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1、PCR設(shè)計(jì)引物時(shí)酶切位點(diǎn)的保護(hù)酶寡核苷酸序列切割率%2 hr20 hrAcc IGGTCGAC00CGGTCGACG00CC GTCGACGG00Afl IIICACATGTG00CCACATGTGG9090CCCACATGTGGG9090Asc IGGCGCGCC9090AGGCGCGCTC9090TTGGCGCGCAAC9090Ava ICCCCGGG5090CCCCCGGGG9090TCCCCCGGGGA9090BamH ICGGATCGC1025CGGGATCCG9090CGCGGATCGCCG9090Bgl IICAGATCTG00GAAGATCTC7590GG AGATCTCC25
2、90BssH IIGGCGCGC00AGGCGCGCT00TTGGCGCGCAA5090BstE IIGGGT(A/T)ACCC010BstX IAACTGCAGACACAATGCATTGG00AAAACTGCACGCAATGCATTGAGA2550CTGCAGACACAATGCATTGAGTGCAT2590Cla ICATCGATG00GATCGATC00CCATCGATGG9090CCCATCGATGGG5050EcoR IGGAATT C9090CGGAATT CG9090CC GAATT CGG9090Hae IIIGGGGCCC9090AGCGGCCGCT9090TTGCGGCCGC
3、AA9090Hind IIICAAGCTTG00CCAAGCTTGG00CCCAAGCTTGGG1075Kpn IGGGTACC00GGGGTACCC9090CG GGTACCCG9090Mlu IGACGCGCT00CGACGCGCTG2550Nco ICCCATGG00CATGCCATGCGATG5075Nde ICCATAT G00CCCATAT GG00CG CATAT GCG00GGGTTCTATATGAAACCC00GGAATTCATAT GAATTCC7590GGGAATTCATAT GAATTCCC7590Nhe IGGCTAGC00CGGCTAGCG1025CTAGCTAGT
4、CAG1050Not ITTGCGGCCGAAC00ATTTGCGGCCGTTCTA1010AAATATGCGGCCGTACTAAA1010ATAAGAAGTCGGCCGTACAACTAT2590AAGGAAAAAGACGGCCGAACAAGGAAAA2590Nsi ITGCATGCATGCA1090CCAATGCATGGTTCTGCAGTT9090Pac ITTAATTAA00GTTAATTAAC025CCTTAATTAAGG090Pme IGTTTAAAC00GGTTTAAAC025GGGTTTAAACC050AGCTTTGTTTAAAGCGCGCGCCGG7590Pst IGCTGCAC
5、G00TGCACTGCATGGCA1010AACTGCAAGACCAATGCATTGG9090AAAACTGCACGCAATGCATTGGAA9090CTGCAAGACCAATGCATTGGATGCAT00Pvu ICCGATCG00ATCGATCAGT1025TCGCGATCCGGA010Sac ICGAGCTGC1010Sac IIGCCGCGCG00TCCCCGCGGGA5090Sal IGTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGC00GCGTCGAGCTCTTGGCCATAGCGGCCGCGG1050ACGCGTCGAGCTCGGCCATAGCGGCCGCGGAA1075S
6、ca IGAGTACTC1025AAAAGTACTTT7575Sma ICCCGGG010CCCCGGG010CCCCCGGGG1050TCCCCCGGGGA9090Spe IGACTAGTC1090GGACTAGTCC1090CGGACTAGTCCG050CTAGACTAGTCTAG050Sph IGGCATGC00CATGCATGACTG025ACATGCATGACTGT1050Stu IAAGGCCT9090GAAGGCCTC9090AAAAGGCCTTT9090Xba ICTCTAGAG00GCTCTAGAGC9090TGCTCTAGAGCA7590CTAGTCTAGACTAG7590Xho ICCTCGAG00CCCTCGAGG1025CCGCTCGACGGG1075Xma ICCCCGGG00CCCCCGGGG2575CC CCCGGGGG5090TCCCCCCGGGGGA9090注釋:1如果要加在序列的 5端,就在酶切位點(diǎn)識別堿基序列(紅色)的
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