酪蛋白磷酸肽無定形磷酸鈣對(duì)酸蝕牙釉質(zhì)顯微硬度的影響

1、酪蛋白磷酸肽-無定形磷酸鈣對(duì)酸蝕牙釉質(zhì)顯微硬度的影響 喻明玲,林居紅,胡 費(fèi) 401147重慶，垂慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院兒童牙病中心及口腔預(yù)防科.重慶市口腔疾病與生 物醫(yī)學(xué)研究中心) 摘要目的 用顯微鎖度測：S：法研處酪蛋白磷酸肽-無定形磷酸鈣(casein phosphopeptideamorphous calcium phosphate. CPP-ACP)對(duì)碳酸飲料酸蝕后的牙柚質(zhì)的再礦化作用。方法 收集臨床拔除的第三磨牙共15顆，制成牙釉 質(zhì)樣木30個(gè)，完全隨機(jī)分為：去離子水組(陰性對(duì)照組)、CPP-ACP組(實(shí)驗(yàn)組)、氟保護(hù)漆組(陽性對(duì)照組)，每組 10個(gè)樣木。各組樣木分別用可樂酸蝕.7

2、次/d,每次2 mm- 8 h內(nèi)完成.共7 d,然后分別進(jìn)行再礦化處理。去離子 水組宜于去離子水中.不做其他處理：CPP-ACP組和弒保護(hù)漆組分別用CPP-ACP和做保護(hù)漆處理。分別在酸蝕前、酸 蝕后和再礦化后用維氏顯微砍度汁測定釉質(zhì)表血碩度并進(jìn)行掃描電鏡觀察結(jié)果經(jīng)可樂酸蝕后的牙釉質(zhì)表面換度值 較酸蝕前有明顯下降(P0.05)：經(jīng)再礦化處理后，CPP-ACP組和氟保護(hù)漆組牙釉質(zhì)表面碩度值與去離子水組相比均有 統(tǒng)計(jì)學(xué)差界(P0 05)：且CPP-ACP組和氛保護(hù)漆組之間的差界有統(tǒng)汁學(xué)意義(P0 05)。掃描電鏡觀察結(jié)果顯示:CPP-ACP 組和氛保護(hù)漆組經(jīng)過再礦化處理后.脫礦釉質(zhì)表面有礦物質(zhì)沉積

3、c結(jié)論CPP-ACP能促進(jìn)鈣鹽沉積于脫礦釉質(zhì)表面而 提高酸蝕牙釉質(zhì)的顯微碩度.顯著促進(jìn)酸蝕釉質(zhì)再礦化。 關(guān)鍵詞牙酸蝕癥：酪蛋白確酸肽-無定形磷酸鈣：顯微鎖度：再礦化 中圖法分類號(hào)文獻(xiàn)標(biāo)志碼A Effect of casein phosphopeptide-amorphous calcium phosphate on microhardness of erosived enamel Yu Mingling, Lin Juhong, Hu Yun (Childrens Dental Center. Department of Dental Prevention. Chongqing Researc

4、h Center for Oral Diseases and Biomedical Science. Flospilal of Stomatology . Chongqing Medical University. Chongqing, 401147. China) Abstract Objective To investigate the remineralization potential of casein phosphopeptide-aniorphous calcium phosphate (CPP-ACP) on the surface microhardness of human

5、 enamel eroded by a carbonated soft drink Methods Fifteen third molars were collected at clinic and were processed into 30 enamel slabs. The enamel slabs were randomly divided into 3 groups (/?=10): deionized water group, CPP-ACP group, and fluoride vanish group Each specimen was first immersed in a

6、 cola drink for 2 min, 7 times a day for 7 d. Then the specimens were subjected to 3 different remineralization protocols, deionized water, CPP-ACP and fluoride vanish. Vickers microhardness (SMH) measurements were obtained at baseline, after the cola drink erosion, and after remineralization stage

7、The enamel specimens were analyzed by scanning electron microscopy (SEM). Results Enamel hardness was significantly decreased after immersion in a cola drink (P0.05). The SMH of the enamel slab treated with CPP-ACP and fluoride vanish was significantly increased compared with that of the control (P0

8、.05), and there was significant difference between the 2 former groups (P CPP-ACP）受到廣泛關(guān)注。CPP-ACP含有髙 濃度的具有生物活性的鈣、磷離子，無毒副作用，并 且有報(bào)逍指出它有抑制脫礦、促進(jìn)再礦化的作用。本 研究通過體外實(shí)驗(yàn)比較CPP-ACP和氟保護(hù)漆作用于飲 料酸蝕牙釉質(zhì)前后顯微硬度的變化，評(píng)價(jià)CPP-ACP對(duì) 酸蝕牙釉質(zhì)的作用。 1材料與方法 1.1材料及設(shè)備 CPP-ACP （Tooth Mousse,日木GC公司）氟保護(hù)漆（牙科 學(xué)柯伯脂含氛涂膜C型.北京鑫源恒信醫(yī)療器械有限公司.含 NaF 500

9、0ppm）.可口可樂（重慶可口可樂飲料有限公司.pH 2.42）,人工唾液（人工唾液配方采用ISO/TR1O271： 1993標(biāo) 準(zhǔn)）.HVS-1000型數(shù)顯顯微鎖度il（上海聯(lián)爾試驗(yàn)設(shè)備有限公 司）。JSM-6160LV型掃描電鏡（日本電子公司）。 1.2須僉方法 1.2.1樣木的制備及酸蝕處理收集牙冠完整因阻生拔 除的下頜第三磨牙，體視鏡下選擇釉質(zhì)表而無齡壞.無脫礦. 無隱裂、無氛斑及釉質(zhì)缺損的牙共15顆，淸潔牙面，沿牙長 軸近遠(yuǎn)中向切開制備樣木30個(gè)。所有樣木包埋于環(huán)氧樹脂中. 釉質(zhì)表倆暴露，分別制成商10 mm、直徑25 mm大小的圓柱體 標(biāo)木，用碳硅砂紙將釉質(zhì)表面由粗至細(xì)打磨（粒度為

10、800 0. 1 000目、1 200目、1 500目.2 000目）.使之呈鏡面狀。 在磨平釉面處留出4mmX4mm的正方形開窗區(qū).其氽部分用抗 酸抬甲汕涂抹封閉。將30個(gè)柚質(zhì)樣木完全隨機(jī)分為3組 （n=10）,去離子水組、CPP-ACP組和氛保護(hù)漆組。飲料選用 市售瓶裝碳酸飲料可口可樂（pH=2. 42）, 3組樣木分別浸泡于 100ml飲料中每次2min, 7次/d,于8 h內(nèi)完成,共7 d, 間斷期置于379人工唾液中。每次浸泡更換新鮮可口可樂, 人工唾液每24小時(shí)更換1次。7d后，將可口可樂酸蝕過的3 組樣木用去離子水沖洗，吸T表面水分，放于去離子水中備用。 1.2.2再礦化實(shí)驗(yàn)去離

11、子水組：去離子水處理.2次/d 每次3 min,共7d： CPP-ACP組：按照產(chǎn)品使用說明,用小 毛刷籠日木GC Tooth Mousse均勻涂布于開窗處釉質(zhì)表面，靜 宜3 min.然后去離子水沖洗.2次/d,共7d；氟保護(hù)漆組： 按照廠商推薦使用方法，小毛刷離氛保護(hù)漆均勻涂布于開窗處 釉質(zhì)表面.靜置3 min,去離子水沖洗,1次/d.共1 d。間 斷期置于379人工唾液中，每24小時(shí)更換1次人工唾液。 1.2.3釉質(zhì)表面顯微鎖度測雖 分別在酸蝕前、酸蝕后.再 礦化實(shí)驗(yàn)后測雖牙釉質(zhì)表Ifti顯微換度（surface microhardness, SMH）,使用HVS-1000空維氏數(shù)字顯微換

12、度i Is 200 g負(fù)荷，加載10 s。每個(gè)釉質(zhì)塊測址3個(gè)點(diǎn).取其平均值。 1.2.4掃描電鏡檢査 各組樣木分別在酸蝕前.酸蝕后.再 礦化后隨機(jī)選取2個(gè)樣木從正中剖開.一半用于顯微便度測 試，一半宜干電鏡固定液中用于掃描電鏡觀察。將標(biāo)木從固定 液中取出.室溫下干燥，逐一固定于掃描電鏡載物臺(tái)上，在真 空中噴金.掃描電鏡下觀察標(biāo)木釉質(zhì)表血孔隙及釉柱的改變情 況。 1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所得數(shù)抿使用SPSS 10.0統(tǒng)訃軟件進(jìn)行分析運(yùn)用自身配 對(duì)（檢驗(yàn)對(duì)各組實(shí)驗(yàn)前后表面顯微換度值進(jìn)行比較.使用單因 素方差分析對(duì)3組樣木實(shí)醴前后的顯微換度值進(jìn)行分析，使用 SNK法進(jìn)行兩兩比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05o 2

13、結(jié)果 2.1表面顯微硬度測試結(jié)果 酸蝕前3組間牙釉質(zhì)SMH差界無統(tǒng)汁學(xué)總義（P0.05）： 經(jīng)過7d可口可樂處理后.3組釉質(zhì)SMH均較酸蝕前明顯降低 （P0.05）o與陰性對(duì)照組（去離子水組）相比.經(jīng)CPP-ACP 和氛保護(hù)漆分別處理后的CPP-ACP組和氛保護(hù)漆組的牙柚質(zhì) SMH均比酸蝕后的顯著上升（PvO.05）,同時(shí)CPP-ACP組和氟 保護(hù)漆組間的SIV1H差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P005）見表1。 2.2離體牙表面掃描電僮觀察結(jié)果 用JSM-6460LV型掃描電鏡觀察樣木牙釉質(zhì)表而的超微結(jié) 構(gòu)，結(jié)果顯示：正常釉質(zhì)表面光滑.致密平坦，未見凹陷缺損 （圖1A）O釉質(zhì)經(jīng)可口可樂酸蝕后，表面形態(tài)不

14、規(guī)則，組織結(jié)構(gòu) 疏松，脫礦明顯，形成無數(shù)微小間隙.呈凸凹不平的粗糙面（圖 1B）O CPP-ACP處理后，有散在凹陷性缺損，但表而有大雖分 布不均勻、致密的礦物質(zhì)顆粒沉積.礦化物顆粒大小不一結(jié) 構(gòu)無序，有的聚集成簇（圖1C）O氛保護(hù)漆處理后低亮度、斑 片樣薄膜覆蓋于釉質(zhì)表面，之間有點(diǎn)隙樣和址樣缺損（圖IDh 表1 3組牙釉質(zhì)酸蝕前、酸蝕后及再礦化后表面顯微碩度值比較 （HV.n=10, ；s） 組別 去離子水組 34B:可樂酸蝕后雜質(zhì)；C:可樂酸蝕后經(jīng)CPP-ACP處理后雜質(zhì)； D：可樂酸蝕后經(jīng)氟保護(hù)漳處理后釉質(zhì) 圖1掃描電鍍觀察牙釉質(zhì)樣本在不同條件下的表面的超徴結(jié)構(gòu)(SEM x5 3討論 研

15、究證實(shí)，許多酸性飲料的pH值介于2.24.9 之間，而牙釉質(zhì)脫礦的臨界pH值為5.05.5,酸性 飲料能造成牙體硬組織脫礦、牙釉質(zhì)軟化以及牙體硬 組織表面注層喪失。近年來，國內(nèi)外流行病學(xué)調(diào)查研 究表明：酸蝕癥在人群中普遍存在，且發(fā)病率呈上升 趨勢。陳亞剛等對(duì)徐州市5歲和12歲兒童酸蝕癥患 病情況調(diào)査發(fā)現(xiàn)，5歲兒童牙齒酸蝕癥的患病率為 10.91%, 12歲兒童牙齒酸蝕癥的患病率為22.14%, 酸性飲料是造成牙酸蝕癥的主要危險(xiǎn)因素。酸蝕癥在 開始階段無自覺癥狀，隨后會(huì)出現(xiàn)牙本質(zhì)過敏癥狀， 嚴(yán)重者出現(xiàn)牙髓集需甚至牙折，而且酸蝕癥和齷病及 磨損也密切相關(guān)，因而早期的干預(yù)和防治非常有必 要。 牙體硬

16、組織在酸的作用下，其中的礦物質(zhì)發(fā)生溶 解，鈣和磷酸鹽等無機(jī)離子脫出即為脫礦。眾多研 究表明，牙酸蝕癥的發(fā)生過程就是牙鈾質(zhì)的脫礦過 程。本實(shí)驗(yàn)采用可口可樂作為脫礦劑建立牙酸蝕癥模 型。有研究者通過體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，牙釉質(zhì)經(jīng)過 可樂酸蝕后會(huì)脫礦而導(dǎo)致表而顯微硬度下降&7】。實(shí)驗(yàn) 采用間斷可樂浸泡法，間斷期樣本浸泡于人工唾液 中，置于37C水浴恒溫箱，以模擬正常的口腔環(huán)境及 飲用飲料的生活狀態(tài)。7d后測試3組可樂酸蝕后牙釉 質(zhì)表而顯微硬度，結(jié)果顯示各組釉質(zhì)SMH較酸蝕前 有明顯降低(P：而掃描電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)可口 可樂酸蝕后，釉質(zhì)表而形態(tài)不規(guī)則，組織結(jié)構(gòu)疏松， 脫礦明顯，形成無數(shù)微小間隙呈凸凹不平

17、的粗糙面。 由此可見可口可樂對(duì)牙釉質(zhì)的損害是肯泄的。唾液中 的鈣、磷及其他礦物離子不斷沉積在正?；虿糠置摰V 的釉質(zhì)上，并形成疑基磷灰石的過程為再礦化。在 牙酸蝕癥早期，通過再礦化治療可阻止牙釉質(zhì)礦物質(zhì) 的持續(xù)尚失，預(yù)防驕病和磨損的發(fā)生，因此針對(duì)牙而 酸蝕脫礦的早期再礦化治療有著積極的意義。 氟化物在傳統(tǒng)的再礦化藥物中占了主導(dǎo)地位。牙 面局部用氟后，在牙釉質(zhì)或牙本質(zhì)表而形成氟磷灰石 或氟化鈣，從而促進(jìn)了再礦化過程。有研究指出，低 濃度的氟化物的再礦化作用并不明顯切。但是，局部 高濃度氟化物的長期應(yīng)用可能導(dǎo)致耐氟菌株的選擇 性生長3】，且耐腐菌株的致顒力高于親代野生菌)； 而且，髙濃度氟化物使用的

18、安全性問題存在爭議，因 而尋求一種安全有效的再礦化制劑很有必要。酪蛋白 磷酸肽(casein phosphopeptides, CPP)是以牛乳酪蛋白 為原料，通過生物技術(shù)制得的具有生物活性的多肽， 有很強(qiáng)的促鈣吸收活性，它黏附在無左形磷酸鈣 (amorphous calcium phosphate, ACP)的表而形成亳 微簇酪蛋白磷酸肽-無圮形磷酸鈣復(fù)合體(casein phosphopeptide-amorphouscalcium phosphate.CPP-ACP),抑制其進(jìn)一步的成長而結(jié)晶成 核，維持了鈣磷離子在溶液中的穩(wěn)左性，成為具有生 物活性的鈣、磷離子的儲(chǔ)庫說)。CPP-ACP

19、通過粘附 在牙而上釋放岀具有生物活性的鈣磷離子，維持了一 個(gè)對(duì)于牙釉質(zhì)而鈣磷離子的過飽和狀態(tài)，有抑制牙釉 質(zhì)脫礦并促進(jìn)再礦化的作Tantbiroin等通過 體外酸蝕實(shí)驗(yàn)以及Ranjitkar等通過體外酸蝕一磨損 實(shí)驗(yàn)均證實(shí)了 CPP-ACP對(duì)脫礦釉質(zhì)的再礦化作用 本實(shí)驗(yàn)采用表而顯微硬度測試法研究CPP-ACP 對(duì)酸蝕釉質(zhì)的作用。因?yàn)橛再|(zhì)的礦物質(zhì)含量與硬度之 間存在線性關(guān)系，顯微硬度測試可以反映牙釉質(zhì)的一 個(gè)脫礦和再礦化的情況卩叭實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，CPP-ACP 和氟保護(hù)漆均能使可樂酸蝕后的牙釉質(zhì)表而顯微硬 度增加，且CPP-ACP組的表而顯微硬度值高于氟保 護(hù)漆組(Pcompkxcs|J). J

20、Biol Chem. 2005. 280( 15: 15362-15369. 113 Poggio C Lombardini M Dagna A. ct al. Prolcclivc eflccl on enamel demincralizalion of a CPP-ACP paste: an AFM in vitro study)J |. J Dent. 2009.37(12):949-954 114J Hamba H. Nikaido T, Inoue G cl al. Eflccts of CPP-ACP wilh sexlium fluoride on inhibilion of b

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