物流開(kāi)題報(bào)告畢業(yè)論文

1、物流開(kāi)題報(bào)告畢業(yè)論文研究背景眼科最常見(jiàn)致盲眼病有白內(nèi)障、青光眼、糖尿 病視網(wǎng)膜病變和黃斑病等，其中青光眼是繼白內(nèi)障后的第二 致盲原因，物流開(kāi)題報(bào)告畢業(yè)論文。我國(guó)青光眼的發(fā)病率為%，患病人數(shù)約為 700 萬(wàn)。 xx 年資料顯示世界青光眼發(fā)病人數(shù)到 xx 年將達(dá)到 7000 萬(wàn)，雙眼盲目人數(shù)達(dá)到840 萬(wàn) (quigleyetal. ， xx) 。眾多的青光眼患者和青光眼盲者，不僅給患者帶 來(lái)極大的身心痛苦，而且還造成社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的巨大負(fù)擔(dān)，因 此，預(yù)防、控制及治療青光眼十分重要且迫切 ! 青光眼是一 種由于病理性眼壓增高導(dǎo)致的具有特征性視神經(jīng)結(jié)構(gòu)損傷 和視野缺損為表現(xiàn)的神經(jīng)性退行性視神經(jīng)病變，其最

2、終的結(jié) 局是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(rgcs)凋亡、視功能逐漸喪失 (buckingham et al.， xx) 。目前已有大量保護(hù) rgcs 的研究結(jié)果，主要包括：改善視乳頭微循環(huán)、谷氨酸途徑抑制劑、 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子， 誘導(dǎo)熱休克蛋白表達(dá)及抗氧化治療等。 然而， 青光眼的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、受體通道研究在 rgcs 損傷與保護(hù)中的作用 近年來(lái)正得到關(guān)注。最新的研究方向和靶點(diǎn)之一是關(guān)于能感 受壓力的受體通道可能參與傳遞病理刺激造成神經(jīng)損傷 (quigley et al. ， xx) 。 trpc6(transient receptor potential ，c6) 是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的、壓

3、力敏感、參與神經(jīng)元存活與凋亡的鈣離子通透膜通道蛋白。本人曾參與課題 trpc6 通道在視網(wǎng)膜缺血再灌模型中對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)的保護(hù)作用 的研究，并獲得了有價(jià)值的前期研究結(jié)果：較為全面而精確 的定位了 trpc6 通道基因和蛋白在 sd 大鼠視網(wǎng)膜、尤其是 rgcs 上的表達(dá)和分布， trpc6 在 rgc 層上有選擇性的高表達(dá) ; 探 討 了 trpc6 在 大 鼠 視 網(wǎng) 膜 缺 血 再 灌 (ischemia reperfusion,ir) 損傷過(guò)程中的表達(dá)變化， trpc6 基因和蛋白 在視網(wǎng)膜缺血損傷中的再灌注后 24 小時(shí)，出現(xiàn)一過(guò)性的表 達(dá)升高 ; 在體的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其激動(dòng)劑o

4、ag 具有保護(hù)視網(wǎng)膜 ir 模型誘導(dǎo)的 rgcs 免受損傷， 而拮抗劑 skf96365 則促進(jìn)了 rgcs 凋亡的發(fā)生，本研究擬進(jìn)一步探討 trpc6 的 作用機(jī)制。研 究 發(fā) 現(xiàn) ， 腦 源 性 神 經(jīng) 營(yíng) 養(yǎng) 因 子 (brain-derived neurotrophic factor,bdnf) 與 trpc 通道在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)控 細(xì)胞存活的過(guò)程中有密切的聯(lián)系。 xx 年 4 月中國(guó)科學(xué)院上海 神 經(jīng) 科 學(xué) 研 究 所 王 以 政 研 究 員 課 題 組 在 nature neuroscience 上發(fā)表論文， 首次證實(shí)過(guò)表達(dá) trpc6/trpc3 可 保護(hù)小腦神經(jīng)元對(duì)抗因血清剝奪

5、而導(dǎo)致的細(xì)胞死亡，且發(fā)現(xiàn) bdnf 位于 trpc3/6 介導(dǎo)的細(xì)胞保護(hù)信號(hào)通路的上游 (tai et al. ， xxa;jia et al.，xx) 。本課題擬探討 bdnf 介導(dǎo) trpc6 通道蛋白保護(hù)視網(wǎng)膜跟 模型誘導(dǎo)的 rgcs 免受損傷的作用機(jī)制，對(duì)深入闡明青光眼 的發(fā)病機(jī)制，為臨床干預(yù)治提供新的思路和藥物干預(yù)靶點(diǎn)， 具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。本課題的研究主要分為以下二部分： 第一部分視網(wǎng)膜 ir 模型中調(diào)控 trpc 通道時(shí) bdnf 的表達(dá)變 化一、研究目的在 sd 大鼠視網(wǎng)膜 ir 模型中檢測(cè) bdnf 基因 不同再灌注時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化，同時(shí)檢測(cè)抑制 trpc 通道時(shí) bdnf

6、蛋白水平變化、探討其表達(dá)類(lèi)型對(duì) rgcs 凋亡的影響。 二、研究方法 1、在視網(wǎng)膜 ir 模型中檢測(cè) bdnf 基因的表達(dá)。 采用視神經(jīng)血管鉗夾法建立視網(wǎng)膜 ir 模型，夾閉視網(wǎng)膜血 供 60 分鐘，分別于再灌注后 3 小時(shí)、 24 小時(shí)、 48 小時(shí)、 7 天處死大鼠，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜 總 rna ，利用反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng) (rt-pcr) 及實(shí)時(shí)熒光定量 pcr(real-time pcr) 測(cè)定 bdnf 基因表達(dá)變化。 2、抑制 trpc 通道時(shí)檢測(cè) bdnf 蛋白的表達(dá)。建立大鼠視網(wǎng)膜 ir 模型，于 視網(wǎng)膜缺血術(shù)前 30 分鐘，右眼通過(guò)玻璃體腔注射 trpc

7、 拮抗 劑 skf96365 為實(shí)驗(yàn)組，左眼注射溶劑 pbs 為陰性對(duì)照組， 分別于再灌后 3 小時(shí)、 6小時(shí)、 12 小時(shí)、24 小時(shí)、 48小時(shí)、 72 小時(shí)處死大鼠，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視 網(wǎng)膜總蛋白，蛋白質(zhì)免疫印跡 (western blot) 檢測(cè) bdnf 在 視網(wǎng)膜組織中的蛋白表達(dá)水平，開(kāi)題報(bào)告物流開(kāi)題報(bào)告畢業(yè)論文分享好文 3、抑制trpc通道時(shí)檢測(cè)bdnf基因的表達(dá)。將 sd 大鼠分為 4 組，分別進(jìn)行如下處理：第一組，對(duì) 眼球進(jìn)行假手術(shù)， 只行視神經(jīng)分離術(shù)， 不行視網(wǎng)膜缺血手術(shù) ; 第二組，建立視網(wǎng)膜 ir 模型; 第三組于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前 30 分鐘，通過(guò)玻璃體腔注射 pbs 溶液，然后再建立視網(wǎng)膜 ir 模型;第四組于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前 30 分鐘，通過(guò)玻璃體腔注射 注射 skf96365 ，然后再建立視網(wǎng)膜 ir 模型。所有大鼠于再 灌注后 24 小時(shí)處死，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提 取視網(wǎng)膜總 rna ， real-time pcr測(cè)定 bdnf 基因表達(dá)變化。三、研究結(jié)果 rt-pcr 及