標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)有 CD的定植，定植率為69%(20/29)有產(chǎn)毒株定植的有 15 人, 定植率為 75%(15/20) 。其中,111 份陽性標(biāo)本中分 離出 79株產(chǎn)毒艱難梭菌 ,所有分離菌株的產(chǎn)毒株定植率為 71.2%(79/111) 。定植CD的嬰兒中有4個在出生后1

7、個月內(nèi)定植CD,其它16個均為1月齡之 后才有CD的定植。且在定植者中有些定植是連續(xù)的(4、5、7、8、12號)，有的 是間斷性的 (1 、 2、 3、 6、 9、 10、 11、 13、 16、 17、 18、 19號), 還有個別是一 過性的定植 (14、 15、 20號嬰兒)。4在跟蹤研究中,111株艱難梭菌共分為8種核糖體型,其中HB9(n=14)和HB2(n=18)為非產(chǎn)毒型，其它幾種型別 HB42(n=26)、HB1(n=16)、HB52(n=12)、HB3(n=15)、HB6(n=5)、HB5(n=5)均為產(chǎn)毒型別?；旧厦總€嬰兒體內(nèi)定植的艱難梭菌型別前后一致，其中8號在2月齡時

8、糞便標(biāo)本中分離出CD型別為HB3型, 之后分離出的菌株型別為HB-42型;11號嬰兒則先后分離出HB1型和HB9型菌株, 即之前分離出CD產(chǎn)毒株，后有非產(chǎn)毒CD的定植;15號有HB52型和HB1型菌株的 先后定植；16號先后分離出HB1型和HB3型的艱難梭菌菌株。結(jié)論:1 本次研究中河北邯鄲地區(qū) 0-3 周歲健康嬰幼兒的艱難梭菌總攜帶率 略低于國外相關(guān)報道 , 而產(chǎn)毒株攜帶率與國內(nèi)報道結(jié)果相似。 2 分析結(jié)果顯示母 親的懷孕周期、近期應(yīng)用抗生素和近期住院史可能是健康嬰幼兒體內(nèi)艱難梭菌定 植的影響因素 , 與國內(nèi)外的報道結(jié)果相似。收集菌株的核糖體分型結(jié)果顯示，優(yōu)勢型別為HB3和HB9而且本次分離的 菌株型別中 , 有些型別同省內(nèi)之前分離出的住院兒童和成人的菌株型別相同 , 提 示艱難梭菌在這些個體間傳播的可能性。3一次性標(biāo)本分離的菌株對 14種抗生素的耐藥情況結(jié)果顯示 , 與國內(nèi)的幾篇 報道相比利福霉素類的耐藥率相對較高 ,可能與收集標(biāo)本所在地應(yīng)用抗生素情況 相關(guān)。其它幾種藥物的耐藥情況與國內(nèi)報道的大多相似4在跟蹤調(diào)查的嬰兒體內(nèi)CD的定植率與第一部分中0-12月齡年齡段收取一 次性標(biāo)本的CD定植率相比較高，差異