完整版消毒劑消毒效果及有效期驗證方案

1、1/201. 概述2. 驗證范圍3. 驗證目的4. 驗證參考文件5. 驗證小組名單6. 驗證小組職責7. 驗證內容8. 結論與評價9. 再驗證周期8/ 201.概述1.1. 本公司的潔凈區(qū)分為A級、B級、C級和D級，擬定用于潔凈區(qū)表面消毒的有三 種消毒劑：75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、2%甲酚皂溶液。本次驗證方案將選用以上 3 種消毒劑分別進行驗證試驗。1.2. 消毒劑的種類、消毒對象、消毒方法和有效期見下表：序號名稱消毒對象消毒方法有效期175%乙醇用于設備表面、器具和手消毒。采用擦拭或噴灑方式密閉保存 7天20.1%新潔爾火溶液用于地面、墻面、器具、清潔布、 拖布和潔凈鞋的消毒采用擦拭

2、或浸泡方式密閉保存 7天32%甲酚皂用于水池和地漏、地面的消毒用于液圭寸密閉保存 7天備注以上消毒劑濃度均為體積分數比。1.3. 作用對象一樣的消毒劑每月輪換使用，避免表面微生物產生耐藥菌株。在利用消 毒劑進行表面擦拭消毒過程中消毒劑的作用時間應不少于10分鐘，利用消毒劑進行浸泡消毒的不少于5分鐘。1.4. 為了確認消毒劑的消毒效力，通過實驗室考察部分和現場考察部分分別進行驗證。 實驗室考察部分，定量懸浮試驗法適用于浸泡或液封方式的消毒方法；表面實驗法適用 于擦拭或噴灑方式的消毒方法。潔凈區(qū)設施表面材質有不銹鋼、鍍鋅板及玻璃三種，故 表面試驗法選用不銹鋼載片、鍍鋅板及玻璃載片模擬潔凈區(qū)設施表面

3、進行驗證試驗?，F 場考察試驗部分選擇凍干車間的配液間（C級潔凈區(qū)）、灌裝間（A/B級潔凈區(qū)）、灌裝間 操作人員手部消毒前和消毒后分別進行取樣，測定其微生物數量。1.5. A/B級潔凈區(qū)使用的消毒劑需經0.22 yn除菌過濾。2. 驗證范圍本驗證方案適用于本公司潔凈區(qū)的墻面、天花板、門窗、機器設備、儀器、操作臺、 地漏、推車、桌椅等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒等。3. 驗證目的通過消毒劑消毒效果及有效期的確認，科學制訂消毒程序，以保證各潔凈級別的操 作間及設備外表面、人員手部按照規(guī)定的消毒程序消毒能夠達到消毒防止污染的效果。4. 驗證參考文件藥品生產驗證指南（2003版）；醫(yī)療機構消毒技術

4、規(guī)范（2012年版）；中國藥 典（2010年版）;藥品GMP指南-無菌藥品、現代醫(yī)藥工業(yè)微生物實驗室質量管理 與驗證技術。5. 驗證小組名單組長姓名職務/職稱部門*經理質量部成員*車間主任生產部*QC主管質量部*QC質量部*QA主管質量部6. 驗證小組職責7. 驗證內容7.1. 驗證前參與實施驗證的人員必須已經接受本方案的培訓且考核合格。見附表 1。7.2. 驗證前準備7.2.1. 菌種7.2.1.1. 試驗微生物以金黃色葡萄球菌作為細菌繁殖體中化膿性球菌的代表；大腸桿菌作為細菌繁殖體中腸道菌的代表；白色念珠菌作為致病性真菌的代表。在上述規(guī)定的 菌、毒株的基礎上，根據消毒劑特定用途或試驗特殊需

5、要，還可增選其他菌、毒株。7.2.1.2. 75%乙醇、2%甲酚皂為中效消毒劑，0.1%新潔爾滅為低效消毒劑，均不具備 殺滅細菌芽抱功能，根據上述內容，本次驗證所用菌種見下表：序號名稱丿予列號類別1金黃色葡萄球菌CMCC(B)26 003細菌2大腸埃布困CMCC(B)44 102細菌4白色念珠菌CMCC(F)98 001真菌7.2.1.3.可接受標準：標準菌種必須來源可靠、來源可溯、保存方法與條件合適。使用的標準菌種不能超過第五代。7.2.1.4.應確認菌種名稱、來源、代數，見附表27.2.2.試劑及培 養(yǎng)基7.2.2.1.選用培養(yǎng)基見下表：予號名稱備注1營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基121 C，15min滅

6、菌備用2玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基121 C，15min滅菌備用3胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基121C，15min滅菌備用7222稀釋液、沖洗液：0.9%無菌氯化鈉溶液、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液7223可接受標準：所有試劑、培養(yǎng)基的規(guī)格、數量和保存條件滿足要求，且在有 效期內；脫水培養(yǎng)基呈流動粉末狀，無結塊，無潮解，且在有效期內。7.2.24試劑/培養(yǎng)基檢查確認記錄見附表3。7.3. 消毒劑配制：按清潔劑、消毒劑的配制與使用標準操作程序進行消毒劑配制。7.4. 定量懸浮試驗7.4.1. 目的：0.1%新潔爾滅溶液、75%乙醇溶液、2%甲酚皂溶液消毒效力的確認（定 量懸浮試驗法）。7.4.2. 菌液制備：

7、取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于3035C培養(yǎng)1824h即得，培養(yǎng)后微生物濃度應不少于105cfu/ml。取白色念珠菌接種于改 良馬丁液體培養(yǎng)基中，于 2328T培養(yǎng)2448h即得，培養(yǎng)后微生物濃度應不少于 105cfu/ml。7.4.3. 將配制好的0.1%新潔爾滅溶液（或75%乙醇溶液或2%甲酚皂溶液）按9ml/支 分注于27支無菌具塞試管中，按照“汾鐘組” “ 1（分鐘組”和“15分鐘組”共3組每組9 支，進行分組編號。7.4.4. 取供試菌液（105cfu /ml的金黃色葡萄球菌菌液，105cfu /ml的大腸埃希菌菌液， 105cfu /ml的白色念珠菌菌液）1

8、ml按照下表，分別接入到盛有9ml0.1%新潔爾滅溶液（或 75%乙醇溶液或2%甲酚皂溶液）的試管中（已進行10倍稀釋），輕輕搖動，混合均勻， 并立即開始計時。菌種名稱5分鐘組10分鐘組15分鐘組金黃色葡萄球菌1ml/支，共3支1ml/支，共3支1ml/支，共3支大腸埃布困1ml/支，共3支1ml/支，共3支1ml/支，共3支白色念珠菌1ml/支，共3支1ml/支，共3支1ml/支，共3支7.4.5 .試驗方法分別在5分鐘、10分鐘和15分鐘取接種細菌的消毒液，傾入過濾杯濾過，然后各用 0.9%無菌生理鹽水50ml清洗濾膜，濾過，重復用50ml0.9%無菌生理鹽水的洗滌共3次 取下濾膜，含細菌

9、的膜放入營養(yǎng)瓊脂平板內，含真菌的膜放入玫瑰紅鈉瓊脂平板內，含 菌膜面向上。細菌于30-35的生化培養(yǎng)箱內培養(yǎng)3天，真菌于23-28T的霉菌培養(yǎng)箱內 培養(yǎng)5天。培養(yǎng)后在明亮處，對平板上的菌落數進行計數，記錄計數結果。7.46陽性對照分別將105cfu/ml金黃色葡萄球菌菌液、105cfu/ml大腸埃希菌菌液、105cfu/ml的白 色念珠菌菌液逐級稀釋至濃度為 10100cfu/ml，取稀釋菌液1ml于平皿中，傾注冷卻 至45C營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基混勻，待凝固后于細菌于30-35的生化培養(yǎng)箱內培養(yǎng)3天，真菌于23-28C的霉菌培養(yǎng)箱內培養(yǎng)5天。培養(yǎng)結束后對平板上的 菌落數進行計數，

10、記錄計數結果。0.1%新潔爾滅溶液消毒效力確認記錄見附表475%乙醇溶液消毒效力確認記錄見附表 52%甲酚皂溶液消毒效力確認記錄見附表 67.5. 表面實驗7.5.1. 目的：由于75%乙醇溶液、0.1%新潔爾滅溶液要通過擦拭消毒，故選用不銹鋼載 片及玻璃載片進行表面試驗法，確定其消毒效力是否符合要求。7.5.2. 工作菌液制備同742.項下菌液制備。7.5.3. 染菌不銹鋼載片制備：將經滅菌的不銹鋼載片平鋪于無菌平皿內，滴加金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌含菌量為1X1085X108CFU/ml的菌液0.1ml,并均勻涂布于整個載體表面。滴染菌液后，載片置超凈工作臺晾干后備用。每種菌平

11、行制備兩個染菌不銹鋼載片；染菌玻璃載片制備：因培養(yǎng)皿的材質為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替玻 璃載片進行染菌試驗。進行菌液滴染前，用記號筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌 面積（50mrX 50mm），標注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。7.5.4. 取樣7.5.4.1. 試驗組：將消毒劑擦拭在制備好的染菌載片上，消毒劑作用時間分別為5min、10min、15min,不銹鋼載片、鍍鋅載片及玻璃載片每個作用時間分別制備2個。作用結束后，用接觸碟取樣（接觸碟規(guī)格：55mm,取樣面積為25cm2）。取金黃色葡萄球菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟；取大腸埃希菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟；取樣白色念珠菌用

12、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟。接觸碟取樣方法：打開接觸碟蓋，使無菌 培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸10秒左右，蓋上碟蓋。7.5.4.2. 對照組：對照組的活菌濃度同工作菌液的制備。陰性對照：用接觸碟在已滅 菌的載片上（未染菌片的載片）按壓取樣，操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備 兩份。7.5.5. 培養(yǎng)：將取樣金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的接觸碟倒置于3035C培養(yǎng)3天計數；取樣白色念珠菌的接觸碟倒置于 2328C培養(yǎng)5天計數計數。7.5.6. 結果計算：計算試驗組和對照組的活菌濃度（CFU/ml）,并換算為對數值（N）， 并按下式計算殺滅對

13、數值：殺滅對數值（KL）=對照組平均活菌濃度的對數值（NO）-試驗組活菌濃度對數值（NX）7.5.7. 可接受標準：殺滅對數值（KL）應不低于3個對數單位。75%乙醇溶液、0.1%新潔爾滅溶液消毒效力確認（表面實驗）見附表7。7.6.消毒效力現場考察試驗7.6.1. 目的：確認消毒劑對相應設施的實際消毒效力。7.6.2. 操作：生產車間崗位操作人員按照潔凈區(qū)操作間清潔標準操作程序、潔凈區(qū)水池、地漏清潔標準操作程序、潔凈區(qū)人員手部衛(wèi)生清潔標準操作程序、潔凈區(qū) 清潔用具清潔標準操作程序、潔凈區(qū)工作服清潔標準操作程序進行清潔消毒。分別 選取如下試驗現場：7.6.2.1. 凍干車間的配液間（C級潔凈區(qū)

14、）頂棚、墻面、地面、工作臺面，地漏、水 池；7.6.2.2. 凍干車間的灌裝間（A/B級潔凈區(qū)）頂棚、墻面、地面、工作臺面、設備表面；7.6.2.3. 凍干車間灌裝間（A/B級潔凈區(qū)）操作人員手部；7.6.2.4. 凍干車間B級潔凈區(qū)的工作鞋、清潔布、拖布。7.6.3. 取樣檢測7.6.3.1. 消毒15分鐘后，由QC人員到試驗現場，按照凍干 C線潔凈區(qū)（室）表 面微生物監(jiān)測標準操作程序進行潔凈區(qū)表面微生物的取樣檢測；7.6.3.2. 用浸泡或液封方式（地漏、水池、工作鞋、潔凈布、拖布）的采用無菌吸管 取浸泡液或液封液1ml，于胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基平板培養(yǎng)；7.6.3.3. 灌裝間（A/B級潔

15、凈區(qū)）操作人員，采用75%乙醇進行手部消毒。將配制好并 經過0.22 m除菌過濾的75%乙醇盛裝于噴壺中，灌裝間操作人員在生產開始時進行手 消毒，間隔5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘分別進行手指菌取樣。7.6.3.4. 連續(xù)逐日測定，共測定3次。記錄測定結果。7.6.4.可接受標準：所監(jiān)測的潔凈區(qū)的微生物均符合各自的潔凈級別要求。潔凈度級別表面微生物接觸碟cfu/碟（設備、設施、工作服）5指手套cfu/手套A級V 1V 1B級55C級25D級5075%乙醇溶液消毒后試驗現場表面微生物檢測記錄見附表80.1%新潔爾滅溶液消毒后試驗現場表面微生物檢測記錄見附表92%甲酚皂溶液消毒后試驗現場表面

16、微生物檢測記錄見附表1075%乙醇用于手消毒效果實驗記錄見附表 117.7. 消毒劑儲存有效期確認試驗7.7.1. 目的：通過該試驗，確定消毒劑在有效期內是穩(wěn)定的，并且消毒效力不會發(fā)生 變化，符合要求。7.7.2. 程序：7.7.2.1. 在進行消毒劑有效期確認時，每天開啟裝消毒劑的容器（具塞磨口玻璃瓶、 手消毒器、消毒液噴壺）不少于3次，其每次開啟時間在12分鐘，以模擬實際操作的 最差條件。7.722. 分別在消毒劑儲存的第3天、第5天、第7天、第10天進行取樣，進行消 毒劑消毒效力的確認。7.723. 結果計算：計算試驗組和對照組的活菌濃度（CFU/ml），并換算為對數值（N ）， 并按下

17、式計算殺滅對數值：殺滅對數值（KL）=對照組平均活菌濃度的對數值（NO）-試驗組活菌濃度對數值（NX）7.7.2.4. 可接受標準：在消毒液有效期末，殺滅對數值 （KL）應不低于3個對數單位。消毒劑儲存有效期確認記錄見附表128. 結論與評價得出最終結論，并對此驗證進行總評價。9. 再驗證周期驗證小組負責依據消毒劑消毒效果及存放時限驗證的情況，擬訂消毒劑消毒效果及 存放時限再驗證周期，報驗證委員會審批。當出現以下情況是需立即重新進行驗證：9.1. 消毒液濃度發(fā)生改變時。9.2. 增加新的消毒液時。9.3. 環(huán)境檢測中發(fā)現新的污染菌，不屬于實驗中的代表菌屬時。9.4. 消毒時間發(fā)生變化時。YZ6

18、3024XOO, 11/20附表1人員培訓記錄日期時間培訓內容消毒劑消毒效果及存放時限驗證方案清潔劑、消毒劑的配制與使用標準操作程序參與人員考核結果記錄人日期復核人日期附表2標準菌種檢查確認記錄菌種名稱困種編號來源工作菌種代次工作菌種保存條件有效期至金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色念珠菌可接受標準1. 標準困種必須來源可靠、來源可溯、保存方法與條件合適。2. 使用的標準菌種不能超過第五代。結論檢杳人日期復核人日期YZ63024XOO, 19/20附表3試劑/培養(yǎng)基檢查確認記錄名稱規(guī)格供應商名稱試劑批號失效日期營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基胰酪胨大豆 瓊脂培養(yǎng)基氯化鈉PH7.0氯化鈉蛋白胨 緩沖液

19、95%乙醇甲酚皂新潔爾火可接受標準所有試劑、培養(yǎng)基的規(guī)格、數量和保存條件滿足要求，且在有效期內； 脫水培養(yǎng)基呈流動粉末狀，無結塊，無潮解，且在有效期內。結論檢杳人日期復核人日期附表4 0.1%新潔爾滅溶液消毒效力確認與消毒劑 作用時間菌種名稱試驗組菌落數(cfu/ml)10-1平均菌落 數(cfu/ml)殺菌率1235分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃布菌白色念珠菌10分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色念珠菌15分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色念珠菌陽性對照稀釋級菌種名稱10-3-410410-5平均菌落 數(cfu/ml)金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色念珠菌確認結果評價：操作人日期復核人日期附表575%乙

20、醇溶液消毒效力確認與消毒劑 作用時間菌種名稱試驗組菌落數(cfu/ml)10-1平均菌落 數(cfu/ml)殺菌率1235分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃布菌白色念珠菌10分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色念珠菌15分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色念珠菌陽性對照稀釋級菌種名稱10-3-410410-5平均菌落 數(cfu/ml)金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色念珠菌確認結果評價：操作人日期復核人日期附表6 2%甲酚皂溶液消毒效力確認與消毒劑 作用時間菌種名稱試驗組菌落數(cfu/ml)10-1平均菌落 數(cfu/ml)殺菌率1235分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃布菌白色念珠菌10分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色

21、念珠菌15分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色念珠菌陽性對照稀釋級菌種名稱10-3-410410-5平均菌落 數(cfu/ml)金黃色葡萄球菌大腸埃布困白色念珠菌確認結果評價：操作人日期復核人日期附表775%乙醇溶液、0.1%新潔爾滅溶液消毒效力確認（表面實驗）序號消毒劑 名稱工作菌液殺滅對數平均值（KL）不銹鋼載（min）玻璃載片（min）鍍鋅載片（min）510155101551015175%乙醇金黃色 葡萄球菌大腸 埃布困白色 念珠菌20.1%新潔爾火溶液金黃色 葡萄球菌大腸 埃布困白色 念珠菌可接受標準陰性對照無菌生長；殺火對數值（KL）應不低于3個對數單位。確認結果評價:日期日期操作人

22、復核人附表875%乙醇溶液消毒后試驗現場表面微生物檢測記錄監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數可接受標準是否合格第一次第二次第三次配液間頂棚口是口否配液間墻面C級25CFU/接觸碟.口是口否配液間地面(?55mm )口是口否配液間工作臺面口是口否灌裝間頂棚A 級：v 1CFU/接觸碟B級：5CFU/接觸口是口否灌裝間墻面口是口否灌裝間地面A/B級口是口否灌裝間設備表面口是口否灌裝間工作臺面碟.1 ?55mm)口是口否工作鞋f L ii/ _L-V & X口是口否清潔布B級5CFU/接觸碟.口是口否拖布I f UUII III 1 )口是口否確認結果評價：操作人日期復核人日期附表90.1%新潔爾滅溶液消毒后試驗現場表面微生物檢測記錄監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數可接受標準是否合格第一次第二次第三次