血型的鑒定方法及操作全解

1、紅細胞血型系統(tǒng)及其檢測,重慶醫(yī)科大學臨床血液教研室,血型的發(fā)現(xiàn),1900,年,ABO,血型系統(tǒng),1940,年,Rh,血型系統(tǒng),Karl Landsteiner,血型,blood type,狹義地講，存在于紅細胞上的特異性同種抗原,廣義地講，是人類遺傳多態(tài)性的一種表現(xiàn)，血,液中各種成分都有其各自型別,紅細胞血型（系統(tǒng)，抗原,是存在于紅細胞上的化學結(jié)構(gòu)，化學本質(zhì)是糖,和多肽，是紅細胞膜上的,跨膜蛋白,存在于紅細胞膜上（完全抗原），也存在于上,皮細胞以及各種體液和分泌液中（半抗原,RBC,存在于體液、分泌液中,紅細胞血型抗體,天然抗體、免疫抗體,規(guī)則抗體、不規(guī)則抗體,完全抗體，不完全抗體,同種抗體，

2、自身抗體,天然抗體和免疫抗體,天然抗體,ABO,血型系統(tǒng)中,A,型個體血漿中,天然存在抗,B,B,型個體血漿中存在抗,A,多,數(shù)天然抗體是,IgM,型，最佳反應(yīng)溫度為,室溫,或,更低,免疫抗體：一般通過輸血、妊娠、注射三種方,式接受抗原刺激，多數(shù)免疫抗體是,IgG,型，最,佳反應(yīng)溫度是,37,o,C,天然抗體和免疫抗體特性比較,規(guī)則抗體和不規(guī)則抗體,規(guī)則抗體,ABO,系統(tǒng)產(chǎn)生抗、抗是有規(guī)律的,Landsteiner,規(guī)律,型抗，型抗，型抗，抗,不規(guī)則抗體：除,ABO,系統(tǒng)外，其他系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體,均不符合上述規(guī)律,正常人血液中一般沒有不規(guī)則抗體,又稱為意外抗體,unexpected antibo

3、dy,完全抗體和不完全抗體,完全抗體,在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細胞抗體，多為,IgM,抗體,不完全抗體,能使紅細胞致敏，但在鹽水質(zhì)中不能凝集紅細胞,需要通過抗球蛋白法或其他非鹽水介質(zhì)法進行檢測，多為,IgG,抗體,抗,IgG,同種抗體、自身抗體,同種抗體：針對患者缺乏的抗原所產(chǎn)生的抗體,即為同種抗體，如,Rh,陰性者輸血后產(chǎn)生的抗,抗體,自身抗體：針對自身抗原產(chǎn)生的抗體，如引起,自身免疫型溶血性貧血,紅細胞血型,紅細胞血型分類,ISBT,The International Society of Blood,Transfusion,2002,年,29,個系統(tǒng),200,多個抗原,目前,30,個系統(tǒng),3

4、00,多個抗原,一,ABO,血型系統(tǒng),1. ABO,血型抗原和抗體特性,2.ABO,血型的遺傳與生化,1,ABO,基因型與表型,A,型,AA,AO,B,型,BB,BO,AB,型,AB,O,型,O,A,B,是顯性基因,O,是隱性基因,ABO,基因不是產(chǎn)生,ABO,抗原的遺傳密碼,2,ABO,血型的生化合成,H,基因,L,fucocyltransferase,19chr,A,基因,N-acetyl-0,galactosaminyltransferase,9chr,B,基因,galactosyltransferase,9chr,O,基因,無效基因，不產(chǎn)生轉(zhuǎn)移,酶,O,型紅細胞含有,H,物質(zhì),基因,酶

5、,合成抗原,思考,A,B,AB,型紅細胞是否存在,H,物質(zhì),3,ABH,可溶性抗原形成,分泌型血型物質(zhì),ABH,抗原存在于紅細胞,內(nèi)皮細胞、血小板、淋巴細胞、上皮細胞等,也可出現(xiàn)在除腦脊液外的分泌液中,唾液中最,豐富,Se,se,基因,與體液分泌有關(guān),Se,編碼,L-fucocyltransferase,形成分泌液中的,H,抗,原,H,也可轉(zhuǎn)化為,A,或,B,抗原,Se,不影響紅細,胞上,ABH,形成,Se,為分泌型,se,為非分泌型,19chr,分泌型血型物質(zhì)的意義,在,RBC,抗原弱表達個體中確定,ABO,血型,檢測唾液、羊水中的血型物質(zhì)，輔助鑒定血型,和預(yù)測胎兒血型,能中和天然抗體,Ig

6、M,，有助鑒別,Ab,性質(zhì),3,ABO,亞型,亞型：同一血型抗原的,結(jié)構(gòu)、性能（質(zhì),或,抗,原位點數(shù)（量,存在一定差異,A,亞型,A1,A2,A3,Ax,Ay,Am,B,亞型,B1,B2,B3,Bx,Bm,二,Rh,血型系統(tǒng),1940,年,Landerstein,和,Wiener,用恒河猴,rhesus,RBC,免疫家兔或豚鼠，得到一種,抗體，可與,85,白種人紅細胞發(fā)生反應(yīng),Rh,系統(tǒng)有,50,個抗原，最復(fù)雜，重要性僅次于,ABO,血型,1,遺傳與發(fā)育規(guī)律,胎兒早期充分發(fā)育，臍帶血,新生兒紅細胞同,成人,基因位于,1chr,分別命名為,RHD,RHCE,RHD,編碼,D,抗原,RHCE,編碼

7、不同組合的,CE,抗,原,ce,cE,Ce,CE,2,命名和種類,三種命名方式,Fisher-Race,數(shù)字命名法、現(xiàn)代命名法,Fisher-Race,命名法,CDE,命名法,3.Rh,血型種類,D,E,C,e,c,抗原的強弱次序,DECce,5.Rh,抗體,Rh,抗體產(chǎn)生,天然抗體罕見,主要通過輸血和妊娠免疫產(chǎn)生,IgG,初次免疫后,36,月出現(xiàn)，再次免疫后,3,周達高,峰,Rh,抗體種類,抗,D,抗,E,抗,C,抗,c,抗,e,ABO,和,Rh,血型系統(tǒng)的臨床意義,安全輸血的主要保證,新生兒溶血病的診斷,器官移植的必要條件,其他：遺傳學研究，法醫(yī)學鑒定,四,ABO,和,Rh,血型鑒定,常用

8、方法,鹽水介質(zhì)法、酶介質(zhì)法、抗人球蛋白法、聚凝,胺法,試管法、玻片法、微柱凝膠法,1,鹽水介質(zhì)法,salt medium test,原理：根據(jù),IgM,類抗體與紅細胞膜上特異性抗,原能發(fā)生凝集反應(yīng),正定型：已知血型抗體試劑,紅細胞,反定型：已知標準紅細胞,血清,鑒定紅細胞上血型抗原,鑒定血清中抗體,反應(yīng)條件：生理鹽水介質(zhì)，室溫，肉眼可見凝,集反應(yīng),平板法，試管法，微孔板法,試管離心法最可,信賴,應(yīng)用,ABO,血型定型,RhD,抗原定型,IgG+IgM,IgM,單克隆抗體,，交叉合血,結(jié)果判斷,注意事項（一,標準血清,健康壯年人混合血清，培養(yǎng)細胞株,的單克隆抗體,要求,高效價：抗,A,抗,B1,

9、128,高親和性,15s,內(nèi)出現(xiàn)凝集,3min,后凝集塊,1mm,2,單克隆抗體具有檢出,A2,A2B,的能力,冷凝集素效價,1,4,無菌，病毒滅活,注意事項（二,紅細胞試劑,三個健康者同型新鮮紅細胞混合,用生理鹽水洗滌三次,紅細胞懸液不能過濃或過淡,5,生理鹽水紅,細胞懸液,注意事項（三,所有器材清潔干燥,一般先加血清，后加紅細胞,反應(yīng)溫度,IgM,抗體反應(yīng)最適溫度為,4,0,C,為防,止冷凝集素干擾，采用室溫,37,0,C,反應(yīng)減弱,離心時間和速度,3000g,30s,反定型不宜用玻片法,結(jié)果核對，避免筆誤,正、反定型結(jié)果一致才能報告，否則查找原因,正反定型不一致的可能原因（一,操作技術(shù)上

10、的錯誤：主要原因,離心過度或不足,細胞與血清反應(yīng)比例不適當,陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象而未能識別,漏加試劑、結(jié)果判讀錯誤等,正反定型不一致的可能原因（二,出現(xiàn)假陰性的常見原因,某些白血病患者和難治性貧血等導(dǎo)致,ABO,抗,原減弱,免疫系統(tǒng)尚未健全的新生兒,4,月,6,月內(nèi)嬰兒,抗體水平下降的老人,亞型紅細胞抗原性弱，難以檢出,低丙種球蛋白血癥患者，血清定型時不凝集或,弱凝集,正反定型不一致的可能原因（三,出現(xiàn)假陽性的常見原因,紅細胞出現(xiàn)多凝集現(xiàn)象,嚴重腸道革蘭氏陰性桿菌感染，可使紅細胞獲得類,B,現(xiàn)象,異常的血漿蛋白升高、白蛋白,球蛋白異常，高濃度纖,維蛋白原造成假凝集現(xiàn)象,待檢血清中有不規(guī)則抗體存

11、在,右旋糖酐、靜脈注射某些造影劑等引起紅細胞,類似凝,集,方法學評價,簡單，靈敏度低，只適合,IgM,抗體,試管法：需時短，離心增強凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型,和較弱的反應(yīng)，正、反定型皆適合,玻片法：適合大規(guī)模血型普查，反應(yīng)時間長,有時漏掉弱反應(yīng)，反定型不適合,2,酶介質(zhì)法,enzymic medium test,原理和方法：主要用于,Rh,血型鑒定,IgG,抗體,蛋白水解酶,增強,IgG,抗體,的凝集作用,注意事項,Rh,血型不需作反定型,每次實驗均需作陽性、陰性對照,方法學評價,簡單經(jīng)濟,穩(wěn)定性、準確性較差，不能檢出,MN,Duffy,血,型系統(tǒng),3,抗人球蛋白實驗,Coomb,s test,原理和

12、方法,抗,IgG,待測紅細胞,抗,RhD,IgG,抗人球蛋白,紅細胞凝集,應(yīng)用延伸,檢測紅細胞,同種抗體,的經(jīng)典方法，新生兒溶血,病、溶血性輸血反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血,直接,Coombs,direct antiglobulin test, DAT,間接,Coombs,indirect antiglobulin test, IDAT,DAT,檢查紅細胞是否致敏,IDAT,檢測血清中不完全抗體,4,聚凝胺介質(zhì)法,polybrene test,原理和方法,低離子強度鹽溶液,low ionic strength salt solution,LISS,降低介質(zhì)離子強度，增加抗原抗體結(jié)合,聚凝胺,中和

13、紅細胞表面負電荷，使紅細胞發(fā)生非特異性,凝集,重懸液,resuspension,方法學評價,適于各類抗體,IgM,IgG,快速、靈敏、可靠,對檢測,Kell,血型系統(tǒng)抗體不理想，不能用肝素,抗凝,5,微柱凝膠法,gel cards with microtubes,1986,年法國人,Dr. Yves Lappierre,發(fā)明,1994,年，獲美國,FDA,認證,原理和方法,葡聚糖做成微型凝膠柱,上端為反應(yīng)室，下端凝,膠柱為抗原抗體凝集反,應(yīng)的介質(zhì),抗原與抗體結(jié)合后離心,經(jīng)過凝膠分子篩作用,游離紅細胞在凝膠底部,而與抗體結(jié)合凝集的紅,細胞位于凝膠上部或懸,浮于凝膠中,反應(yīng)室,凝膠柱,結(jié)果判讀,陽性結(jié)果：紅細胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中，和,或）出現(xiàn)溶血,注意事項,專用水平離心機,假陽性：鐮型紅細胞、巨幼紅細胞,白細胞過多,纖維蛋白原未完全去除,細菌污染，血漿蛋白異常,假陰性：抗原抗體比例不合適,不適用于直接,Coombs,陽性的紅細胞標本、酶,處理的紅細胞標本,方法學評價,靈敏度和準確性高，實驗結(jié)果重復(fù)性好，可長,時間保存,自動化程度高，實驗過程標準化,ISO9000/CE,認證,成本高,應(yīng)用延伸,用于,ABO,正反定型，交叉配血、其他血型,抗原檢測,CcEe,不規(guī)則抗體檢測,Coombs,實驗,凝膠柱,中