微生物的實驗室培養(yǎng)一輪

1、專題二 微生物的培養(yǎng)與應用,課題一 微生物的實驗室培養(yǎng),1、形態(tài)：球形、桿形、螺旋形。,一、細菌,2、繁殖 二分裂,20分鐘30分鐘，分裂一次,無鞭毛的球菌：菌落較小較厚、邊緣整齊. 有鞭毛的細菌：菌落大而扁平、邊緣波狀或鋸齒狀.,問：菌落在生態(tài)學 上屬于什么單位？,二、菌 落,菌落可以作為菌種 鑒定的重要依據。,單個或者少數細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體。,幾種菌落,一、微生物的實驗室培養(yǎng),（一）培養(yǎng)基,人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質,一般的培養(yǎng)基均需要碳源、氮源、生長因子、無機鹽和水等。,1、培養(yǎng)基的基本成

2、分,不同培養(yǎng)基要滿足不同微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質及氧氣的需求。,2、培養(yǎng)基的種類,（1）按物理狀態(tài)來分： 分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基(還有半固體)。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。 （2）按功能來分： 分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。 （3）按成分來分： 分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。,（二）無菌技術,消毒,滅菌,使用較為溫和的方法來殺死部分對人體有害的微生物。,對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行 ； 將培養(yǎng)皿、接種用具進行 ； 接種的過程要在 附近進行。,使用較為強烈的理化因素殺死物體內外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。,清潔消毒,滅菌,酒精燈,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min

3、 2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源 4、紫外線消毒 ,(1)消毒的方法：,1.灼燒滅菌：接種用具和接種過程中的試管口或瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進行灼燒滅菌。,（2）常用的滅菌方法,2.干熱滅菌：將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥的物品放到干熱滅菌箱內，在160170OC中加熱12h即可。,3.高壓蒸汽滅菌：將需滅菌的物品放到盛有水的高壓滅菌鍋內（見教材16頁圖2-4）煮沸，待冷空氣排盡后，密閉繼續(xù)加熱至鍋內壓力到100kPa，溫度到121OC后，維持1530min即可。,

4、二、實 驗 操 作,（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,1.計算,2.稱量,3.溶化,4.滅菌,5.倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50OC左右（P17）,平板冷凝后，為什么要將平板倒置？,平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。,（二）純化大腸桿菌,1.平板劃線法,在數次劃線后可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體稱菌落。,1、為什么在操作的第一步以及劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)？,殺滅殘留在接種環(huán)的微生物。,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷

5、卻后再進行劃線？ 3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？,以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。,2.稀釋涂布平板法,稀釋涂布平板法操作過程分兩個步驟，即系列稀釋操作和涂布平板操作。,系列稀釋操作,(1)將分別盛有9mL水的試管滅菌并編號。,(2)用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中，輕壓橡皮頭，吹吸三次使之充分混勻。,(3)從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入第三支試管中，重復步驟2，直至到第六

6、支試管。,涂布平板操作（P19）,(1)將涂布器浸在盛有70的酒精的燒杯中。,(2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培養(yǎng)基表面。,(3)將沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷卻810s。,(4)用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。,涂布平板操作后，37度恒溫培養(yǎng)，如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可能的原因。,無菌操作未達到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染。,兩種純化細菌的方法的比較,1、下面是對大腸桿菌進行數量測定的實驗，請回答有關問題。 實驗步驟： (1)制備稀釋倍數為102、103、104、105、106的系列稀釋液

7、。 (2)為了得到更加準確的結果，你選用_法接種樣品。 (3)適宜溫度下培養(yǎng)。 結果分析： (1)測定大腸桿菌數時，在對應稀釋倍數為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計結果，正確可信的是_，其理由是_ 。 A一個平板，統(tǒng)計的菌落數是230 B兩個平板，統(tǒng)計的菌落數是220和260，取平均值240 C三個平板，統(tǒng)計的菌落數分別是210、50和520，取平均值260 D四個平板，統(tǒng)計的菌落數分別是210、300、240和250，取平均值250 (2)一同學在稀釋倍數為105的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數的平均值為234，那么每毫升樣品中的菌落數是_(涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1 mL)。,稀釋涂布平板,D,在設計實驗時，一定要涂布至少三個平板作為重復組，才能增強實驗的說服力與準確性；在分析實驗結果時，要考慮所設置的重復組的結果是否合理,2.34108,(3)用這種方法測定的大腸桿菌密度，實際活菌數量要比測得的數量_，因為_,多,當兩個或多個細菌連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落,2制備牛肉膏蛋白胨固體