刻度吸量管的使用

1、臨床生物化學和生物化學檢驗實驗操作技能項目與考核標準一、刻度吸量管的使用技能1. 選擇：使用前先根據(jù)需要選擇適當?shù)奈抗埽潭任抗艿目側萘孔詈玫扔诨蛏源笥谧畲?取液量。臨用前要看清總容量和刻度。2. 執(zhí)管：用拇指和中指（輔以無名指） ，拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。 刻度數(shù)字要朝向自己。3. 取液：另一只手捏壓橡皮球，將吸量管插入液體內(nèi)（不得懸空，以免液體吸入球內(nèi)），用橡皮球?qū)⒁后w吸至最高刻度上端 12cm 處，然后迅速用食指按緊吸量管上口，以免液體從 吸量管下口流出。4. 調(diào)準刻度：將吸量管提出液面，吸粘性較大的液體時，先用濾紙擦干管尖外壁；然后用食 指控制液體使之緩慢下降，

2、當至所需刻度時， 立即按緊吸量管上口 （此時液體凹面、視線和 刻度應在同一水平面上） 。5. 放液：放松食指，讓液體自然流入容器內(nèi)，放液時，管尖最好接觸容器內(nèi)壁，但不要插入 容器內(nèi)原有的液體中，以免污染吸量管和試劑。6. 洗滌： 吸取血液、 血清等粘稠液體及尿液標本的吸量管， 使用后要及時用自來水沖洗干凈； 吸一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，實驗完畢后再沖洗。沖洗干凈后，晾干，再浸泡于鉻 酸洗液中，數(shù)小時后取出，再用流水沖凈，最后用蒸餾水沖洗，晾干備用。二、溶液的混勻技術 混勻的方式大致有以下幾種，可隨使用的器皿和液體容量而選用。1. 旋轉混勻法 用手持容器，使溶液作離心旋轉，適用于未盛滿液體

3、的試管或小口器皿， 如錐形瓶。旋轉試管時最好用手腕旋轉。2. 指彈混勻法 左手持試管上端，用右手指輕輕彈動試管下部，使管內(nèi)溶液作旋渦運動。3. 倒轉混勻法 適用于有塞量筒和容量瓶、試管內(nèi)容物的混勻。一般試管內(nèi)容物的混勻可 用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒轉混勻。4. 吸管混勻法 用吸量管將溶液反復吸放數(shù)次，使溶液充分混勻。5. 玻棒攪動法 適用于燒杯內(nèi)容物的混勻，如固體試劑的溶解和混勻。6. 甩動混勻法 右手持試管上部，輕輕甩動振搖，即可混勻。7. 電磁攪拌混勻法 在電磁攪拌機上放置燒杯，在燒杯內(nèi)放入封閉于玻璃或塑料管中的小 鐵棒，利用磁力使小鐵棒旋轉以達到混勻杯中液體的目的，適用于酸堿自

4、動滴定， pH 梯度 滴定等。8. 振蕩器混勻法 利用振蕩器使容器中的內(nèi)容物振蕩，達到混勻的目的。9. 注意： （1） 混勻時須防止容器內(nèi)液體濺出或被污染。 （2） 嚴禁用手指直接堵塞試管口或錐 形瓶口振搖。三、離心機的使用方法使用離心機前，應檢查離心機轉動狀態(tài)是否平穩(wěn)，以確定離心機的性能；檢查套管與 離心管大小是否相配，套管是否鋪好軟墊（用棉藥或橡皮） ，檢查套管底部應無碎玻璃片或 漏縫。檢查合格后，將一對離心管（待分離管與非分離空白管）放入一對套管中，然后連套 管一起分置粗天平兩側， 用滴管向非分離空白管一側加水， 直至天平兩側彼此相等為止。 將 各對平衡的套管連同內(nèi)容物放置于離心機內(nèi)，

5、兩個等重的離心管必須放于對稱位置。 放妥后， 接通電源開關， 逐步扭動轉速旋鈕， 緩慢增加離心機轉速， 直到所需的轉速。 達規(guī)定時間后， 將轉速旋鈕逐步調(diào)回零，待離心機停穩(wěn)后，取出離心管。四、721 型分光光度計使用方法如下：1. 接通電源（指示燈亮），預熱1520分鐘。2. 靈敏度選擇鈕放在“ 1 ”檔（如調(diào)不到“ OD=0” 時選用較高的檔次） 。3. 轉動波長選擇鈕，選用所需的波長。4. 揭開比色杯暗箱蓋，轉動“ 0電位器”使電表指針對準 T=0處。5. 將比色杯放入比色杯架，使空白管對向光路，蓋好比色杯暗箱蓋。轉動“100電位器” ，調(diào)準電表指針使之指向 OD=0（T=100）處。6.

6、 拉動比色杯座的拉桿，使測定杯進入光路，迅速從電表上讀出光密度值，并記錄。測讀過程中，隨機拉回拉桿到原位，使空白杯進入光路，隨時調(diào)整OD=0。7. 比色完畢后，關上電源開關，取出比色杯，將比色杯暗箱蓋好，清洗比色杯并晾干。五、恒溫水浴箱的使用1、加水到適當高度。2、接通電源，打開開關。3、調(diào)節(jié)溫度，使之恒溫。4、如長時間不用，應關上開關拔掉電源。六、氨基酸的薄層層析技術操作步驟：（一）薄板的制備1稱取硅膠 G 0.5g 放入研缽中，加 1.5ml0.2% 羧甲基纖維素鈉，研磨成均勻的稀糊狀。2. 將上述糊狀物傾倒在 4X 10cm的玻璃片（圖11）上，使之均勻地布滿于玻片，將玻片輕 輕地晃動，

7、使硅膠 G均勻分布，表面平坦，光滑，無水層及氣泡，然后水平放置在空氣中使 其自然干燥。3. 薄板上硅膠干后，放入 105 C的恒溫干燥箱內(nèi)活化，半小時后取出，晾涼備用。（二）點樣1. 在距離薄板一端約 2cm 處用細線向下壓硅膠，壓成一條點樣線。2. 用直徑約1mm的玻璃毛細管分別吸取甘氨酸、精氨酸、酪氨酸及混合氨基酸溶液，在點樣線上點樣，每隔0.8cm處點一種樣品（約 5ul ），點樣直徑約23mm待點樣處干后，再將 樣品在原點樣處重復點一次。（三）展層1. 硅膠板的點樣端向下，傾斜地放入層析缸內(nèi)，使其與缸底平面呈約30。角。2 用長頸漏斗加入展開劑使展開劑離點樣處12cm處為止。3. 蓋上

8、層析缸蓋進行層析。4. 當展開劑前沿到達玻璃板全長的3/4 處停止層析，取出玻片，記下展開劑前沿位置，將 硅膠板置干燥箱烘干。（四）顯色1. 用 0.5%茚三酮丙酮溶液均勻地噴灑于硅膠板上。2將玻板置105 C干燥箱內(nèi)烘干，約 2分鐘左右即可顯出粉紅色斑點。（五）測量101分別測量甘氨酸、精氨酸、酪氨酸的Rf值，作為標準。2. 再測出混合液中分離出的各種氨基酸的Rf值與標準值對照，以確定為何種氨基酸。（六）結果計算計算Rf值:R值=氨基酸移動的距離（cm） 溶劑移動的距離（cm）樣品至色斑中心的距離（cm）樣品至溶劑前沿的距離（cm）七、血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳操作步驟1準備與點樣： 取8

9、cm 2cm醋酸纖維素薄膜，將其浸泡在pH8.6緩沖溶液中，待薄膜完全 浸透后，取出輕輕夾于濾紙中，吸去多余的液體。 然后用點樣器蘸新鮮血清， 在無光澤面距 一端約2cm處點樣。待血清全部滲入膜內(nèi) ,移開點樣器。2電泳：取已點樣的薄膜，點樣面向下兩端緊貼在四層濾紙橋上，注意點樣端放陰極。蓋好電泳槽蓋，平衡10分鐘，打開電源開關，調(diào)節(jié)電壓至110130V,電流0.40.6mA/cm,通電4560分鐘。3染色與漂洗：電泳結束后，關閉電源。 將薄膜從電泳槽中取出，浸入氨基黑10B染色液中510分鐘。待充分染色后，取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗34遍，直至背景無色為止。用濾紙吸干薄膜。4定量：取試管6支，

10、編號，將電泳薄膜按蛋白質(zhì)區(qū)帶剪開，分別置于試管中，另于薄膜的空白部分剪一平均大小的薄膜條放入空白管中。各管中加入0.4mol/L NaOH 5ml，反復振搖，使其顏色充分洗脫。用721分光光度計進行比色，波長650nm,以空白管調(diào)零，讀取各管的吸光度。各種蛋白質(zhì)占總蛋白百分含量的計算：吸光度總和（T）=ODa+OD什OD2+OD+OD清蛋白（A）% = ODa /T 100-球蛋白 % = OD：1/T 100:-2-球蛋白 % = OD：2/T 100-球蛋白 % = OD 7T 100-球蛋白 % = OD /T 1005. 結果識別與計算點樣線-2 清蛋白臨床生物化學實驗操作技能項目與考

11、核標準一、刻度吸量管的使用技能1. 選擇：使用前先根據(jù)需要選擇適當?shù)奈抗?，刻度吸量管的總容量最好等于或稍大于最?取液量。臨用前要看清總容量和刻度。2. 執(zhí)管：用拇指和中指（輔以無名指） ，拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。 刻度數(shù)字要朝向自己。3. 取液：另一只手捏壓橡皮球，將吸量管插入液體內(nèi)（不得懸空，以免液體吸入球內(nèi)），用橡皮球?qū)⒁后w吸至最高刻度上端 12cm 處，然后迅速用食指按緊吸量管上口，以免液體從 吸量管下口流出。4. 調(diào)準刻度：將吸量管提出液面，吸粘性較大的液體時，先用濾紙擦干管尖外壁；然后用食 指控制液體使之緩慢下降，當至所需刻度時， 立即按緊吸量管上口 （此時液

12、體凹面、視線和 刻度應在同一水平面上） 。5. 放液：放松食指，讓液體自然流入容器內(nèi)，放液時，管尖最好接觸容器內(nèi)壁，但不要插入 容器內(nèi)原有的液體中，以免污染吸量管和試劑。6. 洗滌： 吸取血液、 血清等粘稠液體及尿液標本的吸量管， 使用后要及時用自來水沖洗干凈； 吸一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，實驗完畢后再沖洗。沖洗干凈后，晾干，再浸泡于鉻 酸洗液中，數(shù)小時后取出，再用流水沖凈，最后用蒸餾水沖洗，晾干備用。二、溶液的混勻技術 混勻的方式大致有以下幾種，可隨使用的器皿和液體容量而選用。1. 旋轉混勻法 用手持容器，使溶液作離心旋轉，適用于未盛滿液體的試管或小口器皿， 如錐形瓶。旋轉試管時最好用

13、手腕旋轉。2. 指彈混勻法 左手持試管上端，用右手指輕輕彈動試管下部，使管內(nèi)溶液作旋渦運動。3. 倒轉混勻法 適用于有塞量筒和容量瓶、試管內(nèi)容物的混勻。一般試管內(nèi)容物的混勻可 用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒轉混勻。4. 吸管混勻法 用吸量管將溶液反復吸放數(shù)次，使溶液充分混勻。5. 玻棒攪動法 適用于燒杯內(nèi)容物的混勻，如固體試劑的溶解和混勻。6. 甩動混勻法 右手持試管上部，輕輕甩動振搖，即可混勻。7. 電磁攪拌混勻法 在電磁攪拌機上放置燒杯，在燒杯內(nèi)放入封閉于玻璃或塑料管中的小 鐵棒，利用磁力使小鐵棒旋轉以達到混勻杯中液體的目的，適用于酸堿自動滴定， pH 梯度 滴定等。8. 振蕩器混勻

14、法 利用振蕩器使容器中的內(nèi)容物振蕩，達到混勻的目的。9. 注意： （1） 混勻時須防止容器內(nèi)液體濺出或被污染。 （2） 嚴禁用手指直接堵塞試管口或錐 形瓶口振搖。三、離心機的使用方法使用離心機前，應檢查離心機轉動狀態(tài)是否平穩(wěn)，以確定離心機的性能；檢查套管與 離心管大小是否相配，套管是否鋪好軟墊（用棉藥或橡皮） ，檢查套管底部應無碎玻璃片或 漏縫。檢查合格后，將一對離心管（待分離管與非分離空白管）放入一對套管中，然后連套 管一起分置粗天平兩側， 用滴管向非分離空白管一側加水， 直至天平兩側彼此相等為止。 將 各對平衡的套管連同內(nèi)容物放置于離心機內(nèi)， 兩個等重的離心管必須放于對稱位置。 放妥后，

15、接通電源開關， 逐步扭動轉速旋鈕， 緩慢增加離心機轉速， 直到所需的轉速。 達規(guī)定時間后， 將轉速旋鈕逐步調(diào)回零，待離心機停穩(wěn)后，取出離心管。四、721 型分光光度計使用方法如下：1. 接通電源（指示燈亮），預熱1520分鐘。2. 靈敏度選擇鈕放在“ 1 ”檔（如調(diào)不到“ OD=0” 時選用較高的檔次） 。3. 轉動波長選擇鈕，選用所需的波長。4. 揭開比色杯暗箱蓋，轉動“ 0電位器”使電表指針對準 T=0處。5. 將比色杯放入比色杯架，使空白管對向光路，蓋好比色杯暗箱蓋。轉動“100電位器” ，調(diào)準電表指針使之指向 OD=0（T=100）處。6. 拉動比色杯座的拉桿，使測定杯進入光路，迅速從

16、電表上讀出光密度值，并記錄。測讀過程中，隨機拉回拉桿到原位，使空白杯進入光路，隨時調(diào)整OD=0。7. 比色完畢后，關上電源開關，取出比色杯，將比色杯暗箱蓋好，清洗比色杯并晾干。五、722型分光光度計使用方法如下：1. 接通電源（指示燈亮），預熱1520分鐘。2. 靈敏度選擇鈕放在“ 1”檔（如調(diào)不到“ OD=0 時選用較高的檔次）。3. 轉動波長選擇鈕，選用所需的波長；調(diào)節(jié)“TAC旋鈕”至“ T”刻度。4. 揭開比色杯暗箱蓋，轉動“ 0電位器”使顯示器顯示為“ 0”。5. 將比色杯放入比色杯架，使空白管對向光路，蓋好比色杯暗箱蓋。轉動“100電位器”，使顯示器顯示為“ 100”。6. 調(diào)節(jié)“

17、TAC旋鈕”至“ A”刻度，觀察顯示器顯示是否為“0”；若不為“ 0”，調(diào)節(jié)“ Abs0旋鈕”使顯示器顯示為“ 0 ”。7. 拉動比色杯座的拉桿，使測定杯進入光路，迅速從電表上讀出光密度值，并記錄。測讀過程中，隨機拉回拉桿到原位，使空白杯進入光路，隨時調(diào)整OD/A=O8比色完畢后，關上電源開關，取出比色杯，將比色杯暗箱蓋好，清洗比色杯并晾干。六、恒溫水浴箱的使用5、加水到適當高度。6、接通電源，打開開關。7、調(diào)節(jié)溫度，使之恒溫。8、如長時間不用，應關上開關拔掉電源。七、血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳操作步驟1.準備與點樣：取8cm 2cm醋酸纖維素薄膜，將其浸泡在pH8.6緩沖溶液中，待薄膜完全

18、浸透后，取出輕輕夾于濾紙中，吸去多余的液體。 然后用點樣器蘸新鮮血清，在無光澤面距一端約2cm處點樣。待血清全部滲入膜內(nèi),移開點樣器。2電泳：取已點樣的薄膜，點樣面向下兩端緊貼在四層濾紙橋上，注意點樣端放陰極。蓋好電泳槽蓋，平衡10分鐘，打開電源開關，調(diào)節(jié)電壓至110130V,電流0.40.6mA/cm,通電4560分鐘。3染色與漂洗：電泳結束后，關閉電源。 將薄膜從電泳槽中取出，浸入氨基黑10B染色液中510分鐘。待充分染色后，取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗34遍，直至背景無色為止。用濾紙吸干薄膜。4定量：取試管6支，編號，將電泳薄膜按蛋白質(zhì)區(qū)帶剪開，分別置于試管中，另于薄膜的空白部分剪一平均大小的薄膜條放入空白管中。各管中加入O.4mol/L NaOH 5ml，反復振搖，使其顏色充分洗脫。用 721分光光度計進行比色，波長650nm,以空白管調(diào)零，讀取各管的吸光度。各種蛋白質(zhì)占總蛋白百分含量的計算：吸光度總和（T）=ODa+ODi+OD_2+OD+OD清蛋白（A）% = ODa /T 100：i-球蛋白 % = OD1/T 100：2-球蛋白 % = OD-2/T 100-球蛋白 % = OD /T 100-球蛋白 % = OD