化妝品中顏料橙(CI12075)等五種禁用著色劑的檢測方法

1、附件15：化妝品中顏料橙5（CI 12075）等5種禁用著色劑的檢測方法1 適用范圍本方法規(guī)定了唇膏、散粉和指甲油類化妝品中酸性黃36（CI 13065）、顏料橙5（CI 12075）、顏料紅53:1（CI 15585:1）、蘇丹紅（CI 12140）和蘇丹紅（CI 26105）的高效液相色譜測定方法。本方法適用于唇膏、散粉和指甲油類化妝品中酸性黃36、顏料橙5、顏料紅53:1、蘇丹紅和蘇丹紅的測定。2 方法提要樣品經(jīng)溶劑提取后，用高效液相色譜儀分離，二極管陣列檢測器檢測，以保留時(shí)間和紫外-可見光譜圖定性，峰面積外標(biāo)法定量。必要時(shí)，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行確證。本方法對酸性黃36、顏料橙5

2、、顏料紅53:1、蘇丹紅和蘇丹紅的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度見表1。表1 5種著色劑的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度著色劑名稱檢出限（ng）定量下限（ng）檢出濃度（g/g）最低定量濃度（g/g）酸性黃362.05.03.06.0顏料橙52.05.03.06.0顏料紅53:15.08.04.010.0蘇丹紅2.05.03.06.0蘇丹紅2.05.03.07.03 試劑和材料除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為實(shí)驗(yàn)室用一級水。3.1 乙腈，色譜純。3.2 甲醇，色譜純。3.3 四氫呋喃，色譜純。3.4 二甲基亞砜。3.5 乙醇，色譜純。3.6 四丁基氫氧化銨，濃度為55

3、%。3.7 檸檬酸。3.8 氨水，濃度為2528%。3.9 酸性黃36，純度99%。3.10 蘇丹紅，純度94%。3.11 蘇丹紅，純度90%。3.12 顏料橙5，純度97%。3.13 顏料紅53:1，純度95%。3.14 酸性黃36標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（=500 g/mL）：稱取酸性黃36（3.9）對照品50 mg（精確至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.2）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得500 g/ mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。3.15 蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（=500 g/mL）：稱取蘇丹紅（3.10）對照品50 mg（按實(shí)際含量折算，精確至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用四氫

4、呋喃（3.3）和乙腈（3.1）混合液（體積比 1:9）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得500 g/ mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。3.16 蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（=500 g/mL）：稱取蘇丹紅（3.11）對照品50 mg（按實(shí)際含量折算，精確至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得500 g/ mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。3.17 顏料橙5標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（=250 g/mL）：稱取顏料橙5（3.12）對照品25 mg（按實(shí)際含量折算，精確至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用四氫呋喃（3.3）、二甲基亞砜（3.4）和乙腈（3.1）的混合溶液（體積比5:1:4）溶

5、解并稀釋至刻度，搖勻，即得250 g/ mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。3.18 顏料紅53:1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（=250 g/mL）：稱取顏料紅53:1（3.13）對照品25 mg（按實(shí)際含量折算，精確至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用二甲基亞砜（3.4）和乙醇（3.5）的混合溶液（體積比2:3）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得250 g/ mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。3.19 著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（=50 g/mL）：分別稱取酸性黃36標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.14）、蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.15）和蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.16）各5 mL，取顏料橙5標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.17）和顏料紅53:1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液各10 m

6、L，置于50 mL容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成質(zhì)量濃度各為50 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。3.20 5種禁用著色劑系列標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密量取一定體積的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.20），置10 mL容量瓶中，加乙腈（3.1）稀釋至刻度，使得著色劑各成分的濃度分別為0.2 g/ mL、0.5 g/ mL、2.0 g/ mL、10.0 g/ mL、50.0 g/ mL。4 儀器4.1 高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測器。4.2 液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.3 分析天平：感量為0.0001 g。4.4 分析天平：感量為0.00001 g。4.5 精密移液器。4.6 渦旋振蕩器。4

7、.7 超聲波清洗儀。4.8 高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不小于10000 rmp。5 分析步驟5.1 樣品預(yù)處理唇膏類：稱取0.5 g（精確至0.001 g）樣品，置10 mL具塞比色管中，加四氫呋喃（3.3）與乙腈（3.1）混合液（體積比1:9）至刻度，搖勻，渦旋振蕩使試樣與提取溶劑充分混勻，超聲提取30 min，放至室溫，必要時(shí)，轉(zhuǎn)移至10 mL具塞塑料離心管中，以10000 rpm離心5 min，上清液經(jīng)0.45 m濾膜過濾，濾液作為試樣溶液備用。散粉類：稱取0.5 g（精確至0.001 g）樣品，置10 mL具塞比色管中，加四氫呋喃（3.3）、二甲基亞砜（3.4）和乙腈（3.1）混合液（體積比1:

8、1:8）至刻度，混勻，超聲提取30 min，放至室溫，上清液經(jīng)0.45 m濾膜過濾，濾液作為試樣溶液備用。指甲油類：稱取0.5 g（精確至0.001 g）樣品，置10 mL具塞比色管中，加56 mL乙腈（3.1），混勻，超聲提取30 min，放至室溫，加乙腈（3.1）稀釋至刻度，搖勻，靜置，必要時(shí)，轉(zhuǎn)移至10 mL具塞塑料離心管中，以10000 rpm離心5 min，上清液經(jīng)0.45 m濾膜過濾，濾液作為試樣溶液備用。若樣品中被測成分的濃度超過了線性范圍的上限，需對試樣溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋處理。5.2 高效液相色譜參考條件色譜柱：C18柱（4.6 mm250 mm，5 m）。流動相：A：乙腈B：緩

9、沖溶液（10 mmol/L四丁基氫氧化胺（3.6），10 mmol/L 檸檬酸（3.7），用氨水（3.8）調(diào)節(jié)至pH 8.2)梯度洗脫，洗脫程序見表1。表1 梯度洗脫程序時(shí)間（min）流動相A（%）流動相B（%）流速（mL/min）0.0030701.05.0080201.010.0010001.015.0010001.020.0030701.022.0030701.0流速：1.0 mL/min。檢測波長：416 nm（酸性黃36）；484 nm（顏料橙5、顏料紅53:1、蘇丹紅）；514 nm（蘇丹紅）。柱溫：30。進(jìn)樣量：10 L。5.3 樣品測定按設(shè)定的色譜條件（5.2），取著色劑系列標(biāo)

10、準(zhǔn)溶液（3.20）分別進(jìn)樣，進(jìn)行高效液相色譜分析，以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。取試樣溶液（5.1）進(jìn)樣10 L分析，色譜圖檢出的成分，經(jīng)與該成分的保留時(shí)間和紫外-可見光譜圖比較確證后，根據(jù)測定成分的峰面積，代入回歸方程計(jì)算各著色劑的濃度。按“6”項(xiàng)下計(jì)算公式計(jì)算化妝品樣品中著色劑的含量。5.4 平行試驗(yàn) 按以上步驟操作，對同一樣品獨(dú)立進(jìn)行測定，獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算數(shù)平均值的10%。5.5 陽性結(jié)果確證測定過程中若有陽性結(jié)果，可采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)一步確證。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間和紫

11、外-可見光譜圖與對照品一致，所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子對相對豐度比的偏差不超過表2規(guī)定范圍，則可判定樣品中存在對應(yīng)的待測成分。表2 陽性結(jié)果確證時(shí)相對離子豐度比的最大允許偏差相對離子豐度50%20%至50%10%至20%10%允許的相對偏差20%25%30%50%液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法參考條件：色譜參考條件：色譜柱：C18（2.1 mm150 mm, 3.5 m）；流動相：乙腈-0.1%甲酸水溶液系統(tǒng)梯度洗脫，梯度洗脫條件見表3；柱溫：30 ；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：5 L。表3 梯度洗脫條件時(shí)間（min）乙腈（%）0.1%甲酸溶液（%）流速（mL/min

12、）0.0078220.33.0078220.35.009550.37.009550.38.0078220.3質(zhì)譜參考條件：毛細(xì)管電壓：3.5 kV；二級錐孔電壓：5 V；射頻透鏡電壓：0.5 V；離子源溫度：150 ；脫溶劑氣溫度：500 ；脫溶劑氣流量：1000 L/hr；錐孔氣流量：50 L/hr；碰撞室壓力：3.210-3 mbar；低質(zhì)量端1分辨率：13.0；高質(zhì)量端1分辨率：13.0；離子能量1：0.5 V；碰撞室入口電壓：-2 eV；碰撞室出口電壓：1 eV；低質(zhì)量端2分辨率：13.0；高質(zhì)量端2分辨率：13.0；離子能量2：0.5 V；光電倍增器電壓：650 V；碰撞氣體：氬氣；

13、數(shù)據(jù)采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測。在以上色譜、質(zhì)譜條件下，5種禁用著色劑的定性離子對和保留時(shí)間見表4。表4 5種禁用著色劑的定性離子對和保留時(shí)間著色劑名稱定性離子對（m/z）保留時(shí)間（min）顏料橙5339.2/156.2，339.2/128.22.56酸性黃36354.2/169.2，354.2/109.23.33顏料紅53:1377.2/221.2，377.2/128.24.11蘇丹紅381.4/128.2，381.4/106.25.40蘇丹紅277.2/156.2，277.2/128.25.966 計(jì)算w= V/m式中：w 樣品中著色劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，g/g； 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得出的測試溶液中著色劑的質(zhì)量濃度，g/mL；V 樣