大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(ctgf)elisa試劑盒說(shuō)明書_0(20210501172123)

1、最新資料推薦大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（ctgf）elisa試劑盒說(shuō)明書大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑 盒使用說(shuō)明書 廈門慧嘉生物科技有限公司 本試劑僅 供研究使用 目的：本試劑盒用于測(cè) 定大 鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中結(jié)締組 織生長(zhǎng)因子（CTGF 的 含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠結(jié)締組織生 長(zhǎng)因子（CTGF水平。用純化的大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF抗體包被微孔板，制 成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF抗原， 再與HRP標(biāo)記的CTGF抗體結(jié)合， 形成抗體-抗 原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物， 經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯

2、色。TMB 在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF呈正相關(guān)。 用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲 線計(jì)算樣品中大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF ）抗原濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書1份1份 封板膜2片（48） 2片（96）密封袋1個(gè)1個(gè) 酶標(biāo)包被板148 196 2- 8C保存 標(biāo)準(zhǔn)品:2250 ng/L 0.5mi1瓶0.5mi1 瓶2- 8C保存 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶1.5ml1 瓶2- 8C保存 酶標(biāo)試劑 3 mil瓶6 mil瓶2-8C保存樣品稀釋液3 mil瓶

3、6 mil瓶2- 8C保存顯色劑A液3 mil瓶6 mil 瓶2- 8C保存 顯色劑B液3 mil 瓶6 mil 瓶2-8C保存終止液3mi1瓶6mi1瓶2-8C保存濃縮洗滌液（20mi20 倍）1 瓶（20mi30倍）1瓶2- 8C保存 樣本處理及要求：1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘， 離心20分鐘左右（2019-3000 轉(zhuǎn)/ 分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后， 離心20分鐘左右（2019-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3. 尿液:用

4、無(wú)菌管收集，離心20 分鐘左右（2019-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程 中如有沉淀形成， 應(yīng)再次離心。胸腹水、 腦脊液參照實(shí)行。4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)， 用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2019-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融， 以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2019-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS, PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本

5、融化后仍然保持2- 8C的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2019-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物 酶的（HRP活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孑L,在第一、 第二孔中分別 加標(biāo)準(zhǔn)品1001 ,然后在第一、 第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液501 ,混 勻；然后從第一孔、第二孔中各取1001分

6、別加到第三孔和第四孔， 再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液501，混勻；然后在第三孔 和第四孔中先各取501棄掉，再各取501分別加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul ,混勻；混 勻后從第五、 第六孔中各取501分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 501 ,混勻后從第七、第八孔中分別取501加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo) 準(zhǔn)品稀釋液501 ,混勻后從第九第十孔中各取501棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為501，濃度分別為 1500 ng/L ,1000ng/L , 500 ng/L , 250 ng/L ,125 ng/L ）。

7、2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 401 ,然后再加 待測(cè)樣品101 （樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁， 輕輕晃動(dòng)混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37 C溫育30分鐘。4. 配液：將30 （48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 （48T的20 倍）倍稀釋后備用。5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑501，空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色

8、：每孔先加入顯色劑A50I，再加入顯色劑B50I，輕輕震蕩混 勻，37C避光顯色15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50I ,終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng)：5 / 71試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使 用排槍加樣。4 . 請(qǐng)

9、每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔 的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5 . 封板膜只限一次性使用， 以避免交叉污染。6 . 底物請(qǐng)避光保存。7 . 嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行， 試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo) 儀讀數(shù)為準(zhǔn).8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處 理。9 .本試劑不同批號(hào)組分不得混用10. 如與英文說(shuō)明書有異， 以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的最新資料推薦濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與0D值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的0D值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度