DNA的粗提取與鑒定_實驗報告[高教課堂]

1、1教育教學(xué) 2教育教學(xué) 3教育教學(xué) DNA在在 在在NaClNaCl溶液濃度低于溶液濃度低于 0.14 mol/L0.14 mol/L時，時，DNADNA的溶的溶 解度隨解度隨NaClNaCl溶液濃度的溶液濃度的 增 加 而 逐 漸 降 低 ； 在增 加 而 逐 漸 降 低 ； 在 0.14 mol/L0.14 mol/L時，時，DNADNA溶解溶解 度最?。划?dāng)度最??；當(dāng)NaClNaCl溶液濃溶液濃 度繼續(xù)增加時，度繼續(xù)增加時，DNADNA的溶的溶 解度又逐漸增大。解度又逐漸增大。 當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃 度為度為 2 mol2 molL L時，時，DNADNA 的溶解度最大

2、，濃度為的溶解度最大，濃度為 0 014 mol14 molL L時，時，DNADNA的的 溶解度最低。利用這一溶解度最低。利用這一 原理，可以使原理，可以使DNADNA在鹽溶在鹽溶 液中溶解或析出。液中溶解或析出。 4教育教學(xué) 5教育教學(xué) 6教育教學(xué) 7教育教學(xué) 8教育教學(xué) 9教育教學(xué) 10教育教學(xué) 11教育教學(xué) 12教育教學(xué) 13教育教學(xué) 14教育教學(xué) 15教育教學(xué) 16教育教學(xué) 17教育教學(xué) 18教育教學(xué) 19教育教學(xué) 20教育教學(xué) DNA的鑒定 21教育教學(xué) DNA的粗提取與鑒定 的粗提取與鑒定 實驗原理實驗原理 DNA在不同濃度在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同 DN

3、A與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白質(zhì)對酶、高溫和洗滌劑耐受性不同和蛋白質(zhì)對酶、高溫和洗滌劑耐受性不同 DNA與二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)與二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng) DNA粗提取粗提取 選擇適宜材料選擇適宜材料破碎細(xì)胞破碎細(xì)胞 DNA的溶解和析出的溶解和析出 DNA的純化的純化 鑒定鑒定DNA 與二苯胺混合，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)與二苯胺混合，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng) 22教育教學(xué) 方法步驟方法步驟 加入物質(zhì)加入物質(zhì) 目的目的 1 1. .制備雞血細(xì)胞液制備雞血細(xì)胞液 檸檬酸鈉溶液檸檬酸鈉溶液 2 2. .提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì)提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì) 20 m120 m

4、1蒸餾水蒸餾水 3 3. .溶解細(xì)胞核內(nèi)的溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNADNA 2 mo12 mo1 L L 的的 NaCl NaCl 溶液溶液 40 40 mL mL 4 4. .析出含析出含DNADNA的黏稠物的黏稠物 蒸餾水蒸餾水 5 5. .濾取含濾取含DNADNA的黏稠物的黏稠物 6 6. .將將DNADNA的黏稠物再溶解的黏稠物再溶解 2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液20 mL20 mL 7 7. .過濾含過濾含DNADNA的的NaCNaCl l 溶液溶液 8 8. .提取含有雜質(zhì)較少的提取含有雜質(zhì)較少的 DNADNA 冷卻的冷卻的9595的酒精的酒精50 mL50

5、mL A A: :(1)(1)向試管中加入向試管中加入2mol2molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)(2)加入加入DNADNA (3)4 mL(3)4 mL二苯胺試劑二苯胺試劑 9 9. .DNADNA的鑒定的鑒定 B B: :(1)(1)向試管中加入向試管中加入 2mol 2mol L L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)4 m(2)4 mL L 二苯胺試劑二苯胺試劑 23教育教學(xué) 加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固 加速血細(xì)胞破裂加速血細(xì)胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀釋至溶液稀釋至0

6、.14mol/L使得使得DNA 最大限度地釋出最大限度地釋出 使含使含DNA的黏稠物被留在紗布上的黏稠物被留在紗布上 使含使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中 除去含除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)的濾液中的雜質(zhì) 提取提取DNA A出現(xiàn)藍(lán)色出現(xiàn)藍(lán)色 B無變化無變化 24教育教學(xué) DNADNA的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定 一、實驗原理一、實驗原理 1.1.血細(xì)胞在蒸餾水中會滲透吸水過度而導(dǎo)致細(xì)胞膜和細(xì)血細(xì)胞在蒸餾水中會滲透吸水過度而導(dǎo)致細(xì)胞膜和細(xì) 胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。的溶液。 2.2.DNA在氯化鈉溶液中的

7、溶解度，是隨著氯化鈉的濃度在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度 的變化而改變的。的變化而改變的。DNA在在物質(zhì)的量濃度為物質(zhì)的量濃度為0.14 molL 的氯化鈉溶液中的溶解度最低，的氯化鈉溶液中的溶解度最低，利用這一原理，可以使利用這一原理，可以使 溶解在氯化鈉溶液中的溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出析出。 3.3.DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的但細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶某些物質(zhì)則可以溶 于酒精。于酒精。利用這一原理，可以進一步利用這一原理，可以進一步提取出含雜質(zhì)較少提取出含雜質(zhì)較少 的的DNA。 4.4.DNA遇二苯胺（沸水?。兂伤{(lán)色，因此，遇二苯胺（沸水浴）會變成

8、藍(lán)色，因此，二苯胺二苯胺 可以作為鑒定可以作為鑒定DNA的試劑的試劑。 25教育教學(xué) 二、方法與過程二、方法與過程 1.1.制雞血細(xì)胞液制雞血細(xì)胞液（活雞鮮血經(jīng)分離或沉淀獲得）（活雞鮮血經(jīng)分離或沉淀獲得） 0.1g/mL檸檬酸鈉檸檬酸鈉100mL 活雞鮮血活雞鮮血180mL 500mL燒杯中，玻棒燒杯中，玻棒攪拌攪拌， 離心、分離或靜置沉淀。離心、分離或靜置沉淀。 2.提取提取DNA 取血細(xì)胞取血細(xì)胞5-10mL20mL蒸餾水，用玻棒沿一個方向蒸餾水，用玻棒沿一個方向 快速攪拌快速攪拌。 紗布紗布過濾過濾：濾液中含：濾液中含DNA和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì)。和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì)。 原理：血細(xì)胞的

9、細(xì)胞膜、核摸吸水脹破，玻璃棒原理：血細(xì)胞的細(xì)胞膜、核摸吸水脹破，玻璃棒快速快速 攪拌攪拌，機械加速血細(xì)胞破裂。，機械加速血細(xì)胞破裂。 .提取提取血血細(xì)胞核物質(zhì)：細(xì)胞核物質(zhì)： .溶解核內(nèi)的溶解核內(nèi)的DNA： 濾液濾液2mol/L的的NaCl溶液溶液40mL，玻棒沿一個方向，玻棒沿一個方向 輕緩攪拌輕緩攪拌。 26教育教學(xué) .析出析出含含DNA的粘稠物：的粘稠物： .濾取含濾取含DNA的粘稠物：的粘稠物： . DNA粘稠物的再溶解：粘稠物的再溶解： 在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向輕輕 輕攪拌輕攪拌，出現(xiàn)絲狀物；當(dāng)絲狀物不在增加時，停止加，出現(xiàn)絲狀物

10、；當(dāng)絲狀物不在增加時，停止加 水（此時水（此時NaCl溶液的濃度相當(dāng)于溶液的濃度相當(dāng)于0.14mol/L）。）。 用多層紗布用多層紗布過濾過濾，含，含DNA的粘稠物留在紗布上。的粘稠物留在紗布上。 20mL 2mol/L的的NaCl溶液溶液 步驟含步驟含DNA的粘稠物的粘稠物 在20mL燒杯中燒杯中輕緩攪拌輕緩攪拌 3min，使盡可能多的，使盡可能多的 DNA溶解在溶解在NaCl溶液。溶液。 .過濾含有過濾含有DNA的的NaCl溶液：溶液： 用放有兩層紗布的漏斗用放有兩層紗布的漏斗過濾過濾步驟所得的溶液，步驟所得的溶液， 濾液中含有濾液中含有DNA。 27教育教學(xué) .提取含有雜質(zhì)較少的提取含有

11、雜質(zhì)較少的DNA： 步驟所得的濾液體積分?jǐn)?shù)為步驟所得的濾液體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精的冷卻酒精 50mL，用玻棒沿一個方向，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌輕緩攪拌，溶液中（，溶液中（析出析出） 出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙 吸取上面的水分。吸取上面的水分。 3.DNA的鑒定：的鑒定： 加入二苯胺試劑加入二苯胺試劑4mL，用玻棒，用玻棒攪拌攪拌使使DNA溶解，溶解， 沸水浴沸水浴5min，觀察溶液是否出現(xiàn)藍(lán)色。，觀察溶液是否出現(xiàn)藍(lán)色。 1.共有共有“三次過濾，兩次析出，七次攪拌三次過濾，兩次析出，七次攪拌” 2.加入加入“兩次蒸餾水，兩次

12、蒸餾水，三次三次NaCl溶液，一次酒精，一次酒精” 三、實驗小結(jié)三、實驗小結(jié) 28教育教學(xué) 練習(xí)練習(xí) 1、請解釋提取、請解釋提取DNA的實驗操作中主要的步驟的目的。的實驗操作中主要的步驟的目的。 答：提取答：提取DNA的第一步是材料的選取，其目的的第一步是材料的選取，其目的 是一定要選取是一定要選取DNA含量較高的生物材料，否則會含量較高的生物材料，否則會 由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難；由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難； 第二步是第二步是DNA的釋放和溶解，這一步是實驗成功的釋放和溶解，這一步是實驗成功 與否的關(guān)鍵，要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的與否的關(guān)鍵，要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的D

13、NA全部溶解；全部溶解； 第三步是第三步是DNA的純化，即根據(jù)的純化，即根據(jù)DNA的溶解特性、的溶解特性、 對酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將對酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將 DNA與雜質(zhì)分開；最后一步是對與雜質(zhì)分開；最后一步是對DNA進行鑒定，進行鑒定， 這是對整個實驗的結(jié)果的檢測。這是對整個實驗的結(jié)果的檢測。 29教育教學(xué) 2、你認(rèn)為從細(xì)胞中提取某種特定的蛋白質(zhì)、你認(rèn)為從細(xì)胞中提取某種特定的蛋白質(zhì) 與提取與提取DNA一樣容易嗎？一樣容易嗎？ 答：提取蛋白質(zhì)比提取答：提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大。這的難度大。這 是因為，與是因為，與DNA相比，蛋白質(zhì)對溫度、鹽相比，蛋

14、白質(zhì)對溫度、鹽 濃度、濃度、pH等條件要敏感得多，很容易失活；等條件要敏感得多，很容易失活； 并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多種多樣，理化性并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多種多樣，理化性 質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種 統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性 摸索提取的條件，設(shè)計特定的方法。摸索提取的條件，設(shè)計特定的方法。 30教育教學(xué) 2.實驗中實驗中NaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為2 molL和和 0.14 molL對對DNA有何影響有何影響? 1.在在DNA的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯 中加入蒸餾水的作用是中加入蒸餾水的作用是( )。 A.稀釋血液、沖洗樣品稀釋血液、沖洗樣品 B.使血細(xì)胞破裂、降低使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使?jié)舛仁笵NA析出析出 C.使血細(xì)胞破裂、增大使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA B 答：答：前者是溶解前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出 31教育教學(xué) 3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯