FACSCalibur流式細(xì)胞儀操作維護(hù)規(guī)程

1、FACSCalibur流式細(xì)胞儀操作維護(hù)規(guī)程1目的規(guī)范流式細(xì)胞儀FACSCalibur操作維護(hù)規(guī)程，正確使用和維護(hù)儀 器，保證檢測(cè)工作順利進(jìn)行和設(shè)備安全。2. 適用范圍適用流式細(xì)胞儀FACSCalibur的使用操作。3. 職責(zé)操作人員按照木規(guī)程操作儀器，對(duì)儀器進(jìn)行正常維護(hù)，并作使用 記錄。保管人負(fù)責(zé)監(jiān)督儀器操作是否符合規(guī)程，并對(duì)儀器進(jìn)行定期維護(hù) 和保養(yǎng)。儀器管理人以及科室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)儀器綜合管理。4. 操作程序安全操作注意事項(xiàng)和特別提示：4.1.1該儀器必須有專(zhuān)人保管，使用前需通讀儀器說(shuō)明書(shū)。4.1.2嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，如儀器出現(xiàn)故障，應(yīng)馬上停止使用， 并立即向保管人、儀器管理人以及科室負(fù)責(zé)人報(bào)

2、告，嚴(yán)格按照單位有 關(guān)制度實(shí)施，不得擅自“修理”，查明原因，處理后儀器保管人應(yīng)及 時(shí)做好故障情況及維修記錄。設(shè)備每H開(kāi)機(jī)程序：開(kāi)啟穩(wěn)壓電源、變壓器，打開(kāi)流式細(xì)胞儀電源。開(kāi)啟其它周邊配備電源，如打印機(jī)，開(kāi)啟計(jì)算機(jī)。確認(rèn)鞘液筒有八分滿，廢液桶近似空的，桶蓋是旋緊的；所有管 線及管路裝置連接通暢，無(wú)扭曲、折疊。將氣壓閥方向調(diào)在加壓位置，用手感覺(jué)鞘液桶在慢慢鼓起。排除液流過(guò)濾器中的氣泡。等待機(jī)器預(yù)熱510分鐘后可開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。設(shè)備質(zhì)控程序：試劑準(zhǔn)備：4.3. 1. 1取試劑盒中的Unlabeled試劑，充分混勻，加一滴到裝 有l(wèi)ml鞘液的試管中，混勻，標(biāo)記為unlabeledo4.3. 1.2 取 FIT

3、C、PE、PerCP Unlabeled 試劑，充分混勻,各 加一滴到第二支裝有3ml鞘液的試管中，混勻，標(biāo)記為mixeda上機(jī)操作：4. 3. 2. 1按電腦桌而的FacsComp進(jìn)入質(zhì)控程序。4. 3. 2. 2在出現(xiàn)的“Sign in”窗口中輸入操作者姓名、單位、 領(lǐng)導(dǎo)姓名等相關(guān)信息，計(jì)算機(jī)將保存這些信息；單擊“Accept”。4. 3. 2. 3在試驗(yàn)選項(xiàng)中，選擇Lyse/No-Wash（LNW）:免洗程序。4. 3. 2. 4 在 Calibrite Beads Lot IDs 中，根據(jù)每種顏色的 beads 所對(duì)應(yīng)的Lot Ids,輸入編號(hào)，此編號(hào)在Calibrite beads試

4、劑盒內(nèi)， 打開(kāi)新買(mǎi)的試劑盒，里而有一張橙色膠紙，取出貼在試劑盒的背面， 標(biāo)題是 Calibrite beads? 3 Batch NO,選擇 FACS Flow Sheath b 的編號(hào)（右側(cè)的編號(hào)）。APC Lot ID（此欄不能空，即使是三色校正試劑)。4. 3. 2. 5在右側(cè)的保存選項(xiàng)中文件會(huì)自動(dòng)保存，路徑 FacstationBD fileFACSCompDDMNIYY,還可以單擊“LocationM 改 變文件保存路徑。4. 3. 2. 6按Run開(kāi)始上樣，在儀器面板上按Run Hio高速運(yùn)行, 速度不能低于400個(gè)細(xì)胞/秒，速度過(guò)低可在管中加一滴微球。4. 3. 2. 7上第一管

5、后，按Start鍵，儀器自動(dòng)調(diào)節(jié)PMT,完成后 窗口底部出現(xiàn)PMT set Successfullyv ,暫停5秒后自動(dòng)進(jìn)入下一 個(gè)調(diào)節(jié)窗口。注意：速度不能低于400個(gè)細(xì)胞/秒，速度過(guò)低可在管 中加一滴微球。4. 3. 2. 8上第二管，單擊Start,儀器開(kāi)始自動(dòng)調(diào)節(jié)補(bǔ)償并進(jìn)行 靈敏度測(cè)試。4. 3. 2. 9完成后儀器會(huì)給出提示，最后軟件給出一個(gè)Summary Reporto檢查報(bào)告中的“Result”是否都PASS,如果有的沒(méi)有PASS, 檢測(cè)原因。是否試劑過(guò)期，兩個(gè)試管中的液體和鞘液桶中的是否 相同，儀器做月維護(hù)，完成后再重新做FACSComp儀器指控。4. 3. 2. 10打印報(bào)告，

6、退出FACScomp軟件。樣本檢測(cè)程序4. 4. 1.樣本準(zhǔn)備：4. 4. 1. 1 取 TruCount Tube,編號(hào)。4.4. 1.2用反向加樣法在Tube中加入50ul充分混勻的抗凝全血，注意血不要碰到試管底部的微球(Beads )o4.4. 1.3取20ul熒光抗體加入到管中，注意：不要碰到血。渦 旋混勻，室溫避光放置15mino4.4. 1.4取出加入450ul 1XFACS溶血素，充分混勻，避光放 置 15min04. 4. 1. 5 24小時(shí)內(nèi)上機(jī)用MultiSET軟件獲取細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，上 機(jī)前應(yīng)充分混勻。4. 4. 2.上機(jī)操作：4. 4. 2. 1 執(zhí)行 FACSCalib

7、ur 機(jī)程序,進(jìn)入 MultiTEST 軟件。4. 4. 2. 2在出現(xiàn)的“Sign in”窗口中輸入操作者姓名、單位、 領(lǐng)導(dǎo)姓名等相關(guān)信息，計(jì)算機(jī)將保存這些信息，單擊“Accept”。4. 4. 2. 3 進(jìn)入Set up窗口:在Data Sourcen 對(duì)話框中選 擇 “From Cytome ter: Acquis iti on and Analysis ”，在E nt ry Level File Name Prefix 中選擇 uSample name在 “Automatic Saving Options” 中選擇 “Data File”、uLaboratory ReportuPhys

8、ician Report軟件會(huì)自動(dòng)生成一個(gè)文件，文件的默認(rèn)路徑FacstationBD file Multiset DDWYY 文件夾；在 “View Reports” 中選擇 “Until Next Button Pressed。4. 4. 2. 4 單擊 “Accept,進(jìn)入FACSComp窗口，單擊Skip FACSComp。4. 4. 2. 5 進(jìn)入Test Prefs” 窗口，在Physician Report Choices中，這一項(xiàng)可以是全選，運(yùn)行了一種試劑，會(huì)自動(dòng)報(bào)告相 應(yīng)的結(jié)果。在窗口的最下方點(diǎn)“Lot Ids”，跳出一窗口，點(diǎn)此窗口左 側(cè)的 aAbsolute Count

9、Beads”，在此窗口右側(cè)輸入 TruCount tube 的批號(hào)和Beads總數(shù)（標(biāo)在包裝袋上），單擊Save。單擊Accept”。4. 4. 2. 6進(jìn)入“Samples”窗口,在表格中輸入相應(yīng)的Patient Name、ID、Case Number,在 Panel 中選擇 CD4/8/3 True.4. 4. 2. 7在窗口最上方的“Cytometer”的下拉菜單中，單擊 u Instrument Setting在出現(xiàn)的新對(duì)話框中單擊Open”；打開(kāi)此 路徑下 FacstationBD file Instrument Setting 文件。調(diào)用儀 器各個(gè)參數(shù)的條件,選好后單擊“Set”，

10、“Done” .4. 4. 2. 8單擊“Run Tests,上樣,調(diào)整SSC電壓和閾值后，單 擊Acquire。4. 4. 2. 9獲取完成后，可以人工調(diào)整各個(gè)門(mén)的大小，單擊 Continue；打E卩Phys Report4.4. 2. 10繼續(xù)下一個(gè)實(shí)驗(yàn)，或單擊“Quit”，“Don t Save”,退出MultiTest軟件。每日關(guān)機(jī)程序?qū)悠分渭苤糜谂晕?，?mll0%漂白劑（有效氯濃度）作 樣品，使外管吸入l-2ml.將樣品支撐架置于中位，以HI RUN 5-10分鐘，使內(nèi)管吸入 約 lml.將樣品換成蒸鐳水重復(fù)步驟和。注意：最后要剩余約lml蒸憎 水浸泡進(jìn)樣針，防止結(jié)晶形成。選擇

11、Standby模式5分鐘后可關(guān)掉主機(jī).退出所有應(yīng)用軟件，關(guān)閉電腦，關(guān)閉穩(wěn)壓器和變壓器。將流式細(xì)胞儀的壓力閥置于減壓狀態(tài)。清潔和維護(hù)每日維護(hù)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，請(qǐng)于關(guān)機(jī)前清潔加樣針的外管和內(nèi)管, 防止加樣針堵塞或有染料殘留。清潔方法同每日關(guān)機(jī)程序。每月維護(hù)：流式細(xì)胞儀使用一段時(shí)間后，在鞘液管路、廢液管路 和流動(dòng)池中會(huì)有殘留的碎片、污染物等，因此，需要定期清洗管路， 要求至少每個(gè)月做一次。5.2.1在儀器減壓后，取下鞘液筒，倒空。如有必要，應(yīng)清洗鞘液筒。5. 2.2將鞘液濾器短路，使鞘液不流經(jīng)濾器，直接沿鞘液管路進(jìn)入流動(dòng) 池。5. 2. 3鞘液筒中倒入2L濃度為%稀釋漂白劑（注意不能使用原濃度）。5.

12、2. 4上樣管中加入4ml濃度為%稀釋漂白劑。5. 2.5流速選擇HI檔，RUN運(yùn)行20-30分鐘。5. 2.6鞘液筒用蒸飾水清洗干凈，再加入蒸憎水2L。5. 2. 7取下有漂白劑的上樣管，換上有4ml蒸鐳水的上樣管。5.2.8流速選擇HI檔，RUN運(yùn)行20-30分鐘。5. 2. 9鞘液筒中換成鞘液，重新安裝好鞘液濾器管路。5.2. 10流動(dòng)池PRIME兩遍，PRIME結(jié)束后，儀器自動(dòng)回復(fù)到STANDBY狀 態(tài)。5.2. 11上樣管中加入蒸鎘水，RUN運(yùn)行5分鐘。5. 2. 12 儀器進(jìn)入STANDBY狀態(tài)，可以進(jìn)行樣本檢測(cè)。定期維護(hù)更換鞘液過(guò)濾器如果鞘液污染將會(huì)影響樣品檢測(cè)結(jié)果時(shí)，在技術(shù)支持指導(dǎo)下或參 照用戶手冊(cè)的有關(guān)內(nèi)容