LoadingBuffer蛋白印記教程文件

1、L o a d i ng Buf f er 蛋白印記精品文檔5SDS-PAGE Loading Buffer 的配制（ 10 ml） （本方案摘自蛋白質(zhì)技術(shù)手冊汪家政、范明） 組分： Tris-HCl pH6.8 （60 mM ）； SDS （2%）；溴酚蘭（ 0.1%）；甘油 （25%）；-巰基乙醇（ 14.4 mM）配制過程：1. 量取 1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油 5 ml；10%的 SDS溶液 2 ml；1%的溴酚蘭 1 ml；2. 加入去離子水定容至 10 ml；3. 分裝；4. 在 4可保存數(shù)周， -20可保存數(shù)月之久。你還可以參考下面這個配方

2、：2SDS 凝膠加樣緩沖液 組分（摘自分子克隆第三版）Tris-HCl pH6.8（100 mM）； SDS （4%）；溴酚蘭（ 0.2%）；甘油 （20%）；-巰基乙醇或二硫蘇糖醇（ 200 mM ） 不含硫代試劑的加樣 Buffer 可在室溫保存。-巰基乙醇或二硫蘇糖醇臨用前加 入。我想配點兒 5X 的 loading buffer, 分子克隆上寫著 10%SDS ，我的配制思路是 （200ml ） 25ml1M Tris pH6.8, 20gSDS, 及 1g溴酚藍(lán)配制到 100mL ，然后再 加 100ml 甘油，但是問題是 20gSDS 要溶解到那么小體積的水中實在是困 難，我把 S

3、DS 溶解（其實大部分是不溶的）放到 65 度烘箱里，放大概幾個小 時， SDS 倒是溶了，但是變得非常黏稠，搖都搖不動的那種，跟果凍似的， 請問這樣配法是不是正確，如果不正確應(yīng)該怎樣配，請配過的大蝦教教我，最 好有詳細(xì)配制流程。5X 的 loading buffer 已經(jīng)配制成功，雖然 SDS 很難溶，但還是溶了。因 為 5X 的上樣量可以大一些，做 western 的時候比較有用， 2X 的我有配好的， 呵呵 我想說以下幾點：1.SDS-PAGE loading buffer 一般配成 2X 的，5X loading buffer 確實過于粘 稠，且 SDS 在低溫下難溶于水，這就導(dǎo)致你配

4、的 buffer 搖“都搖不動 ”了2. 不知你為何要配那么多 loading buffer （況且是 5X 的），這些東西都是用量 很少的，建議你少配些，比如 10 ml？收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請聯(lián)系管理員刪除精品文檔3. 以下就以 2X loading buffer （配制 10 ml ）為例說明配制步驟首先配制 1 mol/L Tris-HCl（pH6.8） ，10%SDS 溶液。然后稱取 0.02 g 溴酚藍(lán)于小燒杯里，依次加入 1 mol/L Tris-HCl（pH6.8） 1ml，10%SDS 溶液 4ml ，甘油 2ml，去離子水 2ml，2-巰基乙醇 1ml。混勻， 分裝成小份，

5、 -20 度保存。用時溶解，與樣品 1:1 混合上樣。需要說明的是， 2- 巰基乙醇是還原劑，也可用前加入，以防失效。5SDS-PAGE Loading Buffer TAKARA select組分濃度：? 250mM Tris-HCl （PH6.8） ;? 10% （W/V ） SDS；? 0.5% （W/V ） BPB；? 50% （V/V ）甘油；? 5% （V/V） 巰基乙醇（ 2-ME）配制量：? 5ml配制方法 ：1. 量取試劑（ 1M Tris-HCl （PH6.8） 1.25ml ；SDS 0.5g；BPB 25mg；甘 油 2.5ml ），置于 10ml 塑料離心管中。2.

6、加去離子水溶解后定容至 5ml 。3. 小份分裝后室溫保存。4. 使用前加入 2-ME（ 50ul/1ml ）5. 加入 2-ME 的 Loading Buffer 可在室溫保存一個月左右。5XSDS 上樣緩沖液0.5 mol/L Tris HCl （ pH6.8 ） 2.5ml 緩沖二硫叔糖醇（ DTT ， MW154.5 ） 0.39g 維持蛋白穩(wěn)定SDS 0.5g 形成 SDS-PRO 復(fù)合物，使 pro 帶負(fù)電溴酚藍(lán) 0.025g 示蹤指示劑收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請聯(lián)系管理員刪除精品文檔甘油 2.5ml 增加樣品比重，利于加樣（膠中甘油可減少 電滲我用的是 10ml:0.5mol/L T

7、ris-HCl(pH6.8) 1.0 ml 甘油 1.0ml20%SDS(w/v) 1.0ml-巰基乙醇 0.5ml0.1% 溴酚藍(lán)( w/v ) 0.25ml 雙蒸水 6.25mldog002 (2014-7-07 17:56:00)My 2XSDS sample bffer 配方是：2.4 ml 0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8)4 ml 10% SDS2ml 甘油0.5ml 0.5% 溴酚藍(lán)0.1 ml 雙蒸水-mercaptoethanol必須在水浴之前新鮮加入， 終濃度是 10%5X Sample buffer (loading buffer):10% w/v SDS10 mM Dithiothrei