醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測制度及要求

1、為了合理規(guī)范我院消毒滅菌效果、環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測工作，提高監(jiān) 測結(jié)果的準(zhǔn)確性、真實性、可比性，特作如下規(guī)定及要求: 、各科室（部門）對此項監(jiān)測工作，按規(guī)定的要求開展監(jiān)測項目, 嚴(yán)格遵守規(guī)定的監(jiān)測時限，真實規(guī)范采樣，完整填寫申請單。按時（每 月底前）做好報表工作。 二、各科室（部門）對每月監(jiān)測結(jié)果要進行效果評價并將資料妥善保 管。對不合格項目要進行原因分析并制定改進措施， 達到不斷持續(xù)性 改進的目的。 三、各科室（部門）對此項監(jiān)測工作，要務(wù)真求實，對不合格項目應(yīng) 如實上報。避免單純追求合格率，而虛報、鬧假、走形式。經(jīng)核實將 按獎罰條例進行重獎、重罰。 四、檢驗科（細菌室）保證對全院各科室（部門），監(jiān)

2、測所需合格采 樣試管、培養(yǎng)皿的供應(yīng)，并每月做無菌試驗。按要求做到培養(yǎng)時限準(zhǔn) 確、中和劑添加正確、報告結(jié)果規(guī)范。 五、檢驗科（細菌室）對各科室（部門） 送檢的采樣標(biāo)本有不合格, 采樣不規(guī)范，申請單填寫不符合要求的, 有權(quán)拒絕出示報告結(jié)果。 六、感染控制科對全院重點科室（部門） 的消毒滅菌效果、環(huán)境衛(wèi)生 學(xué)監(jiān)測工作負責(zé)監(jiān)督、并開展隨機抽查采樣監(jiān)測。各科室應(yīng)積極主動 配合，對在隨機抽查采樣中態(tài)度不端正、找借口、推諉等影響工作正 常進行的，將按獎罰條例進行扣罰。 七、各科室（部門）監(jiān)測時間具體安排 重點科室（部門）： 類科室及相關(guān)科室 手術(shù)室、新生兒里間、監(jiān)測時間：每周一次（周二） 內(nèi)鏡室1w、供應(yīng)室

3、3w、產(chǎn)一科1w、產(chǎn)二科1w、母嬰同室1w、分 娩室 2w 、人流室 1w 等。 監(jiān)測時間：每月一次。 （第 1w、 2w、 3w）、（3*、 9*） 普通科室（部門）： n、m、w類科室及相關(guān)科室 外科（換藥室）3w、五官科1w、兒一科3w、兒二科3w、兒三科 3w、新生兒科3w、婦一科2w、婦二科2w、檢驗科3w、血庫3w、 醫(yī)療廢物儲存室2w、放射科2w、病理室1w、外科3w、注射室2w、 換藥室2w、泳吧1w、婦科門診1w、兒童樂園3w、兒科門診治療室 3w、手足口病診室2w 監(jiān)測時間：每月一次。（第 1w、 2w、 3w）、（3*、 9*） 注：有 *號的月份加紫外線強度監(jiān)測。 八、

4、各科室（部門）監(jiān)測項目、監(jiān)測時限、采樣方法、評價（合格） 標(biāo)準(zhǔn)，詳見附件。 附件：1 空氣消毒效果的監(jiān)測 采樣時間：在消毒處理后、操作前進行 采樣。 （1） 采樣方法 1）布點方法；室內(nèi)面積W 30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點，內(nèi)、外點 布點部位距墻壁Im處；室內(nèi)面積30m2，設(shè)4角及中央5點，4角 的布點部位距墻壁 lm 處。 2）平板暴露法：將普通營養(yǎng)瓊脂平板（直徑為9cm）放在室內(nèi)各采樣點 處，采樣高度為距地面1.5m，采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁, 暴露 5min ，蓋好立即送檢。 3）檢測方法：將送檢的平板置37 C溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)，并 分離致病菌。 （2）結(jié)果判定 類

5、區(qū)域： 細菌總數(shù)W0cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格; II類區(qū)域: 細菌總數(shù)W200 cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格; 細菌總數(shù)W 500 cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格。 注意事項： 采樣前，關(guān)閉門、窗，在無人走動的情況下，靜止 10 分 鐘后進行采樣。 2 物品和環(huán)境表面消毒效果監(jiān)測 采樣時間：在消毒處理后進行采樣。 （1）采樣方法：用5cm dem標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢問題表面，采 樣面積100em2，連續(xù)采樣4個，用浸有含有相應(yīng)中和劑的無菌 洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并 隨之轉(zhuǎn)棉拭子， 剪去手接觸部位后， 將棉拭子投入 10ml

6、含有相應(yīng) 中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。門把手等不規(guī)則物體表 面用棉拭子直接涂擦采樣。 （2）結(jié)果判定 I、H類區(qū)域：細菌總數(shù)CFU/cm3并未檢出致病菌為消毒合格。 m類區(qū)域：細菌總數(shù)W 10CFU/cm 3并未檢出致病菌為消毒合格。 IV類區(qū)域：細菌總數(shù)W 15CFU/cm 3并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰 同室、早產(chǎn)兒室、 嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出 沙門氏 3手的消毒效果監(jiān)測 采樣時間 :在消毒后立即采樣。 1 ）采樣方法 1）手的采樣：被檢人五指并攏，用浸有含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫 液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦 2 次（一只手涂擦面 積約 30

7、cm 3），并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將 棉拭子投入 10ml 含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。 2）結(jié)果判定 I、H類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)老CFU/cm3，并未檢出金黃色葡萄球 菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。 皿類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)wiOCFU/cm 3并未檢出金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌為消毒合格。 W類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)W 15CFU/cm 3 并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。 母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出 沙門菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。 4 壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測方法 （

8、1） 化學(xué)監(jiān)測法 1）化學(xué)指示卡 （ 管） 監(jiān)測方法：將既能指示溫度，又能指示溫度持續(xù)時 間的化學(xué)指示管 （卡）放人每一待滅菌的物品包中央，經(jīng)一個滅菌周期 后，取出指示管 （卡），根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達到滅菌條 件。 2）化學(xué)指示膠帶監(jiān)測法：將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包 外，經(jīng)一個滅菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過滅菌處 理。 3）結(jié)果判定：檢測時，所放置的指示管 （卡）的性狀或顏色均變至規(guī)定 的條件，可認為該包滅菌合格。 4）注意事項：監(jiān)測所用化學(xué)指示劑須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使 用。 （2）生物監(jiān)測法 1）指示菌株：指示菌株為嗜熱脂肪桿菌芽胞 （ATCC79

9、53 或 SSIK31 株），菌片含菌量為5.0X105-5.0 x106cfu/片，在12C0.5 C條件下, D值為13-1.9min，殺滅時間（KT值）19min，存活時間（ST值）為 3.9min 。 2）培養(yǎng)基：試驗用培養(yǎng)基為溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基。 3）檢測方法：將兩個嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片分別裝人滅菌小紙袋內(nèi)， 置于標(biāo)準(zhǔn)試驗包中心部位。 滅菌柜室內(nèi) ,排氣口上方放置一個標(biāo)準(zhǔn)試驗包 （由 3 件平紋長袖手術(shù) 衣， 4 塊小手術(shù)巾， 2 塊中手術(shù)巾， 1 塊大手術(shù)中， 3O 塊 10cm x 10cm8 層紗布敷料包裹成 25cm X 30cm x 30cm 大小 ）。 手提壓力蒸汽滅

10、菌器用通氣貯物盒 （22cm x 13cm x 6cm） 代替標(biāo)準(zhǔn)試 驗包，盒內(nèi)盛滿中試管， 指示菌片放于中心部位的兩只滅菌試管內(nèi) （試 管口用滅菌牛皮紙包封 ），將貯物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。 經(jīng)一個滅菌周期后， 在無菌條件下， 取出標(biāo)準(zhǔn)試驗包或通氣貯物盒中 的指示菌片，投人溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56 C培養(yǎng)7天（自 含式生物指示物按說明書執(zhí)行 ），觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢測時設(shè)陰 性對照和陽性對照。 （4）結(jié)果判定：每個指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基都不變 色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基， 由紫色變?yōu)辄S色時，則滅菌不合格。 （5）注意事項：監(jiān)

11、測所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認可，并在有效期內(nèi)使用。 5 紫外線消毒效果的監(jiān)測 （1 ）紫外線燈管輻照度值的測定 1 ）檢測方法： 開啟紫外線燈 5min 后，將測定波長為 254nm 的紫外線 輻照計探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離 1m 的中央處，待儀表穩(wěn)定 后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。 2）結(jié)果判定：普通30W。直管型紫外線燈，新燈輻照強度90Uw/cm2 為合格；使用中紫外線燈輻照強度70Uw/cm2對為合格；30W高強 度紫外線新燈的輻照強度180 Uw/cm2行為合格。 3）注意事項：測定時電壓 220v 土 5v,溫度20 一 25 C，相對濕度 60%，紫外線輻照計必須在計量

12、部門檢定的有效期內(nèi)使用。 6 醫(yī)療器械滅菌效果的監(jiān)測 （1）采樣時間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。 常規(guī)監(jiān)測 1）檢測方法：用無菌的方法將擬檢縫合針、針頭、手術(shù)刀片等小件醫(yī) 療器械各 5 支，分別投人 5ml 的無茵洗脫液中；注射器則取 5 副在 5ml 無菌肉湯中分別抽吸 5 次；手術(shù)鉗、鑷子等大的醫(yī)療器械在無菌 操作下取 2 份以上用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂擦采樣， 并將棉 拭子投入 5ml 無菌洗脫液中。將采樣管用力振打 80 次，用無菌吸管 45 C -48 C的營養(yǎng) 37 C溫箱培養(yǎng)48h , 吸取 lml 待檢樣品放于滅菌平皿內(nèi)，加人已熔化的 瓊脂 15-18ml ，邊傾注

13、邊搖勻，待瓊脂凝固，置 計數(shù)菌落數(shù)。 2）結(jié)果判定：平板上無菌生長為滅菌合格。 3）注意事項：若消毒因子為化學(xué)消毒劑時，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中和 劑。 7 消毒液的監(jiān)測 （1） 常用消毒液有效成分測定 1）有效氯含量測定 配制 2mol/L 硫酸、 10% 碘化鉀與 0.5%淀粉等溶液。配制并標(biāo)定 0.1mol/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。 對液體含氯消毒劑， 吸取 0.1ml 放容量瓶中，加蒸餾水至刻度， 混勻。 對固體含氯消毒劑，稱取1g（精確至O.OOIg），置研缽研磨后以蒸餾 水溶解，轉(zhuǎn)人 100ml 容量瓶中（溶水中無殘渣者可免研磨 ）。稱量杯及 研缽需用蒸餾水洗 3 次，洗液全部轉(zhuǎn)人容量

14、瓶。 向100ml碘量瓶中加2mol/L硫酸10ml, 10%碘化鉀溶液10ml和 混勻的消毒劑稀釋液10.0ml。此時，溶液出現(xiàn)棕色。蓋上蓋并振搖 混勻后加蒸餾水?dāng)?shù)滿于碘量瓶蓋緣，置暗處 5min. 打開蓋，讓蓋緣蒸 餾水流人瓶內(nèi)。用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 （裝于 25ml 滴定管中 ）滴定游 離碘；邊滴邊搖勻。 待溶液呈淡黃色時加人 0.5%淀粉溶液 10 滴，溶 液立即變藍色。 繼續(xù)滴定至藍色消失， 記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總 量。重復(fù)測 3 次，取 3 次平均值進行以下計算。 因 lmol/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 Iml 相當(dāng)于 0.03545g 有效氯，故可按 下式計算有效氯含量： 有效

15、氯含量二 C X V X 0.03545/W X 100% C 為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度 （MOL/L）V 為滴定用去硫代 硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù) ;w 為碘量瓶中所含消毒劑原藥克數(shù) （液體消毒 劑則為毫升數(shù) ）、 2）有效碘含量的測定 配制 0.5% 淀粉溶液。備 36%醋酸溶液。配制并標(biāo)定 0.1moL/L 硫代 硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。 向 ltolnl 碘量瓶中精確加含碘消毒劑樣液 50ml 及醋酸 1 滴。用 0.led/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定 （通常用 25ML 滴定管，若預(yù)計有效碘濃 度5%時用 50ml 滴定管 ），邊滴邊搖勻。待溶液呈淡黃色時加人 0.5% 淀粉溶液 10

16、滴（溶液立即變藍色 ），繼續(xù)滴定至藍色消失，記錄用去 的硫代硫酸鈉溶液總量。重復(fù)測 3 次，取 3 次平均值進行以下計算。 由于 lmol/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 lml 相當(dāng)于 0.1269g 有效碘， 故可 按下式計算有效碘含量： 有效碘含量二C X V X 0.1269/W X 100% ”“W c 為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度 （mol/L）v 為滿定用去硫代硫酸 鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù) ;W 為碘量瓶中所含消毒劑原藥克數(shù) （ 液體消毒劑 則為毫升數(shù) ） 3）戊二醛（C5h 8O2。）含量的測定 配制 6.5%三已醇胺溶液、 0.04% 澳酚藍乙醇溶液與鹽酸羥胺中性溶 液（17.5g鹽酸

17、羥胺加蒸餾水75ml溶解，并加異丙醇稀釋至500ml , 搖勻。加0.04%澳酚藍乙醇溶液15rnl，用6.5%三乙醇胺溶液滴定至 溶液顯藍綠色 ）。配制并標(biāo)定 0.25mol/L 硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取戊二醛消毒劑樣液10.0ml（非消毒濃度的濃溶液需用50ml容量瓶 稀釋后取樣 ）置 250ml 碘量瓶中， 精確加 6.5%三乙醇胺溶液 20.0ml 與鹽酸羥胺中性溶液0.25ml，搖勻。靜量反應(yīng)Ih后，用0.25mol/L 硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。待溶液顯藍綠色，記錄硫酸溶液用量。同時，以 (空白對 不含戊二醇的三乙醇胺、鹽酸羥胺中性溶液重復(fù)上述操作 照)。重復(fù)測 3次，取 3次的平均值進行以下計

18、算。 由于 lmol/L 硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 Iml 相當(dāng)于 0.1001g 戊二醛，因此可按下 式計算成二醛含量： 戊二醛含量(w/v)=C X (v2-v1) X 0.1001/w X 100% c 為硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度 (mol/L);V1 與 V2 分別為樣品與空白 對照滴定中用去的硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù) ;W 為戊二醛樣品毫升數(shù)。 4) 過氧化氫(H2O2)濃度的測定 配制 2mol/L 硫酸與 1 0 %硫酸錳等溶液。另外配制井標(biāo)定0.02rnol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取 1.0ml 過氧化氫樣液，于 100ml 容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度， 混勻。 取過氧化氫稀釋液10.0ml，

19、置100ml碘量瓶中，加人2mol/L硫酸 20ml 與 10%硫酸錳 3滴，搖勻。用 0.02mol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液 (裝 于 25ml 滴定管中 )滴定至溶液呈粉紅色， 記錄高錳酸鉀溶液用量。 重 復(fù)測 3 次，取 3 次平均值進行以下計算。 因 lmol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液 lml 相當(dāng)于 0.08505g 過氧化氫，故可按 下式計算過氧化氫含量： 過氧化氫濃度 (w/v)=C X V X 0.08505/w X 100% C與V分別為高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(MOL/L)與滿定中用 去的毫升數(shù)w為碘量瓶中所含過氧化氫樣液毫升數(shù)J (5)過氧乙酸 (C2H4O3) 濃度的測定

20、 配制以下溶液：2mol/L硫酸、10%碘化鉀、0.01mol/L高錳酸鉀、10% 硫酸錳、 3%鋁酸銨與 0 .5%淀粉。配制并標(biāo)定 0.05mol/L 硫代硫酸鈉 標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取 1.0ml 過氧乙酸樣液，于 100ml 容量瓶中用蒸餾水稀釋至 8 無菌檢驗 （1） 無菌檢驗前準(zhǔn)備 1 ）洗脫液與培養(yǎng)基無菌性試驗： 無菌試驗前 3 天，于需一厭養(yǎng)培養(yǎng)基 與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種Iml洗脫液，分別置30-35 C與20-25 C培養(yǎng) 72h ，應(yīng)無菌生長。 2）陽性對照管菌液制備：在試驗前一天取金黃色葡萄球菌（26003） 的 普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種1環(huán)至需一厭氧培養(yǎng)基內(nèi)，在30-35 C

21、 培養(yǎng) 16-18h 備用。 （2）無菌操作：取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械 5 件直接浸人 6管需一厭氧培養(yǎng)管 （其中一管作陽性對照 ）與 4 管霉菌培養(yǎng)管 C 培養(yǎng) 基用量為15ml/管。 取 5 副注射器，在 5ml 洗脫液中反復(fù)抽吸 5 次，洗下管內(nèi)細菌，混 和后接種需一厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管 （共 6 管，其中 1 管作陽性對照 ）與霉菌培 養(yǎng)管（共 4 管）。接種量： lml 注射器為 0.5ml，2ml 注射器為 Iml，5-10ml 注射器為2ml, 20-50ml注射器為5ml，培養(yǎng)基用量：接種量為2ml 以下為15ml/管，接種量5ml為40ml/管。 手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械

22、取 2 件用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù) 涂抹采樣， 將棉拭子投人 sml 無菌洗脫液中， 將采樣液混勻， 接種于 需一厭氧培養(yǎng)管 (共 6 管，其中 1 管作陽性對照 )與霉菌培養(yǎng)基 (共 4 管)。接種量為Iml/管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。 (3) 培養(yǎng)：在待檢樣品的需一厭氧培養(yǎng)管中，接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色 葡萄球菌陽性對照管液 1 ：1 000 稀釋 1 ml ，將需一厭氧培養(yǎng)管以及陽 性與陰性對照管均于30-35 C培養(yǎng)5天，霉菌培養(yǎng)管與陰性對照管于 20-25 C培養(yǎng)7天，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長，如加人供試品 后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀， 經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時， 可取培養(yǎng) 液

23、轉(zhuǎn)種人另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 48-72h 后， 觀察是否再現(xiàn)混濁或在外面上有無菌落生長， 并在轉(zhuǎn)種的同時， 取培 養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長。 .(4) 結(jié)果判定：陽性對照在 24h 內(nèi)應(yīng)有菌生長，陰性對照在培養(yǎng)期 間應(yīng)無菌生長， 如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或更顯混濁但 經(jīng)證明并非有菌生長， 判為滅菌合格； 如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中 任何 1 管顯混濁并證實有菌生長，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試 2 次， 除陽性對照外，其他各管均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。 ( 5) 注意事項 1)送檢時間不得超過6h，若樣品保存于0-4 C,則不超過24h。

24、 2)被采樣本表面積100cm2取全部表面；被采樣本表面積 100Cm2 ，取 100cm2 。 3) 若消毒因子為兒學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中和劑。 9 熱原檢查法： .(1)鱟試驗 本法系利用鱟試劑與細菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機理， 以判斷供試品 中細菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。 內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素 單位（EU）表示。細菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品（以下簡稱RSE）系自大腸桿菌 提取精致得到的內(nèi)毒素。 以細菌內(nèi)毒素國際標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)， 經(jīng)過協(xié)作 標(biāo)定，使其與國際標(biāo)準(zhǔn)品單位含義一致 .RSE 用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁 鱟試劑靈敏度和標(biāo)定細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品 （以下簡稱CSE）。 CSE 系經(jīng) R

25、SE 為基準(zhǔn)進行標(biāo)定，確定其重量的相當(dāng)效價。每毫微克 （Ing）CSE的效價應(yīng)不小于2EU，不大于50EU，并具備均一性和穩(wěn) 定性的實驗數(shù)據(jù)。 CSE 用于試驗中空試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗及 設(shè)置的陽性對照。 1）試驗準(zhǔn)備：試驗所用器皿，需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒 素，常用的方法是250 C于烤至少Ih或180 C干烤至少2h，也可用 其他適宜的方法。 試驗所用器皿應(yīng)確證無吸附細菌內(nèi)毒素的作用。 試 驗操作過程應(yīng)防止微生物的污染。 2）鱟試劑靈敏度復(fù)核：根據(jù)嘗試劑靈敏度的標(biāo)示值（A，將RSE或CSE 用細菌內(nèi)毒素檢查用水 （與批號鱟試劑 24h 不產(chǎn)生凝集反應(yīng)的滅菌注 射用水，以下簡稱

26、BET水）溶解，在旋渦混合器上混合15min，然后 制備成2.0入、入05 AA和0.25入等4個濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每 稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合 30 秒鐘，按“檢查法”項下試驗， 每一濃度平行做 4 管，同時用 BET 水做 4 管陰性對照，如最大濃度 （2.0A）4 管為陽性，最低濃度 （0.25A）4 管均為陰性，陰性對照 4 管均 為陰性，按下式計算反應(yīng)終點濃度的幾何平均值即為鯊試劑靈敏度的 測定值 (N)。 ?c=Lg-1( ZX/4) 式中 X 為反應(yīng)終點濃度的對數(shù)值 (Lg) 。反應(yīng)終點濃度是系列濃度遞減 的內(nèi)毒素溶液中最后一個呈陽性結(jié)果的濃度。 當(dāng)入c在0.5兒2.0

27、 N包括0.5入和2.0 7)時，方可用于細菌內(nèi)毒素檢查， 并以入為該批空鱟劑的靈敏度。每批新的鯊試劑在用于試驗前都要進 行靈敏度的復(fù)核。 鱟試劑靈敏度定義為在本檢查法規(guī)定的條件下能檢 測出標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品溶液中的最低內(nèi)毒素濃度，用 EU/ml 表示。 3)供試品干擾試驗： 按“鱟試劑靈敏度復(fù)核”項下試驗，用 BET 水和未 檢出內(nèi)毒素的供試品溶液或其不超過最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)的稀 釋液分別制成合CSE2.0入、入05入和0.25入等4種濃度的內(nèi)毒素溶 液。用 BET 水和供試品溶液或稀釋液制成的每一濃度平行做 4 管， 另取 BET 水和供試品溶液或稀釋液各做 4 管陰性對照。如標(biāo)準(zhǔn)溶

28、液 最大濃度 (2.0N)4 管均為陽性，最低濃度 (0.25N)4 管均為陰性，兩種 陰性對照 8 管均為陰性時，按下式計算用 BET 水制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn) 溶液的反應(yīng)終點濃度的幾何平均值(ES)和用供試品溶液或稀釋液制 成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點濃度的幾何平均值 (ET)。 ES =ig-1( ZXs/4) ET 二 ig-1( EXT/4) 式中Xs XT分別為用BET水和供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶 液的反應(yīng)終點濃度的對數(shù)值 (Lg)。 當(dāng)ET在0.5Es-2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)時測認為供武品在該濃度 不干擾試驗， 否則需進行適當(dāng)處理后重復(fù)試驗， 或使用更靈敏的鱟 試

29、劑，對供試品進行更大倍數(shù)稀釋， 是排除干擾因素的簡單有效的方 法。每個品種要求至少對三個批號的供試品進行干擾試驗， 若鱟試劑 的來源、供試品的配方或生產(chǎn)工藝有變化時，須重復(fù)進行干擾試驗。 供試品的最大有效稀釋倍數(shù) （MVD） 按下式計算： MVD 二 L/ 入 L 為供試品的細菌內(nèi)毒素限值，以 EU/ml 表示，當(dāng)正文中的限值以 EU/mg 或 EU/U 表示時，應(yīng)乘以供試品溶液的濃度，再以所得值代 人上式。 4）檢查法：取裝有0.1ml鱟試劑溶液的10 X75mm試管或0.1ml/支規(guī) 格的鯊試劑原安瓿 6支，其中 2 支加人 0.1ml 或 0.2ml 供試品溶液 （其 稀釋倍數(shù)不得超過 MVD） 作為供試品管， 2 支分別加人 0.1mll 或 0.2ml 用 BET