枯草芽孢桿菌B26與戊唑醇協(xié)同防治木材藍(lán)變

1、枯草芽孢桿菌B26與戊唑醇協(xié)同防治木材藍(lán)變 枯草芽孢桿菌 B26 與戊唑醇協(xié)同防治木材藍(lán)變#韓麗1，常建民1，張柏林2，孫薇1，王雨1*5101520253035（1. 北京林業(yè)大學(xué)材料科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，北京 100083；2. 北京林業(yè)大學(xué)生物學(xué)院，北京 100083）摘要：生物-化學(xué)協(xié)同防治木材藍(lán)變，既能降低化學(xué)藥劑的使用量，又能提高生物防效的穩(wěn)定性，實(shí)現(xiàn)二者優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)、協(xié)同增效，是具發(fā)展?jié)摿Φ哪静谋Ｗo(hù)方法之一。本文以枯草芽孢桿菌 B26 為生防菌，測(cè)定 11 種化學(xué)藥劑對(duì)木材藍(lán)變菌的防效，將防效最強(qiáng)的化學(xué)藥劑與生防菌進(jìn)行復(fù)配，探討復(fù)配劑對(duì)藍(lán)變菌的室內(nèi)毒力效果，旨在構(gòu)建由生防菌與化學(xué)藥劑組成的

2、菌-藥復(fù)劑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：戊唑醇（TEB）作為菌-藥復(fù)配的化學(xué)因子，在較低使用濃度下不僅能有效抑制藍(lán)變菌的生長(zhǎng)，也能與生防菌很好的相容。將戊唑醇（0.0045mg/ml 和生防菌 B26（1107cfu/ml 復(fù)配，配比為 4:6 時(shí)對(duì)藍(lán)變菌抑制的增效作用最高，增效比為1.35。復(fù)配劑防效顯著優(yōu)于單劑戊唑醇和單劑生防菌 B26 防效，且戊唑醇使用量只有單劑使用量的 1/2，表明二者復(fù)配有明顯增效作用，且降低了化學(xué)藥劑使用量關(guān)鍵詞：木材；藍(lán)變；枯草芽孢桿菌；戊唑醇；協(xié)同中圖分類號(hào)：S781.52Synergistic Effect of Fungicides and Bacillus subti

3、lis againstWood Sap Stain FungiHAN Li1, CHANG Jianmin1, ZHANG Bolin2, SUN Wei1, WANG Yu1 1. College of Material Science and Technology, Beijing Forestry University, Beijing 100083;2. College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, Beijing100083; Abstract: Biological an

4、d chemical co-processing to prevent wood sap stain fungi, has been consideredas one of the most development potential control technique, which could reduce the usage of chemicals,but also compensate for the deficiencies of the instability of biological control effect ,so as to realizecomplementary a

5、dvantages of each other, On the basis of Bacillus subtilis B26,this research focused onthe combination of the fermentation broth and environmental -friendly chemicals , so as to build anagent composed of Bacillus subtilis B26 and chemicals. The main results are as follows:As thechemical factor of co

6、mbination research, TEB could inhibit the growth of sap stain fungi under lowerusage level, alsowas compatible with strain B26 bining 0.0045 mg/ml TEB and 1107cfu/mlBacillus subtilis B26 fermentation broth, the synergistic ratio was the highest level under the volumeratio of 4:6.The control effectiv

7、eness of compound biocide is better than two single-dose ,and TEBusage of mixture is less than half of one single TEB dose,which indicating that combination of TEBand strain B26, not only could reduce the usage of chemicals,but also promote the biocontroleffectiveness.Key words: wood; sap stain; Bac

8、illus subtilis; TEB; Synergistic基金項(xiàng)目：2012 年教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金（編號(hào) 201XXXXXXXXXX1）作者簡(jiǎn)介：韓麗 1986-10 ,女,碩士研究生,木材功能性改良通信聯(lián)系人：常建民（1956-6），男，教授，木質(zhì)生物質(zhì)能源與材料；木材功能性改良. E-mail:cjianmin-1-404550550 引言木材藍(lán)變（sap stain），是我國(guó)大多數(shù)樹(shù)種材種等級(jí)上一個(gè)非常大的缺陷，嚴(yán)重影響木材的深度開(kāi)發(fā)和高效利用，從而制約木材及其制品的銷售和使用，使我國(guó)木材加工行業(yè)遭受了巨大的經(jīng)濟(jì)損失和嚴(yán)重的資源浪費(fèi)1。針對(duì)木材藍(lán)變，主要有物理防治

9、、化學(xué)防治和生物防治三種方法。物理防治操作簡(jiǎn)單，易推廣應(yīng)用，但防效持久性差，容易吸濕再變色2?；瘜W(xué)防治效果最直接、最有效，但長(zhǎng)期不合理使用化學(xué)藥劑導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性，對(duì)人類健康與環(huán)境造成的危害不容忽視，目前越來(lái)越多的木材防藍(lán)變化學(xué)藥劑開(kāi)始被人類限制或禁止使用3。生物防治具有安全、環(huán)保、綠色的生態(tài)優(yōu)勢(shì)，但存在防效穩(wěn)定性差、發(fā)揮作用慢等問(wèn)題，大多數(shù)研究停滯于溫和的實(shí)驗(yàn)室階段，生產(chǎn)實(shí)踐中未得到大規(guī)模應(yīng)用4-7。近年來(lái)建立的生物-化學(xué)協(xié)同防治策略，既能減少化學(xué)藥劑對(duì)環(huán)境的污染，又能提高生物防效的穩(wěn)定性, 在植物病害防治領(lǐng)域得到了廣泛而深入的研究，并取得了較好的成效，但利用生防菌與化學(xué)藥劑協(xié)同防治木材

10、藍(lán)變的研究尚未見(jiàn)報(bào)道8-9。據(jù)此，本研究擬探討利用化學(xué)藥劑與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治木材藍(lán)變的效果，以期為生防制劑的開(kāi)發(fā)提供技術(shù)支持，對(duì)木材藍(lán)變的可持續(xù)防治具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。1 材料與方法1.1試驗(yàn)材料生防菌：枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）B26，由北京林業(yè)大學(xué)木質(zhì)材料科學(xué)與工程研究所木材變色生物防治課題組分離、篩選、鑒定和保存10。在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（NB）、28恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)基制備方法參照張紀(jì)忠方法11。6065藍(lán)變菌：甘薯長(zhǎng)喙殼 Ceratocystis fimbriata 、交鏈孢（Alternaria alternate）、可可球二孢（Botryo

11、diplodia theobromae）均由北京林業(yè)大學(xué)木材生物防治實(shí)驗(yàn)室分離、篩選、鑒定和保存。在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）、28恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)基制備方法參照張紀(jì)忠方法?；瘜W(xué)藥劑：11 種化學(xué)藥劑的劑型和供貨廠家見(jiàn)表 1。表 1. 供試化學(xué)藥劑的生產(chǎn)廠家與劑型Tab. 1 Manufacturer and type of fungicides藥劑名稱百菌清 CTL 多菌靈 CBZ 季銨銅（ACQ-A）四水八硼酸二鈉 DOT 8-羥基喹啉銅（Cu-8）丙環(huán)唑（PPZ）戊唑醇（TEB）檸檬酸銅 CC 二癸基二甲基氯化銨（DDAC）銅唑（CA-B）苯菌靈（Benomyl）劑型75

12、%可濕性粉劑100%可濕性粉劑70%水溶液100%可濕性粉劑100%可濕性粉劑75%水溶液100%可濕性粉劑70%水溶液70%水溶液70%水溶液100%可濕性粉劑-2-供貨廠家北京華戎農(nóng)化有限公司北京華戎農(nóng)化有限公司北京藍(lán)弋有限公司北京藍(lán)弋有限公司北京中科拓展有限公司北京中科拓展有限公司北京中科拓展有限公司北京藍(lán)弋有限公司北京中科拓展有限公司北京藍(lán)弋有限公司北京中科拓展有限公司1.2研究方法11 種常用化學(xué)藥劑對(duì)藍(lán)變菌的毒力測(cè)定將 11 種化學(xué)藥劑分別配成 0.001、0.01、0.1mg/ml 不同濃度的 PDA 培養(yǎng)基平板，將藍(lán)70變菌菌餅（直徑 6 mm） 接入含藥平板，以加等量無(wú)菌水為

13、對(duì)照（CK），每個(gè)處理三次重復(fù)。待對(duì)照組長(zhǎng)到平皿邊緣時(shí)，采用十字交叉法測(cè)量各含藥平板上的菌落直徑，計(jì)算抑制率：抑制率 % 對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑 / 對(duì)照菌落直徑-6mm 100枯草芽孢桿菌 B26 與化學(xué)藥劑的生物相容性測(cè)定將上述試驗(yàn)篩選出來(lái)的化學(xué)藥劑分別配成 0.05、0.01、0.5、0.1 mg/ml 或 ml/ml 不同濃75度的 NB 培養(yǎng)基平板。用移液器吸取 100 微升枯草芽孢桿菌 B26 的菌懸液均勻涂布于培養(yǎng)基表面，置于相對(duì)溫度 30、相對(duì)濕度 70%的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別在 2d、5d、10d時(shí)采用平板稀釋法檢測(cè)菌體生長(zhǎng)情況并取樣涂片檢查孢子萌發(fā)情況。以加等量無(wú)

14、菌水為空白對(duì)照（CK ，每個(gè)處理三次重復(fù)。80戊唑醇與枯草芽孢桿菌 B26 復(fù)配劑的毒力測(cè)定（1）單劑對(duì)藍(lán)變菌的毒力測(cè)定將單劑枯草芽孢桿菌 B26 發(fā)酵液配置成以下 5 個(gè)濃度，分別是：1106cfu/ml、1107cfu/ml、1108cfu/ml、1109cfu/ml、11010cfu/ml。同時(shí)將單劑戊唑醇配置成以下 5 個(gè)濃度梯度的藥液，分別是：0.001mg/ml、0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml。采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定單劑毒力，方法是：將兩種單劑分別配成不同濃度的 PDA 平板，859095100將藍(lán)變菌菌餅（直徑 6 mm）接入含藥平板，

15、以加入等量無(wú)菌水為空白對(duì)照（CK），每個(gè)處理三次重復(fù)。待對(duì)照組長(zhǎng)到平皿邊緣時(shí)，采用十字交叉法測(cè)量各含藥平板的菌落直徑，計(jì)算抑制率，計(jì)算方法如 。將抑制率換算成抑制機(jī)率值 Y ，根據(jù)藥劑濃度對(duì)數(shù) X 與抑制機(jī)率值 Y ，求得回歸方程 Y aX+b，并計(jì)算出各藥劑的抑制中濃度 EC50 及相關(guān)系數(shù) r 值。（2）復(fù)劑對(duì)藍(lán)變菌的毒力測(cè)定根據(jù)單劑毒力測(cè)定結(jié)果, 以戊唑醇與枯草芽孢桿菌兩種單劑的有效中濃度 EC50 為基礎(chǔ)，配制兩單劑的有效中濃度藥液。再按體積比 10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9、0:10 不同配比進(jìn)行復(fù)配。以加入等量無(wú)菌水為空白對(duì)照 CK

16、 。采用十字交叉法測(cè)量各含藥平板的菌落直徑，計(jì)算抑制率，計(jì)算方法如 。采用 Horsfall 法進(jìn)行聯(lián)合毒力增效計(jì)算12。若增效比率 IR 1 為增效作用；IR 1 為加和作用；IR 1 為拮抗作用。其計(jì)算公式為：IR E ob /E th E ob 混劑的實(shí)際防治效果E th 混劑的理論防治效果E th a+b -100aba、b 分別代表生防菌和化學(xué)藥劑以混劑中的濃度單獨(dú)使用時(shí)的防治效果。2 結(jié)果與分析2.111 種化學(xué)藥劑對(duì)藍(lán)變菌的毒力測(cè)定由表 2 可知，11 種化學(xué)藥劑對(duì)藍(lán)變菌的生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用，每種化學(xué)藥劑對(duì)不同藍(lán)變菌的抑制效果各不相同，部分化學(xué)藥劑僅對(duì)其中的一種或兩種藍(lán)變

17、菌起到抑制效-3-105110果。如丙環(huán)唑 PPZ 在最高試驗(yàn)濃度下對(duì)交鏈孢和可可球二孢的抑制率均達(dá)到 75%以上，而對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼的抑制率低于 50%。在較低使用濃度下對(duì)三種藍(lán)變菌均具有較好抑制效果的化學(xué)藥劑是：戊唑醇（TEB）、苯菌靈（Benomyl）、銅唑（CA-B）、二癸基二甲基氯化銨（DDAC）、8-羥基喹啉銅（Cu-8）、季銨銅（ACQ-A）。這 6 種化學(xué)藥劑將繼續(xù)進(jìn)行下一步試驗(yàn)，測(cè)定其與生防菌的生物相容性，只有與生防菌良好相容的化學(xué)藥劑才能作為復(fù)配研究的化學(xué)因子。表 2. 11 種化學(xué)藥劑對(duì)藍(lán)變菌的毒力測(cè)定Tab.2 The toxicity determination of e

18、leven chemical agents on sap stain fungi化學(xué)藥劑種類百菌清 CTL 多菌靈 CBZ 季銨銅（ACQ-A）四水八硼酸二鈉 DOT 8-羥基喹啉銅（Cu-8）丙環(huán)唑（PPZ）戊唑醇（TEB）檸檬酸銅 CC 二癸基二甲基氯化銨（DDAC）銅唑（CA-B）苯菌靈（Benomyl）濃度0.001 mg/ml 0.01 mg/ml 0.1 mg/ml 0.001 mg/ml 0.01 mg/ml 0.1 mg/ml 0.001 ml/ml 0.01 ml/ml 0.1 ml/ml 0.001 mg/ml 0.01 mg/ml 0.1 mg/ml 0.001 mg/m

19、l 0.01 mg/ml 0.1 mg/ml 0.001 ml/ml 0.01 ml/ml 0.1 ml/ml 0.005 mg/ml 0.01 mg/ml 0.1 mg/ml 0.001 ml/ml 0.01 ml/ml 0.1 ml/ml 0.001 ml/ml 0.01 ml/ml 0.1 ml/ml 0.001 ml/ml 0.01 ml/ml 0.1 ml/ml 0.001 mg/ml 0.01 mg/ml 0.1 mg/ml 交鏈孢1316272124208154619245332557518275565.277.386.59.41935.751.461.677.430.859.5

20、88.960.68592.4抑制率（%）可可球二孢2529412831360195125345529418322345815.256.710014.525.131.74052.877.222478057.287.7100甘薯長(zhǎng)喙殼18215161015624607174018366822304472.779.690.57.315.136.67382.989.357.468.481.847.972.6100-4-2.2枯草芽孢桿菌 B26 與化學(xué)藥劑的相容性測(cè)定通過(guò)測(cè)定 6 種化學(xué)藥劑對(duì)生防菌菌落形成、孢子萌發(fā)的影響（表 3、表 4），可得如下115120125結(jié)論：6 種化學(xué)藥劑與生防菌株 B

21、26 的相容性各不相同，其中季銨銅（ACQ-A）、銅唑（CA-B）、苯菌靈（Benomyl）、8-羥基喹啉銅（Cu-8）在較高濃度下對(duì)菌落形成和孢子萌發(fā)產(chǎn)生了不同程度的抑制作用，而戊唑醇（TEB）、二癸基二甲基氯化銨（DDAC）對(duì)菌體生長(zhǎng)或孢子萌發(fā)均未產(chǎn)生抑制作用，且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)菌體數(shù)與孢子數(shù)保持穩(wěn)定，說(shuō)明戊唑醇（TEB）、二癸基二甲基氯化銨（DDAC）與生防菌株相容性最好，具有與生防菌協(xié)同使用的潛力。由于二癸基二甲基氯化銨（DDAC）對(duì)藍(lán)變菌的抑制效果不及戊唑醇（TEB），綜合考慮化學(xué)藥劑對(duì)藍(lán)變菌的抑制效果和與生防菌的生物相容性，選擇戊唑醇（TEB）為構(gòu)建菌藥復(fù)劑的化學(xué)因子。表 3.

22、化學(xué)藥劑對(duì)枯草芽孢桿菌 B26 菌體生長(zhǎng)的影響Tab.3 The effect of fungicides on thallus of Bacillus subtilis B26 strain化學(xué)藥劑種類濃度生防菌 B26 的菌體生長(zhǎng)情況2d5d10d cfu/ml 顯著性測(cè)試（P 0.05 60.1 mg/ml + + 1.86107cb苯菌靈（Benomyl）二癸基二甲基氯化銨（DDAC）戊唑醇（TEB）0.05 mg/ml + + 2.151070.01 mg/ml + + 2.33107CK mg/ml + + 2.881080.5 ml/ml + + 1.451070.1 ml/ml

23、 + + 1.831070.05 ml/ml + + 2.561070.01 ml/ml + + 2.85108CK ml/ml + + 2.721080.5 mg/ml + + 1.981070.1 mg/ml + + 2.321070.05 mg/ml + + 2.651070.01 mg/ml + + 2.76107CK mg/ml + + 2.53107bbacccbacbaaa0.5 ml/ml c0.1 ml/ml + 1.25107c銅唑（CA-B）0.05 ml/ml + + 1.961070.01 ml/ml + + 2.24107CK ml/ml + + 2.95108cb

24、a0.5 mg/ml c0.1 mg/ml c8-羥基喹啉銅（Cu-8）0.05 mg/ml + 1.151060.01 mg/ml + + 1.86107CK mg/ml + + 2.95108bba0.5 ml/ml c0.1 ml/ml c季銨銅（ACQ-A）0.05 ml/ml + + 1.961070.01 ml/ml + + 2.24107CK ml/ml + + 2.79108cca注：“+”表示正常生長(zhǎng)；“+”表示能生長(zhǎng)，但較對(duì)照菌落數(shù)少；“+”表示零星生長(zhǎng)；“”表示不生長(zhǎng)。所有數(shù)值均為平均值。-5-表 4.化學(xué)藥劑對(duì)枯草芽孢桿菌 B26 孢子萌發(fā)的影響Tab.4 The ef

25、fect of Benomy fungicides on spore of Bacillus subtilis B26 strain化學(xué)藥劑種類使用濃度生防菌 B26 的孢子萌發(fā)情況2d5d10d（cfu/ml 顯著性測(cè)試（P 0.05 0.5 mg/ml 0.1 mg/ml +1.861055cc苯菌靈（Benomyl）0.05 mg/ml 0.01 mg/ml CK mg/ml +2.32102.53102.6810555bba0.5 ml/ml +2.05105c二癸基二甲基氯化銨（DDAC）戊唑醇（TEB）0.1 ml/ml 0.05 ml/ml 0.01 ml/ml CK ml/ml

26、 0.5 mg/ml 0.1 mg/ml 0.05 mg/ml +552.83105562.361062.76106bbbacba0.01 mg/ml CK mg/ml +3.82102.861066aa0.5 ml/ml 0.1 ml/ml +1.45104cc銅唑（CA-B）8-羥基喹啉銅（Cu-8）0.05 ml/ml 0.01 ml/ml CK ml/ml 0.5 mg/ml 0.1 mg/ml 0.05 mg/ml 0.01 mg/ml +1.8310552.351051.451041.83104cbacccbCK mg/ml +2.56105a0.5 ml/ml 0.1 ml/ml

27、 +4cc季銨銅（ACQ-A）0.05 ml/ml 0.01 ml/ml CK ml/ml +552.62105cca130注：“+”表示孢子萌發(fā)很好，且數(shù)量較多；“+”表示能萌發(fā)，但較對(duì)照菌落數(shù)少；“+”表示零星萌發(fā)；“”表示不萌發(fā)。所有數(shù)據(jù)是在 P 0.05 水平上。CK 為對(duì)照組，加入無(wú)菌水。2.3戊唑醇與枯草芽孢桿菌 B26 復(fù)配劑的毒力測(cè)定單劑對(duì)三株藍(lán)變菌的毒力測(cè)定單劑戊唑醇對(duì)三株藍(lán)變菌的毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 5，由表可知戊唑醇對(duì)三株藍(lán)變菌（交鏈135孢、可可球二孢、甘薯長(zhǎng)喙殼）的抑制中濃度 EC50 分別為 0.0043mg/ml、0.0059mg/ml、0.0031mg/ml，計(jì)算可

28、得三者平均值為 0.0045mg/ml。因此戊唑醇的平均抑制中濃度為0.0045mg/ml。-6-140表 5. 單劑戊唑醇對(duì)三株藍(lán)變菌的毒力測(cè)定Tab.5 Toxicity determination of TEB to three sap stain fungi藍(lán)變菌濃 度 mg/ml 濃度對(duì)數(shù)（X）菌落直徑（mm）抑制率（%）幾率值（Y）Y aX+bEC50 mg/ml r0.0010.005-3.00-2.3029.826.158.865.25.225.39交鏈孢0.01-2.0019.177.35.62Y 0.4453X+6.5010.00430.98730.050.10.0010.

29、005-1.30-1.00-3.00-2.3016.713.834.728.681.586.556.760.45.906.105.175.26可可球二孢0.01-2.0022.369.25.50Y 0.4121X+6.3310.00590.95590.050.10.0010.005-1.30-1.00-3.00-2.3019.2027.524.380.1100.062.472.75.858.725.325.61甘薯長(zhǎng)喙殼0.01-2.0019.779.65.83Y 0.4661X+6.7110.00310.98520.050.1-1.30-1.0016.512.484.490.56.016.3

30、1單劑枯草芽孢桿菌 B26 發(fā)酵液對(duì)三株藍(lán)變菌（交鏈孢、可可球二孢、甘薯長(zhǎng)喙殼）的毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 6，由表可知枯草芽孢桿菌發(fā)酵液對(duì)三株藍(lán)變菌的抑制中濃度均為1107cfu/ml，因此枯草芽孢桿菌 B26 的抑制中濃度為 1107cfu/ml。145表 6. 單劑枯草芽孢桿菌 B26 對(duì)三株藍(lán)變菌的毒力測(cè)定Tab.6 Toxicity determination of Bacillus subtilis B26 to three sap stain藍(lán)變菌濃 度 cfu/ml 濃度對(duì)數(shù)（X）菌落直徑（mm）抑制率（%）幾率值（Y）Y aX+bEC50 cfu/ml r110611076741.3

31、27.532.154.74.545.12交鏈孢1108821.364.95.38Y 0.327X+2.70811070.9798110911010110611079106714.911.46050.475.581.329.440.75.695.894.464.76可可球二孢1108824.271.55.57Y 0.459X+1.70811070.978511091101091014.510.582.987.65.956.16甘薯長(zhǎng)喙殼1106670.110.53.75Y 0.458X+1.10411070.97681107754.330.74.49-7-1108110911010891050.

32、727.221.655.265.272.44.625.395.59復(fù)劑對(duì)三株藍(lán)變菌的聯(lián)合毒力測(cè)定根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，將 0.0045mg/ml 的戊唑醇與 1107cfu/ml 的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液，以不同體積比進(jìn)行復(fù)配，二者的聯(lián)合毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 7。由表可知，復(fù)配劑對(duì)交鏈孢防效150155表現(xiàn)為增效作用的配比是 6:4、5:5、4:6；對(duì)可可球二孢的防效表現(xiàn)為增效作用的配比是 5:5、4:6、3:7；對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼的防效表現(xiàn)為增效作用的配比是 6:4、5:5、4:6、3:7，同時(shí)對(duì)三株菌表現(xiàn)為增效作用的復(fù)配比例有 5:5 與 4:6。綜合考慮增效比率 IR 值的高低，復(fù)配比例為 4:6時(shí)的增效

33、值相對(duì)高于 5:5，因此選取體積比 4:6 作為最佳復(fù)配比。表 7. 二者復(fù)配對(duì)三株藍(lán)變菌的聯(lián)合毒力測(cè)定Tab.7 Synergic toxicity of TEB and Bacillus subtilis B26 on three sap stain fungi藍(lán)變菌交鏈孢可可球二孢甘薯長(zhǎng)喙殼戊唑醇:枯草芽孢桿菌B2610:09:18:27:36:45:54:63:72:81:90:10CK10:09:18:27:36:45:54:63:72:81:90:10CK10:09:18:27:36:45:54:63:72:81:90:10CK抑菌圈直徑/mm23.818.316.815.29.5

34、8.96.316.219.321.435.955.830.520.219.616.220.26.212.88.325.628.335.850.532.524.223.621.87.515.68.221.226.428.938.358.6實(shí)際防治效果E ob /%57.367.269.972.882.984.188.770.965.461.635.739.660.161.267.960.187.774.783.649.343.929.144.558.759.762.887.273.48664.754.950.734.6理論防治效果E th /%73.573.573.573.573.573.573

35、.573.573.573.573.561.361.361.361.361.361.361.361.361.361.361.363.763.763.763.763.763.763.763.763.763.763.7增效比率IR0.910.950.991.131.141.210.960.890.840.980.990.960.981.431.221.360.800.720.920.940.991.271.151.351.020.860.80-8-3 討論目前，生產(chǎn)實(shí)踐中多采用五氯酚類化合物和鉻砷酸銅 CCA 等傳統(tǒng)型木材防藍(lán)變藥劑來(lái)防治木材藍(lán)變，而此類化學(xué)藥劑的使用越來(lái)越多的受到限制；生物防治木材

36、藍(lán)變的報(bào)道較少，其中一個(gè)重要原因就是生防菌防治效果不穩(wěn)定。鑒于此, 探索有效防治木材藍(lán)變的新技術(shù)就160165170175180185190195顯得尤為重要。本研究突破以化學(xué)藥劑為主防治木材藍(lán)變的局限性，嘗試協(xié)同使用生防微生物與低毒化學(xué)藥劑防治木材藍(lán)變。室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，戊唑醇與枯草芽孢桿菌 B26 復(fù)配劑（4:6，體積比）對(duì)藍(lán)變菌的抑制有明顯的增效作用，增效比值為 1.35。從防治效果來(lái)看，復(fù)配劑防效明顯優(yōu)于 2 個(gè)單劑，并且復(fù)配劑中戊唑醇用量只有單劑的 1/2。研究說(shuō)明利用生物和化學(xué)協(xié)同控制技術(shù), 可以降低使用受限的化學(xué)藥劑使用量，延緩病原菌對(duì)化學(xué)藥劑的抗藥性，并提高生防菌防效穩(wěn)定性，對(duì)木材藍(lán)變的可持續(xù)防治具有十分重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。一些研究表明，使用化學(xué)藥劑可以幫助生防微生物克服病原菌在內(nèi)的自然環(huán)境中習(xí)居微生物的排斥作用,使生防微生物能夠順利地在各種自然生態(tài)環(huán)境中定殖,形成優(yōu)勢(shì)種群并有足夠群體數(shù)量，從而更好地發(fā)揮生物防治作用13。本研究中枯草芽孢桿菌與戊唑醇協(xié)同防治木材藍(lán)變，提高生防效果的同時(shí)減少了化學(xué)藥劑使用量。菌藥復(fù)劑的防治作用綜合了生防菌與化學(xué)藥劑的作用方式，二者實(shí)現(xiàn)協(xié)同增效的具體作用機(jī)制還有待深入研究，從而更好的指導(dǎo)菌劑