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文檔簡介

1、實訓六,.,病毒液收取與血凝試驗,（,HA,）,1,一,.,試驗的目的,?,掌握雞胚培養(yǎng)病毒的收集方法,?,掌握微量血凝試驗的整個操作過程,2,二,.,試驗原理,?,一些動物紅細胞,(,如雞、豚鼠等,),以及人“,O,”,型血紅細胞上有流感病毒受體，遇流感病毒,可產(chǎn)生紅細胞凝集現(xiàn)象，簡稱血凝。,3,三,.,實驗材料,雞胚或病毒液、恒溫箱、蛋盤、鑷子、,酒精燈、,3%,的碘酊棉球、,75%,的酒精棉球、,無菌瓶子、,96,孔微量血凝反應板、微量移液,器、吸頭、微量震蕩器、生理鹽水、病毒陽,性血清、,1%,的雞紅細胞等。,4,四,.,方法步驟,?,1,收毒：,?,將蛋胚放在冰箱內(nèi)冷凍半日或一夜，使

2、血管收縮，,以便得到無胎血的純尿囊液。,?,用碘酒消毒氣室處的卵殼，并用滅菌剪刀除去氣,室的卵殼。切開殼膜及其下面的絨毛尿囊膜，翻開,到卵殼邊上。,?,將雞卵傾向一側(cè)，用滅菌吸管吸出尿囊液。一個,蛋胚約可收獲,6ml,左右尿囊液。若操作時損傷了血,管，則病毒會吸附在紅細胞上，影響后續(xù)實驗。收,獲的尿囊液經(jīng)無菌試驗后可在,4,以下的溫度中保,存。,?,觀察雞胚，看有無典型的癥狀。,5,2.,血凝試驗操作步驟,?,1),在,96,孔,V,形微量反應板上進行,自左至右各孔加,50ul,生理鹽,水。,?,2),于左側(cè)第,1,孔加,50uL,病毒原液或收獲液,混合均勻后,吸,50ul,至第,2,孔,混合

3、均勻后至,第,3,孔,依次倍比稀釋,至第,11,孔,吸棄,50ul,。稀釋后病毒稀釋度為第,1,孔,1:2,第,2,孔,1:4,第,3,孔,1:8.,最后一孔為對照。,?,3),自左向右依次向各孔加,1%,雞紅細胞,50ul,，置微型混合器上,振蕩,1,分鐘或以固定轉(zhuǎn)圈震,蕩反應板,使血球與病毒充分混合,在,37,攝氏度溫箱中作用,15-30,分鐘,待對照孔紅細胞已沉淀可觀,察結果。,?,4),判斷結果,:,以,100%,凝集的病毒最大稀釋孔為該病毒血凝價,即,一個凝集單位,不凝集者血細胞沉于孔低成點狀。沒有凝,集的紅,細胞沉積在,V,形孔的底部，把,96,孔微量血凝反應板傾斜適當,角度時成線狀流下，凝集的紅細胞成絮狀在,V,形孔的壁上，不,成線狀流下。,6,15-,分鐘,血凝試驗流程圖,振蕩,min,后,7,五,.,結果與分析,凡能使雞血紅細胞完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)，,稱為該病毒的血凝度。,8,正確讀出血凝結果,9,補充,.,實驗報告的撰寫,?,一,.,實驗目的,?,二,.,實驗原理,(,可省略,),?,三,.

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