總多酚的測定

1、、實驗原理 多酚類物質包括花青苷、黃酮苷、單寧等，具體又可分為若干種。多酚類物 質含有酚羥基，有的還含有羧基，屬于極性有機化合物，常用極性溶劑提取，如 甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水以及由這些溶劑按比例組成的復合溶劑。由以 上溶劑直接提取的多酚物質，實質為各種多酚的混合物（總多酚提取液）， 不同的原料中所含酚類物質的種類不同，需要進一步的分離鑒定。常用的植物多酚總量的測定方法中較為普遍使用的方法有 : 酒石酸亞鐵比色法、FD法、FC法、普魯士藍法等。其中酒石酸亞鐵分光光度比色法應用較多。酒石酸亞鐵分光光度比色法的原理：過量的酒石酸亞鐵與提取液中多酚反應 生成穩(wěn)定的紫褐色絡合物，溶液顏色的深淺與

2、溶液中多酚含量成正比。測定總多酚時所用的標準物則需根據樣品中所含多酚的種類而定， 比如測定茶葉中茶多酚含 量時，兒茶酚能較好地代表茶多酚，則以兒茶酚作標準物；而測定藤茶多酚時， 則以沒食子酸作標準物較合適。、實驗材料、試劑與儀器 材料：茶葉； 儀器：水浴鍋，分光光度計，三角瓶，容量瓶，吸管等； 試劑：（1）酒石酸亞鐵溶液：稱取I.OOg硫酸亞鐵（FeS04 7H2O和5.00g酒石酸鉀 鈉（C4H4O6NaK 4H20混合后加蒸餾水溶解定容到 1000mL（2） pH7.5 磷酸鹽緩沖液：稱取 60.20g Na2HPO412H2O和 5.00g NaH2PO412H2O 混合后加蒸餾水溶解定

3、容到 1000ml。三、操作步驟（一）標準曲線的制作或茶多酚含量經驗值的應用標準曲線的制作參照GB-8313-87茶一茶多酚測定方法。為簡化操作，可用 在一定操作條件下吸光度值為 1.00 時，供試液中茶多酚的濃度為 7.826 mg/mL” 這一經驗值，直接由待測液的吸光度值計算樣品中茶多酚的含量。1.福林試液的配制：取鎢酸鈉10g與鉬酸鈉2.5g，加水70ml、85%磷酸5ml與鹽酸10ml,置200ml燒瓶中,緩緩加熱回流10小時，放冷，再加硫酸鋰15g、 水 5ml 與溴滴定液 1 滴煮沸約 15分鐘，至溴除盡，放冷至室溫，加水使成 100ml。 濾過, 濾液作為貯備液。置棕色瓶中 ,

4、 于冰箱中保存。臨用前，取貯備液 2.5ml ，加水稀釋至10ml,搖勻，即得。用10mL乙醇溶液溶解0.5000g沒食子酸，定容至100mL分別移取3.0mL到100mL容量瓶中，用蒸餾水定容。加入福 林薛卡多(Folin-Ciocalteu )試劑顯色，在765nm波長下測定吸光度。每個 濃度做三個平行試驗，取平均值，根據標準曲線。取樣品溶液1mL按照上述的制作方法，測定其吸光度，每個樣品做三個平行試驗，取平均值，計算樣 品中的多酚含量。反應原理為酚類化合物在堿性條件下可以將鎢鉬酸還原，生成藍色的化合物，顏色的深淺與酚類化合物含量呈正相關，在波長760 nm左右有最大吸收。2.酒石酸亞鐵比色法。其測定原理是茶多酚類物質能與亞鐵離子形成紫藍色絡合物。用分光光度法測定其含量。茶多酚標準溶液的配制稱取提取純品 0.2500g,加水溶解定容至250mL混勻,即 為每毫升含1mg提取純品的標準溶液(mg/mL)。茶多酚的含量。茶多酚標準曲線的繪制。分別吸取茶多酚標準溶液 1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL于 4個50mL容量瓶中,各加水至10mL再加酒石酸亞鐵溶液10mL,加入pH為7. 5 的磷酸緩沖液至刻度,混勻后用1 c