低強(qiáng)度脈沖場(chǎng)超聲對(duì)充質(zhì)干細(xì)胞的增殖作用研究(2)

1、低強(qiáng)度脈沖場(chǎng)超聲對(duì)充質(zhì)干細(xì)胞的增殖作用研究(2)2.2 細(xì)胞形態(tài)觀察細(xì)胞培養(yǎng) 60 h （即第 2 次刺激后12 h）時(shí)觀察細(xì)胞發(fā)現(xiàn)刺激組60 mW/cm2孔中間細(xì)胞密度明顯比邊緣多，細(xì)胞排列緊密，渦旋式生長；對(duì)照組細(xì)胞均勻分布（見圖3）。2.3 hASCs細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定 LIPUS 連續(xù)刺激4 d后取第3代hASCs流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，刺激組（60 mW/cm2）與對(duì)照組細(xì)胞表面標(biāo)志：CD105、CD73 和 HLA-ABC 均高表達(dá)；CD14、CD34、CD45 和HLA-DR 均低表達(dá)，見圖 4.2.4 無菌試驗(yàn)和支原體檢測(cè)刺激后的第 3 代hASCs 細(xì)胞檢測(cè)，48 h 均無細(xì)

2、菌生長，檢測(cè)結(jié)果均為陰性；支原體培養(yǎng)結(jié)果均為陰性，見圖5.2.5 細(xì)胞內(nèi)源致病因子的檢測(cè)刺激后的第 3代 hASCs 細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)人源特定病毒包括HBV、HCV、CMV進(jìn)行DNA表達(dá)量，檢測(cè)結(jié)果均為陰性（干細(xì)胞應(yīng)用于臨床治療和再生醫(yī)學(xué)的潛能已被干細(xì)胞研究者們廣泛關(guān)注。而一個(gè)治療的療程至少需要1×107個(gè)細(xì)胞，但從患者、捐贈(zèng)者身上無法獲得足夠的hASCs,限制了其應(yīng)用15.有學(xué)者探索通過改變各種培養(yǎng)條件，如不同的細(xì)胞因子和生長因子，促進(jìn)體內(nèi)來源的ASCs體外擴(kuò)增，目前尚未取得臨床相關(guān)結(jié)論。Jie Chen團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)LIPUS不僅促進(jìn)人類臍帶和骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞（M

3、SC）的增長和集落形成，而且促進(jìn)造血祖干細(xì)胞（HSPC）增殖和分化12,表明可利用LIPUS來獲得更多MSC以用于臨床12,16.通過研究，筆者發(fā)現(xiàn)強(qiáng)度為60 mW/cm2的LIPUS有效促進(jìn)hASCs的擴(kuò)增，與對(duì)照組比較細(xì)胞數(shù)量增加約17%,細(xì)胞倍增時(shí)間縮短為對(duì)照組的0.875倍。需要的細(xì)胞數(shù)量少，且刺激時(shí)間短，是有效擴(kuò)增hASCs的方法之一。本實(shí)驗(yàn)存在的不足是未進(jìn)行更低頻率刺激和延長刺激時(shí)間研究。研究顯示，LIPUS 不僅能促進(jìn) HSPC 亦能促進(jìn)hASCs 有效增殖。LIPUS 刺激不改變干細(xì)胞培養(yǎng)條件，只改變細(xì)胞微環(huán)境或能量轉(zhuǎn)換使干細(xì)胞增殖，避免外源細(xì)胞因子和生長因子等影響。因此，我們

4、的研究結(jié)果將可以為干細(xì)胞體外快速增殖和產(chǎn)業(yè)化提供新途徑。下一步我們將驗(yàn)證其增殖的安全性。參 考 文 獻(xiàn)1 Qin L, Fok P, Lu H, et al. Low intensity pulsed ultrasound increasesthe matrix hardness of the healing tissues at bone-tendon insertion-apartial patellectomy model in rabbits J. Clin Biomech （Bristol,Avon）， 2006, 21（4）： 387-394.2 He R, Zhou W, Zha

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