漢防己中生物堿的提取、分離和鑒定

1、實驗名稱實驗四 漢防己中生物堿的提取、分離和鑒定實驗班級實驗課時間課時數(shù)10分組10實驗?zāi)康模?掌握一般叔胺生物總堿的提取和純化方法。2熟悉柱色譜法分離生物堿的操作技術(shù)。3掌握生物堿的鑒定方法。實驗原理：根據(jù)大多數(shù)生物堿或生物堿鹽均能溶于乙醇的通性，利用乙醇提取總生物堿。利用季銨型生物堿易溶于水，不溶于親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用溶劑萃取法分離脂溶性生物堿和水溶性生物堿；根據(jù)漢防己甲素和乙素和酸結(jié)合成鹽而易溶于水，難溶于親脂性試劑，在堿性條件下易溶于親脂性試劑不溶于水的性質(zhì)反復(fù)處理后，再利用兩者在冷苯中溶解度的不同，使它們相互分離。或者利用兩者的極性不同，利用柱層析進(jìn)行分離。漢防己甲素 R=CH3

2、漢防己乙素 R=H實驗試藥與器材：試藥：漢防己、85%乙醇、1%鹽酸、氯仿、氨水、1%氫氧化鈉、無水硫酸鈉、氧化鋁、丙酮、環(huán)己烷、甲醇、改良碘化鉍鉀試劑、碘-碘化鉀試劑、碘化汞鉀試劑、硅鎢酸試劑等器材：回流裝置、圓底燒瓶、分液漏斗、層析柱、漏斗、薄層板、乳缽、量筒、燒杯、試管等實驗內(nèi)容與方法：一、總生物堿的提取 取漢防己粉末100g，置于500ml圓底燒瓶中，加85%乙醇300ml，水浴加熱回流1小時，濾出乙醇提取液；藥渣重新加入85%乙醇200ml同法提取1次，合并兩次提取液，過濾，濃縮至無醇味，成糖漿狀，得到總生物堿。二、精制 將上述糖漿狀提取液轉(zhuǎn)入燒杯中，加1%鹽酸調(diào)PH為2，邊加邊攪拌

3、，靜置，過濾，得澄明濾液。濾液加等體積氯仿，再加氨水調(diào)PH為10以上，于分液漏斗中振搖萃取，靜置分層后放出氯仿層，堿液再用氯仿萃取兩次，合并氯仿液。氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氫氧化鈉溶液洗2次，再用水洗2-3次后加入約5g無水硫酸鈉脫水，放置過夜，過濾，回收氯仿至少量，得漢防己總堿。三、漢防己甲素和漢防己乙素的分離1裝柱 取層析柱垂直固定在鐵架臺上，在管的下端墊入少量棉花，稱取中性氧化鋁100目20g，緩緩加入層析柱中，邊加邊輕輕振動色譜柱，使氧化鋁在柱中填實均勻。2上樣 取100mg漢防己總堿置于小蒸發(fā)皿中，用少量丙酮溶解，另加0.5g色譜用氧化鋁（作吸附劑），攪拌均勻，并于水浴上緩緩蒸

4、去溶劑。然后將含有樣品的氧化鋁裝入色譜柱的上端，并蓋一圓形濾紙。3洗脫 將色譜柱活塞打開，以正己烷-丙酮（41）洗脫，流速控制在5ml/min，收集各流分（10ml15ml/份）。4檢查 將各流分回收溶劑，依次點(diǎn)于硅膠G-CMC-Na薄層板上，用氯仿丙酮甲醇（611）為展開劑，展開，噴以改良碘化鉍鉀試劑，比較各流分的Rf值，合并相同Rf值的流分。5結(jié)晶 將合并流分的溶液濃縮至適當(dāng)體積，放置，析晶，滴加少量丙酮洗滌結(jié)晶，可得漢防己甲素、漢防己乙素結(jié)晶。 四、檢識1化學(xué)檢識 將提取的氯仿液，用1%的鹽酸萃取，得鹽酸溶液10毫升，分為四個小試管儲存，分別在四個小試管中加入改良碘化鉍鉀、碘-碘化鉀、碘化汞鉀、硅鎢酸試劑，觀察各試管中的變化，記錄在如下表格中。改良碘化鉍鉀碘-碘化鉀碘化汞鉀硅鎢酸漢防己生物堿空白2色譜檢識 色譜材料：硅膠G-CMC-Na硬板 點(diǎn)樣：漢防己總堿、漢防己甲素和漢防己乙素的0.1%醇溶液 展開劑：氯仿丙酮甲醇（611）氯仿乙醇（101）甲苯丙酮乙醇（451） 顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑 觀察記錄：記錄圖譜及斑點(diǎn)顏色 實驗注意事項：1、提取裝置的安裝要小心，不能打碎儀器。2、提取總生物堿時，回收乙醇至稀浸膏狀即可，過干時，當(dāng)加入鹽酸后會結(jié)成膠狀團(tuán)塊，影響提取效果。3、用1%氫氧化鈉溶液