實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采血完全指南

1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采血完全指南 凡用血量較少的檢驗(yàn)如紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白的測(cè)定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組 織取毛細(xì)血管的血。當(dāng)需血量較多時(shí)可作靜脈采血。靜脈采血時(shí)，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開(kāi)始， 以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。例如，研究毒物對(duì)肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比 較動(dòng)、動(dòng)脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、CI-離子濃度，必須采取動(dòng)脈血液。采 血時(shí)要注意：采血場(chǎng)所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25-28 C,冬季，15-20 C為宜；采血用具 有采用部位一般需要進(jìn)行消毒；采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；若需抗凝全血，在注射器 或

2、試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑 . 1.取少量血 a.尾靜脈 大鼠、小鼠 b.耳靜脈 兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊 C.眼底靜脈叢 兔、大鼠、小鼠 C.舌下靜脈 兔 d.腹壁靜脈 青蛙、蟾蜍 e.冠、腳蹼皮下靜脈雞、鴨、鵝 2 .取中量血 a. 后肢外側(cè)皮下小隱靜脈狗、猴、貓 b. 前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈狗、猴、貓 c. 耳中央動(dòng)脈 d. 頸靜脈 e. 心臟 f. 斷頭 g. 翼下靜脈 h. 頸動(dòng)脈 兔 狗、貓、兔 豚鼠、大鼠、小鼠 大鼠、小鼠 雞、鴨、鴿、鵝 雞、鴨、鴿、鵝 3 .取大量血 a.股動(dòng)脈、頸動(dòng)脈狗、猴、貓、兔 b.心臟 C.頸靜脈 d.摘眼球 狗、猴、貓、兔 馬、牛、山羊、綿羊 大鼠、小鼠

3、采動(dòng)物品種 最大安全采血量 （ml） 最小致死采血量 （ml） 小鼠 0.2 0.3 大鼠 1 2 豚鼠 5 10 兔 10 40 狼狗 100 500 獵狗 50 200 猴 15 60 1. 割（剪）尾采血 當(dāng)所需血量很少時(shí)采用本法。 固定動(dòng)物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒，然后浸在45C 左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。再將尾擦干，用銳器（刀或剪刀 ）割去尾尖 0.3-0.5cm ，讓血液 自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口，割 破尾動(dòng)脈或靜脈，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠 0.3 0

4、.5ml。 2. 鼠尾刺血法 大鼠用血量不多時(shí) （僅做白細(xì)胞計(jì)數(shù)或血紅蛋白檢查 ），可采用本法。先將鼠尾用溫水擦 拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用 7號(hào)或8號(hào)注射針頭，刺入鼠尾靜脈，拔出針頭時(shí)即有血 滴出，一次可采集 1050mm3。如果長(zhǎng)期反復(fù)取血，應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐漸向近心端 穿刺。 3. 眼眶靜脈叢采血 采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部 （大鼠采血需帶上紗手 套），應(yīng)防止動(dòng)物窒息。當(dāng)取血時(shí)左手拇指及食指輕輕壓迫動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)，使眶后靜脈叢充血。右手 持續(xù)接7號(hào)針頭的1ml注射器或長(zhǎng)頸（34cm）硬質(zhì)玻璃滴管（毛細(xì)管內(nèi)徑0.5-1.0mm），使采血器與

5、鼠 面成45 C的夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180度使斜面對(duì)著眼眶后界。刺入 濃度，小鼠約23mm，大鼠約45mm。當(dāng)感到有阻力時(shí)即停止推進(jìn)，同時(shí)，將針退出約0.1-0.5mm， 邊退邊抽。若穿刺適當(dāng)血液能自然流入毛細(xì)管中，當(dāng)?shù)玫剿璧难亢螅闯ゼ佑陬i部的壓力，同 時(shí)，將采血器拔出，以防止術(shù)后穿刺孔出血。 若技術(shù)熟練，用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均無(wú)多大困難。 左右兩眼輪換更好。體重 20-25g 的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml ；體重 200-300g 大鼠每次可采血 0.5-1.0ml ，可適用于某些生物化學(xué)項(xiàng)目的檢驗(yàn)。 4. 斷頭取血 采血者的左手拇指和食指以背

6、部較緊地握住大 （小）鼠的頸部皮膚，并作動(dòng)物頭朝下傾的姿 勢(shì)。右手用剪刀猛剪鼠頸，約1/2-4/5的頸部前剪斷，讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.81.2ml; 大鼠約 5-10ml 。 5. 心臟采血 鼠類的心臟較小，且心率較快，心臟采血比較困難，故少用?；铙w采血方法與豚鼠相同。 若做開(kāi)胸一次死亡采血，先將動(dòng)物作深麻醉，打開(kāi)胸腔，暴露心臟，用針頭刺入右心室，吸取血液。 小鼠約 0.5-0.6ml ；大鼠約 0.8-1.2ml 。 6. 頸動(dòng)靜脈采血 先將動(dòng)物仰位固定，切開(kāi)頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織，使頸靜脈充分暴露，可用注 射器吸出血液。在氣管兩側(cè)分離出頸動(dòng)脈，離心端結(jié)扎，向心端剪口將血滴入

7、試管內(nèi)。 7. 腹主動(dòng)脈采血 最好先將動(dòng)物麻醉，仰臥固定在手術(shù)架上，從腹正中線皮膚切開(kāi)腹腔，使腹主動(dòng)脈清 楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血?；蛴脽o(wú)齒鑷子剝離結(jié)締組織，夾住動(dòng)脈近心端，用尖頭手術(shù) 剪刀，剪斷動(dòng)脈，使血液噴入盛器。 8. 股動(dòng)（靜）脈采血 先由助手握住動(dòng)物，采血者左手拉直動(dòng)物下肢，使靜脈充盈。或者以搏動(dòng)為指標(biāo)， 右手用注射器刺入血管。體重15-20g小鼠采血約0.2-0.8ml，大鼠約040.6ml。 正在做小鼠腫瘤動(dòng)物模型方面的實(shí)驗(yàn)，對(duì)于小鼠的取血方法，效果比較滿意： 1尾動(dòng)脈針刺取血：將小鼠固定后，用2 5 G （5號(hào)）針頭，在遠(yuǎn)端垂直刺入為正中動(dòng)脈，用2 0 0 ul微 量

8、吸管吸取。該方法一次可以取0.2-0.3ml，比較安全可靠，可多次反復(fù)采血。 2小鼠心臟穿刺采血：需技術(shù)熟練，不過(guò)可以獲得較多血標(biāo)本。小鼠麻醉后固定，一助手用刀柄推擠右側(cè) 胸廓，使心臟相對(duì)固定，取血者用2 9G胰島素注射針在心尖搏動(dòng)最強(qiáng)處或第三肋間胸骨左緣4mm處進(jìn) 針，刺入8-10 mm后，便回抽便緩慢拔出針，見(jiàn)到血液回流后，固定針頭，抽取需的血標(biāo)本量。技術(shù) 熟練可以多次取血，間隔2 3天。 總結(jié)一下小鼠采血的幾個(gè)問(wèn)題： 1。 最大安全采血量：小鼠循環(huán)血量占體重的6%，或50-70mi/kg 采血占全血量的10%不會(huì)對(duì)機(jī)體造成嚴(yán)重的不良影響。3-4周后可以重新采集一次。 特別注意的是：老年小

9、鼠血量降低。疾病會(huì)加重不良反應(yīng)，所以必須考慮這些影響因素。 采血后應(yīng)補(bǔ)充響應(yīng)體積的液體 如果需要很短時(shí)間反復(fù)采血，比如每天一次，每次的采血量不應(yīng)超過(guò)全血的1%。 30g*6%=血量 1.8mls 1.8mls*10%=0.18mls（ 最大安全采血量） 2。隱靜脈米血法 隱靜脈采血法是小量、反復(fù)小鼠采血的常用方法。特點(diǎn)是不用麻醉 3。頸靜脈采血法 隱靜脈采血法也是小量、反復(fù)小鼠采血的常用方法。特點(diǎn)是需要麻醉 4。心臟穿刺采血法。 麻醉動(dòng)物 將動(dòng)物仰放 局部酒精消毒 ，用塑料注射器，從動(dòng)物的左側(cè)胸部，肋沿下，心尖部向右側(cè) 15-30度角刺入心臟，給小負(fù)壓，小心操作. 采用大鼠股動(dòng)脈采血。你可以先

10、仔細(xì)分離股動(dòng)脈，然后找醫(yī)用最小號(hào)的靜脈留置針，它是有個(gè)針芯的，小 心一點(diǎn)還是很容易進(jìn)針，固定好針頭，如果您的大鼠不需要再繼續(xù)存活的話，只需要把試管放在那讓它自 然放血，一次采血 5 8ml是沒(méi)有問(wèn)題的。 從頸總或者腹主都可以取出5-6ml。200g的大鼠大概有10ml的血。 抗凝方法： 1, 乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-NA2）濃度10%,每0.1ml可使5ml血液不凝固.可用于血液學(xué)檢驗(yàn). 2, 草酸鹽合劑 草酸銨6.0g,草酸鉀4.0g,水定容到100ml,每0.1ml可使5ml血液不凝固.可用于血液學(xué)檢驗(yàn). 3, 枸櫞酸鈉 濃度3.8%,每0.5ml可使5ml血液不凝固.但僅使用于血沉檢

11、驗(yàn). 4, 肝素 濃度0.5-1.0%,每1ml可使3-5ml血液不凝固.可用于血液有機(jī)成分與無(wú)機(jī)成分的測(cè)定，需要冰箱保 存. 作用原理： EDTA-NA2通過(guò)奪取血液中的鈣離子，以阻止凝固. 草酸鹽合劑與鈣離子結(jié)合，形成草酸鈣沉淀，以阻止凝固. 枸櫞酸鈉與鈣離子形成非離子的可溶性化合物而阻止血凝。 肝素阻止血液中的凝血酶原形成凝血酶而阻止凝集 常用的血液抗凝劑 1、 1%肝素溶液0.1ml于試管內(nèi)，旋轉(zhuǎn)試管，使溶液均勻浸濕試管內(nèi)壁，放入80100 C烘箱烤干，每管 能使510ml血液不凝。急性血壓實(shí)驗(yàn)時(shí)可在充滿生理鹽水的動(dòng)脈套管內(nèi)注入肝素2025mg。體內(nèi)抗凝： 500 1000u/kg 。 市售的肝素注射液每1ml含肝素12500u （相當(dāng)于肝素鈉125mg，即1mg相當(dāng)于100u ）。應(yīng)置冰箱內(nèi)保存。 2、 枸櫞酸鈉3.8%的枸櫞酸鈉溶液1份可使9份血液不凝，用于紅細(xì)胞沉降速率的測(cè)定。因其抗凝血作用 較弱而堿性