交叉配血酶法與聚凝胺法

1、實驗儀器與試劑 儀器：臺式離心機 37恒溫水浴箱 顯微鏡 試劑：1%菠蘿酶溶液、生理鹽水 標本：3mlABO同型全血標本2人份 木瓜蛋白酶 菠蘿蛋白酶 第1頁/共19頁 實驗步驟 1.抽取受血者靜脈血34ml，待凝固后分離血清； 以生理鹽水洗滌受血者紅細胞3次配成3%紅細胞懸 液 2.將獻血者血標本以同樣方法分離血清；生理鹽水 洗滌獻血者紅細胞3次，配成3%紅細胞懸液 3.取潔凈試管2支，分別標記主側管和次側管。 主側管：受血者血清2滴和獻血者紅細胞懸液1滴 次側管：獻血者血清2滴和受血者紅細胞1滴 兩管分別加入1%菠蘿酶溶液各1滴 第2頁/共19頁 實驗步驟 4.陽性對照管：3%RhD陽性O

2、型紅細胞懸液和人源性 IgG類抗D血清各1滴，1%菠蘿酶溶液1滴 5. 陰性對照管：3%RhD陽性O型紅細胞懸液和正常人 AB型血清各1滴，1%菠蘿酶溶液1滴 6. 自身對照管：受血者自身血清和3%紅細胞懸液各1滴 7.各試管經(jīng)輕輕搖動后，置37水浴30min 8.取出試管，輕輕搖動 或經(jīng)120g離心1min（或1300g離心30s），取出試 管輕輕搖動 9. 觀察試驗結果并記錄 第3頁/共19頁 試驗結果 1.受受血者血者自身對照管自身對照管內紅細胞內紅細胞不凝集不凝集，陽性陽性對照管對照管 紅細胞紅細胞凝集凝集，陰性陰性對照管紅細胞對照管紅細胞不凝集不凝集，主、次主、次側側 配血管內紅細胞

3、均配血管內紅細胞均不凝集不凝集，表示受血者和獻血者兩，表示受血者和獻血者兩 血酶介質交叉配血血酶介質交叉配血相容相容，獻血者血液，獻血者血液可輸可輸注注 2.如果如果受血者受血者自身對照管自身對照管內紅細胞內紅細胞不凝集不凝集，陽性陽性對對 照管紅細胞照管紅細胞凝集凝集，陰性陰性對照管紅細胞對照管紅細胞不凝集不凝集，主主側側 或（和）或（和）次次側管內紅細胞側管內紅細胞凝集凝集，則表明兩血，則表明兩血不相容不相容， 獻血者血液獻血者血液不可輸注不可輸注。 第4頁/共19頁 注意事項注意事項 1. 酶處理可增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應活性，例如Rh 和Kidd系統(tǒng)。酶處理后也會破壞一些抗原的結構，

4、例如 M、N、Fya、Fyb抗原，導致這些抗原抗體的反應性減 弱。（可用抗球蛋白試驗） 2. 應平行進行鹽水介質交叉配血試驗 3.紅細胞經(jīng)蛋白酶修飾后可以改變紅細胞懸液的物理性質， 在交叉配血試驗中可以出現(xiàn)非特異性自身凝聚，因此必 須使用標準對照試驗，才能得出正確的試驗結果 第5頁/共19頁 方法學評價方法學評價 優(yōu)點：操作簡單、快捷，曾廣泛使用，適 用于急診搶救患者的交叉配血 缺點：可能使M、N、Fya、Fyb等抗原的 抗體漏檢，存在輸血安全隱患 因此目前臨床基本已經(jīng)不再使用酶介質進 行交叉配血試驗 第6頁/共19頁 低離子聚凝胺介質交叉配血試低離子聚凝胺介質交叉配血試 驗驗 原理： l 聚

5、凝胺（polybrene）是一種高價陽性季胺鹽多聚物， 溶解后可以產(chǎn)生較多的正電荷，可以大量中和紅細胞 膜表面的負電荷，減弱紅細胞之間的排斥力，使紅細 胞彼此間的距離縮短，在離心力的作用下，可以引起 正常紅細胞可逆性的非特異性凝集。 l 由于降低介質的離子強度，可以增加抗原抗體間的引 力（或降低紅細胞膜的Zeta點位），可以增強血型抗 體凝集紅細胞的能力。 第7頁/共19頁 l 將紅細胞和血清放置在低離子介質中孵育，如果血 清中存在不完全性紅細胞血型抗體（IgG類），可 以促進抗體和紅細胞膜血型抗原結合，加入聚凝胺 促進紅細胞凝集。 l 離心后，加入重懸浮液，中和聚凝胺的凝集作用， 使正常紅細

6、胞的凝集解散，而抗原抗體結合引起的 紅細胞凝集不會散開。 第8頁/共19頁 第9頁/共19頁 實驗儀器與試劑實驗儀器與試劑 儀器： 臺式離心機、顯微鏡 試劑 ：生理鹽水 低離子介質（LIM） 聚凝胺試劑 重懸浮液 標本 ：3mlABO同型全血標本2人份 第10頁/共19頁 實驗步驟實驗步驟 1.抽取受血者靜脈血34ml，待凝固后分離血清；以生理鹽水洗滌 受血者紅細胞3次，配成3%紅細胞懸液 2.將獻血者血標本以同樣方法分離血清；以生理鹽水洗滌獻血者紅 細胞3次，配成3%紅細胞懸液 3.主側管：加受血者血清2滴，獻血者紅細胞懸液1滴； 次側管：加獻血者血清2滴，受血者紅細胞懸液1滴 4.每管各加

7、LIM溶液0.6ml，混勻，室溫孵育1min 5.每管各加2滴聚凝胺溶液，混合后靜置15s 6.1300g離心15s，棄上清 7.輕輕搖動試管，目測細胞有無凝集，如無凝集，必須重做 8.加入2滴重懸浮液，并輕輕混合，肉眼觀察結果 9.取載破片一張，用滴管分別從主側管和次側管內吸取紅細胞懸液 各1滴，均勻滴放在載玻片上，用顯微鏡觀察結果并記錄 第11頁/共19頁 實驗結果實驗結果 1.將如果主側管和次側管內紅細胞凝集散開，則為聚 凝胺引起的非特異性凝集，表示受血者和獻血者兩血 聚凝胺介質配血相容，獻血者血液可以輸注 2.如果主側管或（和）次側管內紅細胞凝集不散開， 則表明抗原抗體結合的特異性反應

8、，兩血不相容，獻 血者血液不可輸注 （用戶可使用IgG抗D抗體（效價64）與RhD陽性紅 細胞反應做陽性對照實驗，測試本試劑的有效性。） 第12頁/共19頁 注意事項注意事項 1.聚凝胺介質交叉配血試驗對Kell血型系統(tǒng)的抗體不能 有效檢出（陰性結果加做抗球蛋白試驗），但漢族kk 型幾乎100%。 2.臨床輸血進行交叉配血試驗時，應當首先進行鹽水 介質的交叉配血試驗，排除完全性（IgM類）紅細胞抗 體的存在后，再進行聚凝胺介質交叉配血試驗 3.溶血標本不得用于交叉配血試驗 4.當重懸浮液加入后，應盡快觀察結果（不可超過 3min），以免反應減弱或消失 5.聚凝胺溶液放置在玻璃瓶中過久可以導致紅

9、細胞凝 集過弱，因此必須保存在深色塑料瓶中 6.聚凝胺是一種抗肝素試劑，所以如果使用含肝素的 血標本，要加較多的聚凝胺來中和肝素 第13頁/共19頁 方法學評價方法學評價 優(yōu)點：安全、敏感、快速、操作簡單，結 果易判定，能為臨床安全快速的輸血提供 有力保證。 聚凝胺介質配血法反應較鹽水法靈敏度高， 能檢出幾乎所有規(guī)則抗體及不規(guī)則血型抗 體，適用于各類輸血患者的配血 缺點：漏檢Kell系統(tǒng)（見注意事項） 第14頁/共19頁 謝謝！ 第15頁/共19頁 針對交付評估的管理動作（2） p 工程管理部規(guī)則宣講及日常巡檢 n 項目交付前兩個月工程管理部對項目各合作方進行交付評估規(guī)則的宣講， 全面解析交付

10、評估要求，解答相關合作方疑問。 n 項目交付前兩個月工程管理部日常巡檢開始進行項目交付評估準備情況檢 查工作，重點關注項目完成情況（是否能提前完工）及施工工程質量控制 情況（是否按照萬科標準施工），針對相關問題同項目交流，并形成相關 報告。 p 對于交付樣板的評估 n 項目交付前一定要做交付樣板，部品安裝齊全，保潔到位。工程管理部將 對樣板進行交付預評估，以明確交付標準、保潔標準，及時 發(fā)現(xiàn)問題 管理動作要求：對于計劃參與交付評估的項目，工程管理部將在交付前2個 月對項目各合作方進行交付規(guī)則相關宣講培訓，同時開始進行日常交付評估 巡檢。 對于交付樣板的驗收，主要是明確交付及保潔標準，及時發(fā)現(xiàn)問題，為大面 積交付創(chuàng)造條件 第16頁/共19頁 方法學評價方法學評價