耳鼻咽喉-頭頸外科專業(yè)畢業(yè)論文[精品論文]聽神經(jīng)病的臨床遺傳學(xué)機(jī)制研究

1、耳鼻咽喉-頭頸外科專業(yè)畢業(yè)論文 精品論文 聽神經(jīng)病的臨床遺傳學(xué)機(jī)制研究關(guān)鍵詞：聽神經(jīng)病 候選基因法 突變篩查 otof基因 gjb1基因摘要：從上個世紀(jì)80年代開始，國內(nèi)外臨床聽力學(xué)家、聽覺生理學(xué)家、耳鼻咽喉科臨床醫(yī)生以及分子遺傳學(xué)家們開始關(guān)注一種具有獨(dú)特臨床表現(xiàn)特征的聽力疾病-聽神經(jīng)病。聽神經(jīng)病(auditory neuropathy，an)是一種表現(xiàn)為聲音可以通過外耳、中耳正常的進(jìn)入到內(nèi)耳但是聲音信號不能同步地從內(nèi)耳傳輸?shù)酱竽X的聽功能異常性疾病，具體主要表現(xiàn)為誘發(fā)性耳聲發(fā)射(evokedotoacoustic emission，eoae)正常、聽性腦干反應(yīng)(auditory brainst

2、em response，abr)嚴(yán)重異常的一組聽功能障礙癥候群。 聽神經(jīng)病的病因至今尚未明確，迄今報道的病因有遺傳、免疫、感染、中毒、代謝等。近年來關(guān)于聽神經(jīng)病致病基因?qū)W的研究引起越來越多的關(guān)注。應(yīng)用分子遺傳學(xué)研究手段對散發(fā)及家系神經(jīng)病患者進(jìn)行致病基因?qū)W研究，已成為目前國內(nèi)外耳科領(lǐng)域研究的新的熱點(diǎn)之一，對進(jìn)一步了解和探討聽神經(jīng)病致病因素具有重要的意義。 本研究以我院耳鼻咽喉科門診及耳鼻咽喉研究所遺傳資源收集網(wǎng)絡(luò)收集到的聽神經(jīng)病的散發(fā)及家系病人為研究對象，對其臨床聽力學(xué)特征與遺傳學(xué)特征進(jìn)行分析，并進(jìn)行了候選基因的突變篩查，以進(jìn)一步了解聽神經(jīng)病。 本研究共分三個部分： 第一部分門診聽神經(jīng)病患者臨床

3、資料分析 選取本院門診2003年2006年確診的散發(fā)及家系聽神經(jīng)病患者146例，分析整理臨床資料和系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查結(jié)果，總結(jié)聽神經(jīng)病患者的臨床特征；同時分析聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征，根據(jù)發(fā)病年齡、伴隨癥狀、發(fā)病形式以及分子流行病學(xué)等方面的不同表現(xiàn)，將聽神經(jīng)病進(jìn)行分型討論，闡述不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。 結(jié)果顯示：146例聽神經(jīng)病患者男女比例為1：1.35。發(fā)病年齡在20歲以下者占93.8，病程在5年以下者占78.1。聽力圖表現(xiàn)為低頻聽力下降型曲線者占77.3；言語識別率不成比例低于純音聽閾的下降程度；鐙骨肌聲反射均不能引出或閾值升高；268耳abr自波i起全部未引出，7例13耳(6例雙耳，1例

4、單耳)可引出v波，4例5耳(1例雙耳，3例單耳)可引出i波；dpoae檢查各頻率均可引出反應(yīng)，對側(cè)抑制反應(yīng)100消失；assr檢查可望用來了解聽神經(jīng)病患者言語的識別能力；40hz aerp檢測對中、低頻聽閾的客觀評價較好，可以與abr結(jié)合來定位腦干病變，對低頻聽力做出評估；耳蝸電圖檢查，-sp/ap1及無法辨認(rèn)ap波者占64.5，且僅有4.3患耳-sp/ap0.4；20例患者進(jìn)行頭部影像學(xué)檢查，19例示正常，1例顳骨ct平掃示雙側(cè)中耳乳突炎、雙側(cè)上頜竇炎。耳聲發(fā)射正常、abr引不出、言語識別率下降與純音聽力不成比例、鐙骨肌反射不能引出及影像學(xué)檢查不支持蝸后占位性病變等是診斷聽神經(jīng)病的主要標(biāo)準(zhǔn)，

5、assr、40hz aerp和耳蝸電圖可以輔助診斷。 本研究根據(jù)是否伴隨其它顱神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病變將聽神經(jīng)病分為綜合征型和非綜合征型：23例為綜合癥型聽神經(jīng)病，其中20例合并周圍神經(jīng)病變，3例合并視神經(jīng)萎縮。根據(jù)發(fā)病年齡分為成人聽神經(jīng)病和小兒聽神經(jīng)病：發(fā)病年齡在12歲以下的小兒聽神經(jīng)病患者41例，其中有16例是3歲以下的嬰幼兒聽神經(jīng)?。粙胗變郝犐窠?jīng)病的診斷需要結(jié)合多種臨床檢測手段全面評估，系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查除了注意oae、abr和鐙骨肌反射等特點(diǎn)以外，還應(yīng)強(qiáng)調(diào)assr、40hz aerp在診斷中的作用和意義；同時在新生兒聽力篩查時也要oae與abr聯(lián)合應(yīng)用，以提高檢出率。根據(jù)聽神經(jīng)病患病側(cè)別分

6、為雙側(cè)聽神經(jīng)病和單側(cè)聽神經(jīng)?。?例符合單側(cè)聽神經(jīng)病表現(xiàn)，臨床聽力學(xué)特征與雙側(cè)一致。根據(jù)發(fā)病形式分為散發(fā)聽神經(jīng)病和家系聽神經(jīng)?。罕狙芯?46名患者中，138例為散發(fā)聽神經(jīng)病，8例為家族性聽神經(jīng)病患者，分屬于4個不同的聽神經(jīng)病家系；家族性聽神經(jīng)病患者符合典型的聽神經(jīng)病聽力學(xué)特征，以家族聚集性表現(xiàn)為特點(diǎn)，具有典型的遺傳特征。 第二部分 otof基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究針對otof基因的48個外顯子共設(shè)計了45對引物，以門診收集的76例聽神經(jīng)病散發(fā)病例作為研究對象，選取92名聽力正常的健康人作為對照，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(polymelase chain reaction pcr)擴(kuò)增，對p

7、cr擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序，對測序結(jié)果進(jìn)行比較分析，檢測突變，以了解該基因?qū)β犐窠?jīng)病的貢獻(xiàn)情況。 研究發(fā)現(xiàn)：76例聽神經(jīng)病患者共檢測出34種多態(tài)。位于外顯子上的多態(tài)有15種，包括7種錯義突變、2種缺失突變，和6種未引起氨基酸改變的單核苷酸多態(tài)；位于內(nèi)含子上的多態(tài)有19種，其中13種分別有雜合和純合兩種形式，6種僅存在雜合一種形式。 在1例臨床確診為溫度敏感性聽神經(jīng)病的患者otof基因上發(fā)現(xiàn)1種特殊的缺失突變(2975-2978delag)和2種特殊的錯義突變(a53t和r1607w，復(fù)合雜合)?；颊吣赣H攜帶相同的缺失突變，而父親攜帶相同的2種錯義突變(復(fù)合雜合)，而他們的聽力是正常的。此3種突變在其

8、他聽神經(jīng)病患者和對照組中均未發(fā)現(xiàn)。缺失突變和復(fù)合雜合突變均引起氨基酸極性的改變，對蛋白質(zhì)功能可能會產(chǎn)生一定影響，同時該患者表型和基因型相互對應(yīng)，考慮為溫度敏感性聽神經(jīng)病的相關(guān)突變位點(diǎn)，這3種突變與功能的相關(guān)性還需進(jìn)一步研究。 外顯子上的多態(tài)a53v、r82c、r49w以及372a/g和4677 g/a經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析驗證，為單核苷酸多態(tài)；129ct/wt、4767ct/wt和5418ct/wt僅有雜合一種形式，且在聽神經(jīng)病患者和對照組均有發(fā)現(xiàn)；76ca/wt也只有雜合一種形式，僅在1例患者發(fā)現(xiàn)；1740delc，d398e和e594k均只在1例患者發(fā)現(xiàn)，對照組未發(fā)現(xiàn)，此3種多態(tài)引起氨基酸的改變，

9、但攜帶者表型無特殊，是否與疾病相關(guān)有待進(jìn)一步研究。內(nèi)含子區(qū)域的19種多態(tài)，聽神經(jīng)病組和對照組攜帶頻率相近，且位置離編碼區(qū)較遠(yuǎn)，考慮為單核苷酸多態(tài)。 otof基因檢測有利于聽神經(jīng)病的分型和預(yù)后的判斷。具有otof基因突變的個體，表現(xiàn)的聽神經(jīng)病以突觸及突觸前型為主，適于進(jìn)行人工耳蝸手術(shù)治療并可取得良好的效果。本研究并未發(fā)現(xiàn)國外報道的otof基因致病突變位點(diǎn)。 第三部分 gjb1基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究中針對gjb1基因的1個外顯子設(shè)計了2對引物，以41名男性聽神經(jīng)病散發(fā)患者及一個可能為x-連鎖遺傳的、有3名男性患者的小家系(0602423家系)為研究對象，并選取50名聽力正常男性健康

10、人作為對照，采取與第二部分相同的研究方法，進(jìn)行了突變篩查。 研究發(fā)現(xiàn)：在全部44名患者中僅發(fā)現(xiàn)1個位點(diǎn)的堿基發(fā)生了突變，且該突變僅發(fā)生于兩名散發(fā)聽神經(jīng)病患者，分別表現(xiàn)為純合和雜合形式。該突變位點(diǎn)位于gjb1基因dna序列的512位，由c變?yōu)閠，且并沒有引起氨基酸的變化。0602423家系患者及其親屬均未發(fā)現(xiàn)突變，對照組也未發(fā)現(xiàn)任何形式的突變。gjb1基因可初步排除與聽神經(jīng)病的相關(guān)性。 本研究詳細(xì)分析了146例聽神經(jīng)病患者臨床和聽力學(xué)資料，明確了聽神經(jīng)病的臨床表現(xiàn)和診斷要點(diǎn)；對聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征的分析，更加深入的掌握綜合征型聽神經(jīng)病、嬰幼兒聽神經(jīng)病、單側(cè)聽神經(jīng)病以及家族性聽神經(jīng)病等不同類型聽

11、神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。應(yīng)用候選基因法對散發(fā)病例進(jìn)行了otof基因的突變篩查，共發(fā)現(xiàn)34種多態(tài)，其中包括溫度敏感性聽神經(jīng)病的致病突變(缺失突變和復(fù)合雜合突變)。應(yīng)用候選基因法對x-連鎖遺傳聽神經(jīng)病家系及男性散發(fā)聽神經(jīng)病患者gjb1基因進(jìn)行突變篩查，未發(fā)現(xiàn)有貢獻(xiàn)的突變位點(diǎn)。臨床資料的探討有利于我們加深對聽神經(jīng)病本質(zhì)的理解，聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)研究為進(jìn)一步理解聽神經(jīng)病的發(fā)病原因及轉(zhuǎn)歸將有所幫助。正文內(nèi)容 從上個世紀(jì)80年代開始，國內(nèi)外臨床聽力學(xué)家、聽覺生理學(xué)家、耳鼻咽喉科臨床醫(yī)生以及分子遺傳學(xué)家們開始關(guān)注一種具有獨(dú)特臨床表現(xiàn)特征的聽力疾病-聽神經(jīng)病。聽神經(jīng)病(auditory neuropathy，an)

12、是一種表現(xiàn)為聲音可以通過外耳、中耳正常的進(jìn)入到內(nèi)耳但是聲音信號不能同步地從內(nèi)耳傳輸?shù)酱竽X的聽功能異常性疾病，具體主要表現(xiàn)為誘發(fā)性耳聲發(fā)射(evokedotoacoustic emission，eoae)正常、聽性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response，abr)嚴(yán)重異常的一組聽功能障礙癥候群。 聽神經(jīng)病的病因至今尚未明確，迄今報道的病因有遺傳、免疫、感染、中毒、代謝等。近年來關(guān)于聽神經(jīng)病致病基因?qū)W的研究引起越來越多的關(guān)注。應(yīng)用分子遺傳學(xué)研究手段對散發(fā)及家系神經(jīng)病患者進(jìn)行致病基因?qū)W研究，已成為目前國內(nèi)外耳科領(lǐng)域研究的新的熱點(diǎn)之一，對進(jìn)一步了解和探討聽神經(jīng)病致病因素具有重要

13、的意義。 本研究以我院耳鼻咽喉科門診及耳鼻咽喉研究所遺傳資源收集網(wǎng)絡(luò)收集到的聽神經(jīng)病的散發(fā)及家系病人為研究對象，對其臨床聽力學(xué)特征與遺傳學(xué)特征進(jìn)行分析，并進(jìn)行了候選基因的突變篩查，以進(jìn)一步了解聽神經(jīng)病。 本研究共分三個部分： 第一部分門診聽神經(jīng)病患者臨床資料分析 選取本院門診2003年2006年確診的散發(fā)及家系聽神經(jīng)病患者146例，分析整理臨床資料和系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查結(jié)果，總結(jié)聽神經(jīng)病患者的臨床特征；同時分析聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征，根據(jù)發(fā)病年齡、伴隨癥狀、發(fā)病形式以及分子流行病學(xué)等方面的不同表現(xiàn)，將聽神經(jīng)病進(jìn)行分型討論，闡述不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。 結(jié)果顯示：146例聽神經(jīng)病患者男女比例為1

14、：1.35。發(fā)病年齡在20歲以下者占93.8，病程在5年以下者占78.1。聽力圖表現(xiàn)為低頻聽力下降型曲線者占77.3；言語識別率不成比例低于純音聽閾的下降程度；鐙骨肌聲反射均不能引出或閾值升高；268耳abr自波i起全部未引出，7例13耳(6例雙耳，1例單耳)可引出v波，4例5耳(1例雙耳，3例單耳)可引出i波；dpoae檢查各頻率均可引出反應(yīng)，對側(cè)抑制反應(yīng)100消失；assr檢查可望用來了解聽神經(jīng)病患者言語的識別能力；40hz aerp檢測對中、低頻聽閾的客觀評價較好，可以與abr結(jié)合來定位腦干病變，對低頻聽力做出評估；耳蝸電圖檢查，-sp/ap1及無法辨認(rèn)ap波者占64.5，且僅有4.3患

15、耳-sp/ap0.4；20例患者進(jìn)行頭部影像學(xué)檢查，19例示正常，1例顳骨ct平掃示雙側(cè)中耳乳突炎、雙側(cè)上頜竇炎。耳聲發(fā)射正常、abr引不出、言語識別率下降與純音聽力不成比例、鐙骨肌反射不能引出及影像學(xué)檢查不支持蝸后占位性病變等是診斷聽神經(jīng)病的主要標(biāo)準(zhǔn)，assr、40hz aerp和耳蝸電圖可以輔助診斷。 本研究根據(jù)是否伴隨其它顱神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病變將聽神經(jīng)病分為綜合征型和非綜合征型：23例為綜合癥型聽神經(jīng)病，其中20例合并周圍神經(jīng)病變，3例合并視神經(jīng)萎縮。根據(jù)發(fā)病年齡分為成人聽神經(jīng)病和小兒聽神經(jīng)?。喊l(fā)病年齡在12歲以下的小兒聽神經(jīng)病患者41例，其中有16例是3歲以下的嬰幼兒聽神經(jīng)??；嬰幼兒

16、聽神經(jīng)病的診斷需要結(jié)合多種臨床檢測手段全面評估，系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查除了注意oae、abr和鐙骨肌反射等特點(diǎn)以外，還應(yīng)強(qiáng)調(diào)assr、40hz aerp在診斷中的作用和意義；同時在新生兒聽力篩查時也要oae與abr聯(lián)合應(yīng)用，以提高檢出率。根據(jù)聽神經(jīng)病患病側(cè)別分為雙側(cè)聽神經(jīng)病和單側(cè)聽神經(jīng)?。?例符合單側(cè)聽神經(jīng)病表現(xiàn)，臨床聽力學(xué)特征與雙側(cè)一致。根據(jù)發(fā)病形式分為散發(fā)聽神經(jīng)病和家系聽神經(jīng)?。罕狙芯?46名患者中，138例為散發(fā)聽神經(jīng)病，8例為家族性聽神經(jīng)病患者，分屬于4個不同的聽神經(jīng)病家系；家族性聽神經(jīng)病患者符合典型的聽神經(jīng)病聽力學(xué)特征，以家族聚集性表現(xiàn)為特點(diǎn)，具有典型的遺傳特征。 第二部分 otof基因在

17、聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究針對otof基因的48個外顯子共設(shè)計了45對引物，以門診收集的76例聽神經(jīng)病散發(fā)病例作為研究對象，選取92名聽力正常的健康人作為對照，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(polymelase chain reaction pcr)擴(kuò)增，對pcr擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序，對測序結(jié)果進(jìn)行比較分析，檢測突變，以了解該基因?qū)β犐窠?jīng)病的貢獻(xiàn)情況。 研究發(fā)現(xiàn)：76例聽神經(jīng)病患者共檢測出34種多態(tài)。位于外顯子上的多態(tài)有15種，包括7種錯義突變、2種缺失突變，和6種未引起氨基酸改變的單核苷酸多態(tài)；位于內(nèi)含子上的多態(tài)有19種，其中13種分別有雜合和純合兩種形式，6種僅存在雜合一種形式。 在1例臨床確診為溫

18、度敏感性聽神經(jīng)病的患者otof基因上發(fā)現(xiàn)1種特殊的缺失突變(2975-2978delag)和2種特殊的錯義突變(a53t和r1607w，復(fù)合雜合)?；颊吣赣H攜帶相同的缺失突變，而父親攜帶相同的2種錯義突變(復(fù)合雜合)，而他們的聽力是正常的。此3種突變在其他聽神經(jīng)病患者和對照組中均未發(fā)現(xiàn)。缺失突變和復(fù)合雜合突變均引起氨基酸極性的改變，對蛋白質(zhì)功能可能會產(chǎn)生一定影響，同時該患者表型和基因型相互對應(yīng)，考慮為溫度敏感性聽神經(jīng)病的相關(guān)突變位點(diǎn)，這3種突變與功能的相關(guān)性還需進(jìn)一步研究。 外顯子上的多態(tài)a53v、r82c、r49w以及372a/g和4677 g/a經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析驗證，為單核苷酸多態(tài)；129c

19、t/wt、4767ct/wt和5418ct/wt僅有雜合一種形式，且在聽神經(jīng)病患者和對照組均有發(fā)現(xiàn)；76ca/wt也只有雜合一種形式，僅在1例患者發(fā)現(xiàn)；1740delc，d398e和e594k均只在1例患者發(fā)現(xiàn)，對照組未發(fā)現(xiàn)，此3種多態(tài)引起氨基酸的改變，但攜帶者表型無特殊，是否與疾病相關(guān)有待進(jìn)一步研究。內(nèi)含子區(qū)域的19種多態(tài)，聽神經(jīng)病組和對照組攜帶頻率相近，且位置離編碼區(qū)較遠(yuǎn)，考慮為單核苷酸多態(tài)。 otof基因檢測有利于聽神經(jīng)病的分型和預(yù)后的判斷。具有otof基因突變的個體，表現(xiàn)的聽神經(jīng)病以突觸及突觸前型為主，適于進(jìn)行人工耳蝸手術(shù)治療并可取得良好的效果。本研究并未發(fā)現(xiàn)國外報道的otof基因致病

20、突變位點(diǎn)。 第三部分 gjb1基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究中針對gjb1基因的1個外顯子設(shè)計了2對引物，以41名男性聽神經(jīng)病散發(fā)患者及一個可能為x-連鎖遺傳的、有3名男性患者的小家系(0602423家系)為研究對象，并選取50名聽力正常男性健康人作為對照，采取與第二部分相同的研究方法，進(jìn)行了突變篩查。 研究發(fā)現(xiàn)：在全部44名患者中僅發(fā)現(xiàn)1個位點(diǎn)的堿基發(fā)生了突變，且該突變僅發(fā)生于兩名散發(fā)聽神經(jīng)病患者，分別表現(xiàn)為純合和雜合形式。該突變位點(diǎn)位于gjb1基因dna序列的512位，由c變?yōu)閠，且并沒有引起氨基酸的變化。0602423家系患者及其親屬均未發(fā)現(xiàn)突變，對照組也未發(fā)現(xiàn)任何形式的突變。g

21、jb1基因可初步排除與聽神經(jīng)病的相關(guān)性。 本研究詳細(xì)分析了146例聽神經(jīng)病患者臨床和聽力學(xué)資料，明確了聽神經(jīng)病的臨床表現(xiàn)和診斷要點(diǎn)；對聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征的分析，更加深入的掌握綜合征型聽神經(jīng)病、嬰幼兒聽神經(jīng)病、單側(cè)聽神經(jīng)病以及家族性聽神經(jīng)病等不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。應(yīng)用候選基因法對散發(fā)病例進(jìn)行了otof基因的突變篩查，共發(fā)現(xiàn)34種多態(tài)，其中包括溫度敏感性聽神經(jīng)病的致病突變(缺失突變和復(fù)合雜合突變)。應(yīng)用候選基因法對x-連鎖遺傳聽神經(jīng)病家系及男性散發(fā)聽神經(jīng)病患者gjb1基因進(jìn)行突變篩查，未發(fā)現(xiàn)有貢獻(xiàn)的突變位點(diǎn)。臨床資料的探討有利于我們加深對聽神經(jīng)病本質(zhì)的理解，聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)研究為進(jìn)一步

22、理解聽神經(jīng)病的發(fā)病原因及轉(zhuǎn)歸將有所幫助。從上個世紀(jì)80年代開始，國內(nèi)外臨床聽力學(xué)家、聽覺生理學(xué)家、耳鼻咽喉科臨床醫(yī)生以及分子遺傳學(xué)家們開始關(guān)注一種具有獨(dú)特臨床表現(xiàn)特征的聽力疾病-聽神經(jīng)病。聽神經(jīng)病(auditory neuropathy，an)是一種表現(xiàn)為聲音可以通過外耳、中耳正常的進(jìn)入到內(nèi)耳但是聲音信號不能同步地從內(nèi)耳傳輸?shù)酱竽X的聽功能異常性疾病，具體主要表現(xiàn)為誘發(fā)性耳聲發(fā)射(evokedotoacoustic emission，eoae)正常、聽性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response，abr)嚴(yán)重異常的一組聽功能障礙癥候群。 聽神經(jīng)病的病因至今尚未明確，迄今報道

23、的病因有遺傳、免疫、感染、中毒、代謝等。近年來關(guān)于聽神經(jīng)病致病基因?qū)W的研究引起越來越多的關(guān)注。應(yīng)用分子遺傳學(xué)研究手段對散發(fā)及家系神經(jīng)病患者進(jìn)行致病基因?qū)W研究，已成為目前國內(nèi)外耳科領(lǐng)域研究的新的熱點(diǎn)之一，對進(jìn)一步了解和探討聽神經(jīng)病致病因素具有重要的意義。 本研究以我院耳鼻咽喉科門診及耳鼻咽喉研究所遺傳資源收集網(wǎng)絡(luò)收集到的聽神經(jīng)病的散發(fā)及家系病人為研究對象，對其臨床聽力學(xué)特征與遺傳學(xué)特征進(jìn)行分析，并進(jìn)行了候選基因的突變篩查，以進(jìn)一步了解聽神經(jīng)病。 本研究共分三個部分： 第一部分門診聽神經(jīng)病患者臨床資料分析 選取本院門診2003年2006年確診的散發(fā)及家系聽神經(jīng)病患者146例，分析整理臨床資料和系統(tǒng)

24、的聽力學(xué)檢查結(jié)果，總結(jié)聽神經(jīng)病患者的臨床特征；同時分析聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征，根據(jù)發(fā)病年齡、伴隨癥狀、發(fā)病形式以及分子流行病學(xué)等方面的不同表現(xiàn)，將聽神經(jīng)病進(jìn)行分型討論，闡述不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。 結(jié)果顯示：146例聽神經(jīng)病患者男女比例為1：1.35。發(fā)病年齡在20歲以下者占93.8，病程在5年以下者占78.1。聽力圖表現(xiàn)為低頻聽力下降型曲線者占77.3；言語識別率不成比例低于純音聽閾的下降程度；鐙骨肌聲反射均不能引出或閾值升高；268耳abr自波i起全部未引出，7例13耳(6例雙耳，1例單耳)可引出v波，4例5耳(1例雙耳，3例單耳)可引出i波；dpoae檢查各頻率均可引出反應(yīng)，對側(cè)抑制

25、反應(yīng)100消失；assr檢查可望用來了解聽神經(jīng)病患者言語的識別能力；40hz aerp檢測對中、低頻聽閾的客觀評價較好，可以與abr結(jié)合來定位腦干病變，對低頻聽力做出評估；耳蝸電圖檢查，-sp/ap1及無法辨認(rèn)ap波者占64.5，且僅有4.3患耳-sp/ap0.4；20例患者進(jìn)行頭部影像學(xué)檢查，19例示正常，1例顳骨ct平掃示雙側(cè)中耳乳突炎、雙側(cè)上頜竇炎。耳聲發(fā)射正常、abr引不出、言語識別率下降與純音聽力不成比例、鐙骨肌反射不能引出及影像學(xué)檢查不支持蝸后占位性病變等是診斷聽神經(jīng)病的主要標(biāo)準(zhǔn)，assr、40hz aerp和耳蝸電圖可以輔助診斷。 本研究根據(jù)是否伴隨其它顱神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病變將

26、聽神經(jīng)病分為綜合征型和非綜合征型：23例為綜合癥型聽神經(jīng)病，其中20例合并周圍神經(jīng)病變，3例合并視神經(jīng)萎縮。根據(jù)發(fā)病年齡分為成人聽神經(jīng)病和小兒聽神經(jīng)?。喊l(fā)病年齡在12歲以下的小兒聽神經(jīng)病患者41例，其中有16例是3歲以下的嬰幼兒聽神經(jīng)病；嬰幼兒聽神經(jīng)病的診斷需要結(jié)合多種臨床檢測手段全面評估，系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查除了注意oae、abr和鐙骨肌反射等特點(diǎn)以外，還應(yīng)強(qiáng)調(diào)assr、40hz aerp在診斷中的作用和意義；同時在新生兒聽力篩查時也要oae與abr聯(lián)合應(yīng)用，以提高檢出率。根據(jù)聽神經(jīng)病患病側(cè)別分為雙側(cè)聽神經(jīng)病和單側(cè)聽神經(jīng)?。?例符合單側(cè)聽神經(jīng)病表現(xiàn)，臨床聽力學(xué)特征與雙側(cè)一致。根據(jù)發(fā)病形式分為散發(fā)

27、聽神經(jīng)病和家系聽神經(jīng)病：本研究146名患者中，138例為散發(fā)聽神經(jīng)病，8例為家族性聽神經(jīng)病患者，分屬于4個不同的聽神經(jīng)病家系；家族性聽神經(jīng)病患者符合典型的聽神經(jīng)病聽力學(xué)特征，以家族聚集性表現(xiàn)為特點(diǎn)，具有典型的遺傳特征。 第二部分 otof基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究針對otof基因的48個外顯子共設(shè)計了45對引物，以門診收集的76例聽神經(jīng)病散發(fā)病例作為研究對象，選取92名聽力正常的健康人作為對照，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(polymelase chain reaction pcr)擴(kuò)增，對pcr擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序，對測序結(jié)果進(jìn)行比較分析，檢測突變，以了解該基因?qū)β犐窠?jīng)病的貢獻(xiàn)情況。 研究發(fā)現(xiàn)：

28、76例聽神經(jīng)病患者共檢測出34種多態(tài)。位于外顯子上的多態(tài)有15種，包括7種錯義突變、2種缺失突變，和6種未引起氨基酸改變的單核苷酸多態(tài)；位于內(nèi)含子上的多態(tài)有19種，其中13種分別有雜合和純合兩種形式，6種僅存在雜合一種形式。 在1例臨床確診為溫度敏感性聽神經(jīng)病的患者otof基因上發(fā)現(xiàn)1種特殊的缺失突變(2975-2978delag)和2種特殊的錯義突變(a53t和r1607w，復(fù)合雜合)。患者母親攜帶相同的缺失突變，而父親攜帶相同的2種錯義突變(復(fù)合雜合)，而他們的聽力是正常的。此3種突變在其他聽神經(jīng)病患者和對照組中均未發(fā)現(xiàn)。缺失突變和復(fù)合雜合突變均引起氨基酸極性的改變，對蛋白質(zhì)功能可能會產(chǎn)生

29、一定影響，同時該患者表型和基因型相互對應(yīng)，考慮為溫度敏感性聽神經(jīng)病的相關(guān)突變位點(diǎn)，這3種突變與功能的相關(guān)性還需進(jìn)一步研究。 外顯子上的多態(tài)a53v、r82c、r49w以及372a/g和4677 g/a經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析驗證，為單核苷酸多態(tài)；129ct/wt、4767ct/wt和5418ct/wt僅有雜合一種形式，且在聽神經(jīng)病患者和對照組均有發(fā)現(xiàn)；76ca/wt也只有雜合一種形式，僅在1例患者發(fā)現(xiàn)；1740delc，d398e和e594k均只在1例患者發(fā)現(xiàn)，對照組未發(fā)現(xiàn)，此3種多態(tài)引起氨基酸的改變，但攜帶者表型無特殊，是否與疾病相關(guān)有待進(jìn)一步研究。內(nèi)含子區(qū)域的19種多態(tài)，聽神經(jīng)病組和對照組攜帶頻率相

30、近，且位置離編碼區(qū)較遠(yuǎn)，考慮為單核苷酸多態(tài)。 otof基因檢測有利于聽神經(jīng)病的分型和預(yù)后的判斷。具有otof基因突變的個體，表現(xiàn)的聽神經(jīng)病以突觸及突觸前型為主，適于進(jìn)行人工耳蝸手術(shù)治療并可取得良好的效果。本研究并未發(fā)現(xiàn)國外報道的otof基因致病突變位點(diǎn)。 第三部分 gjb1基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究中針對gjb1基因的1個外顯子設(shè)計了2對引物，以41名男性聽神經(jīng)病散發(fā)患者及一個可能為x-連鎖遺傳的、有3名男性患者的小家系(0602423家系)為研究對象，并選取50名聽力正常男性健康人作為對照，采取與第二部分相同的研究方法，進(jìn)行了突變篩查。 研究發(fā)現(xiàn)：在全部44名患者中僅發(fā)現(xiàn)1個位點(diǎn)

31、的堿基發(fā)生了突變，且該突變僅發(fā)生于兩名散發(fā)聽神經(jīng)病患者，分別表現(xiàn)為純合和雜合形式。該突變位點(diǎn)位于gjb1基因dna序列的512位，由c變?yōu)閠，且并沒有引起氨基酸的變化。0602423家系患者及其親屬均未發(fā)現(xiàn)突變，對照組也未發(fā)現(xiàn)任何形式的突變。gjb1基因可初步排除與聽神經(jīng)病的相關(guān)性。 本研究詳細(xì)分析了146例聽神經(jīng)病患者臨床和聽力學(xué)資料，明確了聽神經(jīng)病的臨床表現(xiàn)和診斷要點(diǎn)；對聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征的分析，更加深入的掌握綜合征型聽神經(jīng)病、嬰幼兒聽神經(jīng)病、單側(cè)聽神經(jīng)病以及家族性聽神經(jīng)病等不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。應(yīng)用候選基因法對散發(fā)病例進(jìn)行了otof基因的突變篩查，共發(fā)現(xiàn)34種多態(tài)，其中包括溫度

32、敏感性聽神經(jīng)病的致病突變(缺失突變和復(fù)合雜合突變)。應(yīng)用候選基因法對x-連鎖遺傳聽神經(jīng)病家系及男性散發(fā)聽神經(jīng)病患者gjb1基因進(jìn)行突變篩查，未發(fā)現(xiàn)有貢獻(xiàn)的突變位點(diǎn)。臨床資料的探討有利于我們加深對聽神經(jīng)病本質(zhì)的理解，聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)研究為進(jìn)一步理解聽神經(jīng)病的發(fā)病原因及轉(zhuǎn)歸將有所幫助。從上個世紀(jì)80年代開始，國內(nèi)外臨床聽力學(xué)家、聽覺生理學(xué)家、耳鼻咽喉科臨床醫(yī)生以及分子遺傳學(xué)家們開始關(guān)注一種具有獨(dú)特臨床表現(xiàn)特征的聽力疾病-聽神經(jīng)病。聽神經(jīng)病(auditory neuropathy，an)是一種表現(xiàn)為聲音可以通過外耳、中耳正常的進(jìn)入到內(nèi)耳但是聲音信號不能同步地從內(nèi)耳傳輸?shù)酱竽X的聽功能異常性疾病，具體

33、主要表現(xiàn)為誘發(fā)性耳聲發(fā)射(evokedotoacoustic emission，eoae)正常、聽性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response，abr)嚴(yán)重異常的一組聽功能障礙癥候群。 聽神經(jīng)病的病因至今尚未明確，迄今報道的病因有遺傳、免疫、感染、中毒、代謝等。近年來關(guān)于聽神經(jīng)病致病基因?qū)W的研究引起越來越多的關(guān)注。應(yīng)用分子遺傳學(xué)研究手段對散發(fā)及家系神經(jīng)病患者進(jìn)行致病基因?qū)W研究，已成為目前國內(nèi)外耳科領(lǐng)域研究的新的熱點(diǎn)之一，對進(jìn)一步了解和探討聽神經(jīng)病致病因素具有重要的意義。 本研究以我院耳鼻咽喉科門診及耳鼻咽喉研究所遺傳資源收集網(wǎng)絡(luò)收集到的聽神經(jīng)病的散發(fā)及家系病人為研究對象，

34、對其臨床聽力學(xué)特征與遺傳學(xué)特征進(jìn)行分析，并進(jìn)行了候選基因的突變篩查，以進(jìn)一步了解聽神經(jīng)病。 本研究共分三個部分： 第一部分門診聽神經(jīng)病患者臨床資料分析 選取本院門診2003年2006年確診的散發(fā)及家系聽神經(jīng)病患者146例，分析整理臨床資料和系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查結(jié)果，總結(jié)聽神經(jīng)病患者的臨床特征；同時分析聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征，根據(jù)發(fā)病年齡、伴隨癥狀、發(fā)病形式以及分子流行病學(xué)等方面的不同表現(xiàn)，將聽神經(jīng)病進(jìn)行分型討論，闡述不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。 結(jié)果顯示：146例聽神經(jīng)病患者男女比例為1：1.35。發(fā)病年齡在20歲以下者占93.8，病程在5年以下者占78.1。聽力圖表現(xiàn)為低頻聽力下降型曲線者占77

35、.3；言語識別率不成比例低于純音聽閾的下降程度；鐙骨肌聲反射均不能引出或閾值升高；268耳abr自波i起全部未引出，7例13耳(6例雙耳，1例單耳)可引出v波，4例5耳(1例雙耳，3例單耳)可引出i波；dpoae檢查各頻率均可引出反應(yīng)，對側(cè)抑制反應(yīng)100消失；assr檢查可望用來了解聽神經(jīng)病患者言語的識別能力；40hz aerp檢測對中、低頻聽閾的客觀評價較好，可以與abr結(jié)合來定位腦干病變，對低頻聽力做出評估；耳蝸電圖檢查，-sp/ap1及無法辨認(rèn)ap波者占64.5，且僅有4.3患耳-sp/ap0.4；20例患者進(jìn)行頭部影像學(xué)檢查，19例示正常，1例顳骨ct平掃示雙側(cè)中耳乳突炎、雙側(cè)上頜竇炎

36、。耳聲發(fā)射正常、abr引不出、言語識別率下降與純音聽力不成比例、鐙骨肌反射不能引出及影像學(xué)檢查不支持蝸后占位性病變等是診斷聽神經(jīng)病的主要標(biāo)準(zhǔn)，assr、40hz aerp和耳蝸電圖可以輔助診斷。 本研究根據(jù)是否伴隨其它顱神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病變將聽神經(jīng)病分為綜合征型和非綜合征型：23例為綜合癥型聽神經(jīng)病，其中20例合并周圍神經(jīng)病變，3例合并視神經(jīng)萎縮。根據(jù)發(fā)病年齡分為成人聽神經(jīng)病和小兒聽神經(jīng)?。喊l(fā)病年齡在12歲以下的小兒聽神經(jīng)病患者41例，其中有16例是3歲以下的嬰幼兒聽神經(jīng)?。粙胗變郝犐窠?jīng)病的診斷需要結(jié)合多種臨床檢測手段全面評估，系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查除了注意oae、abr和鐙骨肌反射等特點(diǎn)以外，還

37、應(yīng)強(qiáng)調(diào)assr、40hz aerp在診斷中的作用和意義；同時在新生兒聽力篩查時也要oae與abr聯(lián)合應(yīng)用，以提高檢出率。根據(jù)聽神經(jīng)病患病側(cè)別分為雙側(cè)聽神經(jīng)病和單側(cè)聽神經(jīng)?。?例符合單側(cè)聽神經(jīng)病表現(xiàn)，臨床聽力學(xué)特征與雙側(cè)一致。根據(jù)發(fā)病形式分為散發(fā)聽神經(jīng)病和家系聽神經(jīng)?。罕狙芯?46名患者中，138例為散發(fā)聽神經(jīng)病，8例為家族性聽神經(jīng)病患者，分屬于4個不同的聽神經(jīng)病家系；家族性聽神經(jīng)病患者符合典型的聽神經(jīng)病聽力學(xué)特征，以家族聚集性表現(xiàn)為特點(diǎn)，具有典型的遺傳特征。 第二部分 otof基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究針對otof基因的48個外顯子共設(shè)計了45對引物，以門診收集的76例聽神經(jīng)病散發(fā)

38、病例作為研究對象，選取92名聽力正常的健康人作為對照，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(polymelase chain reaction pcr)擴(kuò)增，對pcr擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序，對測序結(jié)果進(jìn)行比較分析，檢測突變，以了解該基因?qū)β犐窠?jīng)病的貢獻(xiàn)情況。 研究發(fā)現(xiàn)：76例聽神經(jīng)病患者共檢測出34種多態(tài)。位于外顯子上的多態(tài)有15種，包括7種錯義突變、2種缺失突變，和6種未引起氨基酸改變的單核苷酸多態(tài)；位于內(nèi)含子上的多態(tài)有19種，其中13種分別有雜合和純合兩種形式，6種僅存在雜合一種形式。 在1例臨床確診為溫度敏感性聽神經(jīng)病的患者otof基因上發(fā)現(xiàn)1種特殊的缺失突變(2975-2978delag)和2種特殊的錯義突變(

39、a53t和r1607w，復(fù)合雜合)?；颊吣赣H攜帶相同的缺失突變，而父親攜帶相同的2種錯義突變(復(fù)合雜合)，而他們的聽力是正常的。此3種突變在其他聽神經(jīng)病患者和對照組中均未發(fā)現(xiàn)。缺失突變和復(fù)合雜合突變均引起氨基酸極性的改變，對蛋白質(zhì)功能可能會產(chǎn)生一定影響，同時該患者表型和基因型相互對應(yīng)，考慮為溫度敏感性聽神經(jīng)病的相關(guān)突變位點(diǎn)，這3種突變與功能的相關(guān)性還需進(jìn)一步研究。 外顯子上的多態(tài)a53v、r82c、r49w以及372a/g和4677 g/a經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析驗證，為單核苷酸多態(tài)；129ct/wt、4767ct/wt和5418ct/wt僅有雜合一種形式，且在聽神經(jīng)病患者和對照組均有發(fā)現(xiàn)；76ca/w

40、t也只有雜合一種形式，僅在1例患者發(fā)現(xiàn)；1740delc，d398e和e594k均只在1例患者發(fā)現(xiàn)，對照組未發(fā)現(xiàn)，此3種多態(tài)引起氨基酸的改變，但攜帶者表型無特殊，是否與疾病相關(guān)有待進(jìn)一步研究。內(nèi)含子區(qū)域的19種多態(tài)，聽神經(jīng)病組和對照組攜帶頻率相近，且位置離編碼區(qū)較遠(yuǎn)，考慮為單核苷酸多態(tài)。 otof基因檢測有利于聽神經(jīng)病的分型和預(yù)后的判斷。具有otof基因突變的個體，表現(xiàn)的聽神經(jīng)病以突觸及突觸前型為主，適于進(jìn)行人工耳蝸手術(shù)治療并可取得良好的效果。本研究并未發(fā)現(xiàn)國外報道的otof基因致病突變位點(diǎn)。 第三部分 gjb1基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究中針對gjb1基因的1個外顯子設(shè)計了2對引物

41、，以41名男性聽神經(jīng)病散發(fā)患者及一個可能為x-連鎖遺傳的、有3名男性患者的小家系(0602423家系)為研究對象，并選取50名聽力正常男性健康人作為對照，采取與第二部分相同的研究方法，進(jìn)行了突變篩查。 研究發(fā)現(xiàn)：在全部44名患者中僅發(fā)現(xiàn)1個位點(diǎn)的堿基發(fā)生了突變，且該突變僅發(fā)生于兩名散發(fā)聽神經(jīng)病患者，分別表現(xiàn)為純合和雜合形式。該突變位點(diǎn)位于gjb1基因dna序列的512位，由c變?yōu)閠，且并沒有引起氨基酸的變化。0602423家系患者及其親屬均未發(fā)現(xiàn)突變，對照組也未發(fā)現(xiàn)任何形式的突變。gjb1基因可初步排除與聽神經(jīng)病的相關(guān)性。 本研究詳細(xì)分析了146例聽神經(jīng)病患者臨床和聽力學(xué)資料，明確了聽神經(jīng)病的

42、臨床表現(xiàn)和診斷要點(diǎn)；對聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征的分析，更加深入的掌握綜合征型聽神經(jīng)病、嬰幼兒聽神經(jīng)病、單側(cè)聽神經(jīng)病以及家族性聽神經(jīng)病等不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。應(yīng)用候選基因法對散發(fā)病例進(jìn)行了otof基因的突變篩查，共發(fā)現(xiàn)34種多態(tài)，其中包括溫度敏感性聽神經(jīng)病的致病突變(缺失突變和復(fù)合雜合突變)。應(yīng)用候選基因法對x-連鎖遺傳聽神經(jīng)病家系及男性散發(fā)聽神經(jīng)病患者gjb1基因進(jìn)行突變篩查，未發(fā)現(xiàn)有貢獻(xiàn)的突變位點(diǎn)。臨床資料的探討有利于我們加深對聽神經(jīng)病本質(zhì)的理解，聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)研究為進(jìn)一步理解聽神經(jīng)病的發(fā)病原因及轉(zhuǎn)歸將有所幫助。從上個世紀(jì)80年代開始，國內(nèi)外臨床聽力學(xué)家、聽覺生理學(xué)家、耳鼻咽喉科臨床

43、醫(yī)生以及分子遺傳學(xué)家們開始關(guān)注一種具有獨(dú)特臨床表現(xiàn)特征的聽力疾病-聽神經(jīng)病。聽神經(jīng)病(auditory neuropathy，an)是一種表現(xiàn)為聲音可以通過外耳、中耳正常的進(jìn)入到內(nèi)耳但是聲音信號不能同步地從內(nèi)耳傳輸?shù)酱竽X的聽功能異常性疾病，具體主要表現(xiàn)為誘發(fā)性耳聲發(fā)射(evokedotoacoustic emission，eoae)正常、聽性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response，abr)嚴(yán)重異常的一組聽功能障礙癥候群。 聽神經(jīng)病的病因至今尚未明確，迄今報道的病因有遺傳、免疫、感染、中毒、代謝等。近年來關(guān)于聽神經(jīng)病致病基因?qū)W的研究引起越來越多的關(guān)注。應(yīng)用分子遺傳學(xué)研究

44、手段對散發(fā)及家系神經(jīng)病患者進(jìn)行致病基因?qū)W研究，已成為目前國內(nèi)外耳科領(lǐng)域研究的新的熱點(diǎn)之一，對進(jìn)一步了解和探討聽神經(jīng)病致病因素具有重要的意義。 本研究以我院耳鼻咽喉科門診及耳鼻咽喉研究所遺傳資源收集網(wǎng)絡(luò)收集到的聽神經(jīng)病的散發(fā)及家系病人為研究對象，對其臨床聽力學(xué)特征與遺傳學(xué)特征進(jìn)行分析，并進(jìn)行了候選基因的突變篩查，以進(jìn)一步了解聽神經(jīng)病。 本研究共分三個部分： 第一部分門診聽神經(jīng)病患者臨床資料分析 選取本院門診2003年2006年確診的散發(fā)及家系聽神經(jīng)病患者146例，分析整理臨床資料和系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查結(jié)果，總結(jié)聽神經(jīng)病患者的臨床特征；同時分析聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征，根據(jù)發(fā)病年齡、伴隨癥狀、發(fā)病形式以

45、及分子流行病學(xué)等方面的不同表現(xiàn)，將聽神經(jīng)病進(jìn)行分型討論，闡述不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。 結(jié)果顯示：146例聽神經(jīng)病患者男女比例為1：1.35。發(fā)病年齡在20歲以下者占93.8，病程在5年以下者占78.1。聽力圖表現(xiàn)為低頻聽力下降型曲線者占77.3；言語識別率不成比例低于純音聽閾的下降程度；鐙骨肌聲反射均不能引出或閾值升高；268耳abr自波i起全部未引出，7例13耳(6例雙耳，1例單耳)可引出v波，4例5耳(1例雙耳，3例單耳)可引出i波；dpoae檢查各頻率均可引出反應(yīng)，對側(cè)抑制反應(yīng)100消失；assr檢查可望用來了解聽神經(jīng)病患者言語的識別能力；40hz aerp檢測對中、低頻聽閾的客觀評

46、價較好，可以與abr結(jié)合來定位腦干病變，對低頻聽力做出評估；耳蝸電圖檢查，-sp/ap1及無法辨認(rèn)ap波者占64.5，且僅有4.3患耳-sp/ap0.4；20例患者進(jìn)行頭部影像學(xué)檢查，19例示正常，1例顳骨ct平掃示雙側(cè)中耳乳突炎、雙側(cè)上頜竇炎。耳聲發(fā)射正常、abr引不出、言語識別率下降與純音聽力不成比例、鐙骨肌反射不能引出及影像學(xué)檢查不支持蝸后占位性病變等是診斷聽神經(jīng)病的主要標(biāo)準(zhǔn)，assr、40hz aerp和耳蝸電圖可以輔助診斷。 本研究根據(jù)是否伴隨其它顱神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病變將聽神經(jīng)病分為綜合征型和非綜合征型：23例為綜合癥型聽神經(jīng)病，其中20例合并周圍神經(jīng)病變，3例合并視神經(jīng)萎縮。根據(jù)

47、發(fā)病年齡分為成人聽神經(jīng)病和小兒聽神經(jīng)?。喊l(fā)病年齡在12歲以下的小兒聽神經(jīng)病患者41例，其中有16例是3歲以下的嬰幼兒聽神經(jīng)?。粙胗變郝犐窠?jīng)病的診斷需要結(jié)合多種臨床檢測手段全面評估，系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查除了注意oae、abr和鐙骨肌反射等特點(diǎn)以外，還應(yīng)強(qiáng)調(diào)assr、40hz aerp在診斷中的作用和意義；同時在新生兒聽力篩查時也要oae與abr聯(lián)合應(yīng)用，以提高檢出率。根據(jù)聽神經(jīng)病患病側(cè)別分為雙側(cè)聽神經(jīng)病和單側(cè)聽神經(jīng)病：6例符合單側(cè)聽神經(jīng)病表現(xiàn)，臨床聽力學(xué)特征與雙側(cè)一致。根據(jù)發(fā)病形式分為散發(fā)聽神經(jīng)病和家系聽神經(jīng)?。罕狙芯?46名患者中，138例為散發(fā)聽神經(jīng)病，8例為家族性聽神經(jīng)病患者，分屬于4個不同的

48、聽神經(jīng)病家系；家族性聽神經(jīng)病患者符合典型的聽神經(jīng)病聽力學(xué)特征，以家族聚集性表現(xiàn)為特點(diǎn)，具有典型的遺傳特征。 第二部分 otof基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究針對otof基因的48個外顯子共設(shè)計了45對引物，以門診收集的76例聽神經(jīng)病散發(fā)病例作為研究對象，選取92名聽力正常的健康人作為對照，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(polymelase chain reaction pcr)擴(kuò)增，對pcr擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序，對測序結(jié)果進(jìn)行比較分析，檢測突變，以了解該基因?qū)β犐窠?jīng)病的貢獻(xiàn)情況。 研究發(fā)現(xiàn)：76例聽神經(jīng)病患者共檢測出34種多態(tài)。位于外顯子上的多態(tài)有15種，包括7種錯義突變、2種缺失突變，和6種未引起氨

49、基酸改變的單核苷酸多態(tài)；位于內(nèi)含子上的多態(tài)有19種，其中13種分別有雜合和純合兩種形式，6種僅存在雜合一種形式。 在1例臨床確診為溫度敏感性聽神經(jīng)病的患者otof基因上發(fā)現(xiàn)1種特殊的缺失突變(2975-2978delag)和2種特殊的錯義突變(a53t和r1607w，復(fù)合雜合)?；颊吣赣H攜帶相同的缺失突變，而父親攜帶相同的2種錯義突變(復(fù)合雜合)，而他們的聽力是正常的。此3種突變在其他聽神經(jīng)病患者和對照組中均未發(fā)現(xiàn)。缺失突變和復(fù)合雜合突變均引起氨基酸極性的改變，對蛋白質(zhì)功能可能會產(chǎn)生一定影響，同時該患者表型和基因型相互對應(yīng)，考慮為溫度敏感性聽神經(jīng)病的相關(guān)突變位點(diǎn)，這3種突變與功能的相關(guān)性還需進(jìn)

50、一步研究。 外顯子上的多態(tài)a53v、r82c、r49w以及372a/g和4677 g/a經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析驗證，為單核苷酸多態(tài)；129ct/wt、4767ct/wt和5418ct/wt僅有雜合一種形式，且在聽神經(jīng)病患者和對照組均有發(fā)現(xiàn)；76ca/wt也只有雜合一種形式，僅在1例患者發(fā)現(xiàn)；1740delc，d398e和e594k均只在1例患者發(fā)現(xiàn)，對照組未發(fā)現(xiàn)，此3種多態(tài)引起氨基酸的改變，但攜帶者表型無特殊，是否與疾病相關(guān)有待進(jìn)一步研究。內(nèi)含子區(qū)域的19種多態(tài)，聽神經(jīng)病組和對照組攜帶頻率相近，且位置離編碼區(qū)較遠(yuǎn)，考慮為單核苷酸多態(tài)。 otof基因檢測有利于聽神經(jīng)病的分型和預(yù)后的判斷。具有otof基因

51、突變的個體，表現(xiàn)的聽神經(jīng)病以突觸及突觸前型為主，適于進(jìn)行人工耳蝸手術(shù)治療并可取得良好的效果。本研究并未發(fā)現(xiàn)國外報道的otof基因致病突變位點(diǎn)。 第三部分 gjb1基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究中針對gjb1基因的1個外顯子設(shè)計了2對引物，以41名男性聽神經(jīng)病散發(fā)患者及一個可能為x-連鎖遺傳的、有3名男性患者的小家系(0602423家系)為研究對象，并選取50名聽力正常男性健康人作為對照，采取與第二部分相同的研究方法，進(jìn)行了突變篩查。 研究發(fā)現(xiàn)：在全部44名患者中僅發(fā)現(xiàn)1個位點(diǎn)的堿基發(fā)生了突變，且該突變僅發(fā)生于兩名散發(fā)聽神經(jīng)病患者，分別表現(xiàn)為純合和雜合形式。該突變位點(diǎn)位于gjb1基因dn

52、a序列的512位，由c變?yōu)閠，且并沒有引起氨基酸的變化。0602423家系患者及其親屬均未發(fā)現(xiàn)突變，對照組也未發(fā)現(xiàn)任何形式的突變。gjb1基因可初步排除與聽神經(jīng)病的相關(guān)性。 本研究詳細(xì)分析了146例聽神經(jīng)病患者臨床和聽力學(xué)資料，明確了聽神經(jīng)病的臨床表現(xiàn)和診斷要點(diǎn)；對聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征的分析，更加深入的掌握綜合征型聽神經(jīng)病、嬰幼兒聽神經(jīng)病、單側(cè)聽神經(jīng)病以及家族性聽神經(jīng)病等不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。應(yīng)用候選基因法對散發(fā)病例進(jìn)行了otof基因的突變篩查，共發(fā)現(xiàn)34種多態(tài)，其中包括溫度敏感性聽神經(jīng)病的致病突變(缺失突變和復(fù)合雜合突變)。應(yīng)用候選基因法對x-連鎖遺傳聽神經(jīng)病家系及男性散發(fā)聽神經(jīng)病患

53、者gjb1基因進(jìn)行突變篩查，未發(fā)現(xiàn)有貢獻(xiàn)的突變位點(diǎn)。臨床資料的探討有利于我們加深對聽神經(jīng)病本質(zhì)的理解，聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)研究為進(jìn)一步理解聽神經(jīng)病的發(fā)病原因及轉(zhuǎn)歸將有所幫助。從上個世紀(jì)80年代開始，國內(nèi)外臨床聽力學(xué)家、聽覺生理學(xué)家、耳鼻咽喉科臨床醫(yī)生以及分子遺傳學(xué)家們開始關(guān)注一種具有獨(dú)特臨床表現(xiàn)特征的聽力疾病-聽神經(jīng)病。聽神經(jīng)病(auditory neuropathy，an)是一種表現(xiàn)為聲音可以通過外耳、中耳正常的進(jìn)入到內(nèi)耳但是聲音信號不能同步地從內(nèi)耳傳輸?shù)酱竽X的聽功能異常性疾病，具體主要表現(xiàn)為誘發(fā)性耳聲發(fā)射(evokedotoacoustic emission，eoae)正常、聽性腦干反應(yīng)(a

54、uditory brainstem response，abr)嚴(yán)重異常的一組聽功能障礙癥候群。 聽神經(jīng)病的病因至今尚未明確，迄今報道的病因有遺傳、免疫、感染、中毒、代謝等。近年來關(guān)于聽神經(jīng)病致病基因?qū)W的研究引起越來越多的關(guān)注。應(yīng)用分子遺傳學(xué)研究手段對散發(fā)及家系神經(jīng)病患者進(jìn)行致病基因?qū)W研究，已成為目前國內(nèi)外耳科領(lǐng)域研究的新的熱點(diǎn)之一，對進(jìn)一步了解和探討聽神經(jīng)病致病因素具有重要的意義。 本研究以我院耳鼻咽喉科門診及耳鼻咽喉研究所遺傳資源收集網(wǎng)絡(luò)收集到的聽神經(jīng)病的散發(fā)及家系病人為研究對象，對其臨床聽力學(xué)特征與遺傳學(xué)特征進(jìn)行分析，并進(jìn)行了候選基因的突變篩查，以進(jìn)一步了解聽神經(jīng)病。 本研究共分三個部分：

55、 第一部分門診聽神經(jīng)病患者臨床資料分析 選取本院門診2003年2006年確診的散發(fā)及家系聽神經(jīng)病患者146例，分析整理臨床資料和系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查結(jié)果，總結(jié)聽神經(jīng)病患者的臨床特征；同時分析聽神經(jīng)病臨床遺傳學(xué)特征，根據(jù)發(fā)病年齡、伴隨癥狀、發(fā)病形式以及分子流行病學(xué)等方面的不同表現(xiàn)，將聽神經(jīng)病進(jìn)行分型討論，闡述不同類型聽神經(jīng)病各自的特點(diǎn)。 結(jié)果顯示：146例聽神經(jīng)病患者男女比例為1：1.35。發(fā)病年齡在20歲以下者占93.8，病程在5年以下者占78.1。聽力圖表現(xiàn)為低頻聽力下降型曲線者占77.3；言語識別率不成比例低于純音聽閾的下降程度；鐙骨肌聲反射均不能引出或閾值升高；268耳abr自波i起全部未引

56、出，7例13耳(6例雙耳，1例單耳)可引出v波，4例5耳(1例雙耳，3例單耳)可引出i波；dpoae檢查各頻率均可引出反應(yīng)，對側(cè)抑制反應(yīng)100消失；assr檢查可望用來了解聽神經(jīng)病患者言語的識別能力；40hz aerp檢測對中、低頻聽閾的客觀評價較好，可以與abr結(jié)合來定位腦干病變，對低頻聽力做出評估；耳蝸電圖檢查，-sp/ap1及無法辨認(rèn)ap波者占64.5，且僅有4.3患耳-sp/ap0.4；20例患者進(jìn)行頭部影像學(xué)檢查，19例示正常，1例顳骨ct平掃示雙側(cè)中耳乳突炎、雙側(cè)上頜竇炎。耳聲發(fā)射正常、abr引不出、言語識別率下降與純音聽力不成比例、鐙骨肌反射不能引出及影像學(xué)檢查不支持蝸后占位性病

57、變等是診斷聽神經(jīng)病的主要標(biāo)準(zhǔn)，assr、40hz aerp和耳蝸電圖可以輔助診斷。 本研究根據(jù)是否伴隨其它顱神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病變將聽神經(jīng)病分為綜合征型和非綜合征型：23例為綜合癥型聽神經(jīng)病，其中20例合并周圍神經(jīng)病變，3例合并視神經(jīng)萎縮。根據(jù)發(fā)病年齡分為成人聽神經(jīng)病和小兒聽神經(jīng)?。喊l(fā)病年齡在12歲以下的小兒聽神經(jīng)病患者41例，其中有16例是3歲以下的嬰幼兒聽神經(jīng)病；嬰幼兒聽神經(jīng)病的診斷需要結(jié)合多種臨床檢測手段全面評估，系統(tǒng)的聽力學(xué)檢查除了注意oae、abr和鐙骨肌反射等特點(diǎn)以外，還應(yīng)強(qiáng)調(diào)assr、40hz aerp在診斷中的作用和意義；同時在新生兒聽力篩查時也要oae與abr聯(lián)合應(yīng)用，以提高

58、檢出率。根據(jù)聽神經(jīng)病患病側(cè)別分為雙側(cè)聽神經(jīng)病和單側(cè)聽神經(jīng)病：6例符合單側(cè)聽神經(jīng)病表現(xiàn)，臨床聽力學(xué)特征與雙側(cè)一致。根據(jù)發(fā)病形式分為散發(fā)聽神經(jīng)病和家系聽神經(jīng)?。罕狙芯?46名患者中，138例為散發(fā)聽神經(jīng)病，8例為家族性聽神經(jīng)病患者，分屬于4個不同的聽神經(jīng)病家系；家族性聽神經(jīng)病患者符合典型的聽神經(jīng)病聽力學(xué)特征，以家族聚集性表現(xiàn)為特點(diǎn)，具有典型的遺傳特征。 第二部分 otof基因在聽神經(jīng)病患者中的突變檢測 本研究針對otof基因的48個外顯子共設(shè)計了45對引物，以門診收集的76例聽神經(jīng)病散發(fā)病例作為研究對象，選取92名聽力正常的健康人作為對照，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(polymelase chain reaction pcr)擴(kuò)增，對pcr擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序，對測序結(jié)果進(jìn)行比較分析，檢測突變，以了解該基因?qū)β犐窠?jīng)病的貢獻(xiàn)情況。 研究發(fā)現(xiàn)：76例聽神經(jīng)病患者共檢測出34種多態(tài)。位于外顯子上的多態(tài)有15種，包括7種錯義突變、2種缺失突變，和6種未引起氨基酸改變的單核苷酸多態(tài)；位于內(nèi)含子上的多態(tài)有19種，其中13種分別有雜合和純合兩種形式，6種僅存在雜合一種形式。 在1例臨床確診為溫度敏感性聽神經(jīng)病的患者otof基因上發(fā)現(xiàn)1種特殊的缺失突變(2975-2978delag)和2種特殊的錯義突變(a53t和r1607w，復(fù)合雜合)。患者母親攜帶相同的缺失突變，而父親攜帶相同的2種錯義突變(復(fù)合雜合)，而