GSH-Px活力的測定SOP(最新整理)

1、主要目的：測定物質(zhì)谷胱甘肽過氧化物酶（gsh-px）活力。主要原理：力。gsh-px谷胱甘肽過氧化物酶（gsh-px）可以促使過氧化氫（h2o2）與還原性谷胱甘肽（gsh）反應(yīng)生成 h2o 及氧化性谷胱甘肽（gssg）,谷胱甘肽過氧化物酶的活力可用其酶促反應(yīng)的速度來表示，測定此酶促反應(yīng)中還原型谷胱甘肽的消耗，則可求出酶的活h2o2+2gsh2h2o+gssggsh-px 的活力以催化 gsh 的反應(yīng)速度來表示，由于這兩個(gè)底物在沒有酶的條件下，也能進(jìn)行氧化還原反應(yīng)（稱為非酶促反應(yīng)），所以最后計(jì)算此酶活力時(shí)必須扣除非酶促反應(yīng)引起的 gsh 減少的部分。而 gsh 含量的測定可以跟據(jù) gsh 和二硫

2、代二硝基苯甲酸作用生成 5-硫代二硝基苯甲酸陰離子呈現(xiàn)較穩(wěn)定的黃色， 在 412nm 處測其吸光度即可計(jì)算出實(shí)驗(yàn)室簽章一、試劑谷胱甘肽過氧化物酶（gsh-px）測定試劑盒（南京建成生物研究所）二、儀器設(shè)備96 孔酶標(biāo)板uv-vis 可見多功能酶標(biāo)儀旋渦混勻器離心機(jī)水浴鍋移液槍及其相應(yīng)量程槍頭3、實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)試劑盒說明書具體操作步驟如下:1. 非酶管和酶管各加入 1 mmol/lgsh 0.2 ml，酶管加入稀釋后的待測血清和組織勻漿液 0.2 ml，37 c 水浴預(yù)溫 5 分鐘，酶管和非酶管分別加入試劑一應(yīng)用液 0.1 ml，37 c 水浴準(zhǔn)確反應(yīng) 5 分鐘，酶管和非酶管分別加入試劑二應(yīng)用液2

3、 ml，同時(shí)非酶管加入待測細(xì)胞上清液 0.2 ml?；靹?，3500-4000 轉(zhuǎn)/分，離心10 分鐘，取上清 1 ml 作顯色反應(yīng)。2. 空白管加入 1 ml gsh 標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液，標(biāo)準(zhǔn)管加入 1 ml 20 mol/lgsh 標(biāo)準(zhǔn)液，非酶管和酶管各加入上一步驟 1 ml 上清液，然后空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、非酶管和酶管各加入 1 ml 試劑三應(yīng)用液，0.25 ml 試劑四應(yīng)用液和0.05 ml 試劑五應(yīng)用液。3. 混勻，室溫靜置 15 分鐘后，在 412 nm 處將酶標(biāo)板空板進(jìn)行掃描，準(zhǔn)確吸取 0.2 ml 各管反應(yīng)液加入到新的 96 孔板中，酶標(biāo)儀測定各孔吸光度（od 值）。4. 血清中 gs

4、h-px 活力計(jì)算公式gsh-px 活力（u/mgprot） = 非酶管o值d酶管- od值標(biāo)準(zhǔn)品濃度（20mol/l）稀釋倍數(shù)標(biāo)準(zhǔn)管od值空-白管od值組織中 gsh-px 活力計(jì)算公式gsh-px 活力（u/mgprot）稀釋倍數(shù)（5）= 非酶管o值d酶管- od值標(biāo)準(zhǔn)管od值-空白管od值標(biāo)準(zhǔn)品濃度反應(yīng)時(shí)間（5min) 取樣量（0.2 ml）待測組織蛋白濃度（mgprot/ ml）參考文獻(xiàn)oliveira lazarin m, ishii-iwamoto e l, yamamoto n s, et al. liver mitochondrial function and redox st

5、atus in an experimental model of non-alcoholic fatty liver disease induced by monosodium l-glutamate in rats j. experimental andmolecular pathology, 2011, 91(3): 687-694.“”“”at the end, xiao bian gives you a passage. minand once said, people who learn to learn are very happy people. in every wonderf

6、ul life, learning is an eternal theme. as a professional clerical and teaching position, i understand the importance of continuous learning, life is diligent, nothing can be gained, only continuous learning can achieve better self. only by constantly learning and mastering the latest relevant knowledge, can employees from all walks of life keep up with the pace of enterprise development and innovate to meet the needs of the market. this document is also edited by my stu