現(xiàn)代儀器分析論文

1、高效液相色譜法研究摘要：高效液相色譜法 （high performance liquid chromatography，HPLC） 也稱高壓液 相色譜法。 它是在經(jīng)典的液相柱色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展而成的一種高效、 快速、高靈 敏的色譜分離方法。根據(jù)柱內(nèi)填料的不同及不同的分離機制，可分為吸附色譜、 分配色譜、 離子交換色譜及凝膠色譜。 由于采用了高效填充劑， 并配以高壓輸液 泵、高靈敏檢測器、 自動記錄裝置及自動收集裝置， 使高效液相色譜法的分離速 度及效率均大大提高，更趨于儀器化、自動化，且使用范圍廣。制備型的 HPLC 能大量分離制備較純的樣品。隨著計算機技術(shù)的不斷發(fā)展， HPLC 與質(zhì)譜、核磁

2、共振譜、紅外光譜等波譜技術(shù)的聯(lián)用進展加快。關(guān)鍵字 ：液相色譜；分類；應(yīng)用高效液相色譜法是以液體作為流動相， 并彩用顆粒極細(xì)的高效固定相的柱色 譜分離技術(shù)。 高效液相色譜對樣品的適用性廣， 不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性 的限制， 因而彌補了氣相色譜法的不足。 在目前已知的有機化合物中， 可用氣相 色譜分析的約占 20%，而 80%則需用高效液相色譜來分析。一、高效液相色譜法分類根據(jù)分離機理可分為： 吸附色譜、鍵合相色譜、離子交換色譜、 大小排阻（凝 膠）色譜、液 - 液分配色譜法 。1、吸附色譜分離 吸附色譜法是當(dāng)組分分子流經(jīng)固定相（吸附劑，如硅膠或氧化鋁）時，不同 組分分子、 流動相分子就要對

3、吸附劑表面的活性中心展開競爭。 這種競爭能力的 大小，決定了保留值大小，即被活性中心吸附得越牢的分子，保留值越大。2、鍵合相色譜分離 鍵合相色譜法是將類似于氣相色譜中的固定液的液體， 通過化學(xué)反應(yīng)鍵合到 硅膠表面， 從而形成固定相。 采用化學(xué)鍵合固定相的色譜法稱為鍵合相色譜。 若 采用極性鍵合相、非極性流動相，則稱為正相色譜；采用非極性鍵合相、極性流 動相，則稱為反相色譜。 這種分離的保留值大小， 主要決定于組分分子與鍵合固 定液分子間作用力的大小。3、離子交換色譜分離離子交換色譜法是流動相中的被分離離子，與作為固定相的離子交換劑上的平衡離子進行可逆交換時，它們對交換劑的基體離子親和力大小的不

4、同而達到分 離的。組分離子對交換劑基體離子親和力越大，保留時間就越長。4、大小排阻色譜分離大小排阻色譜法的固定相是一類孔徑大小有一定范圍的多孔材料。被分離的分子大小不同，它們擴散滲入多孔材料的容易程度不同。小分子最易擴散進入細(xì) 孔中，保留時間最長；大分子完全排斥在孔外，隨流動相很快流出，保留時間最 短。5、液-液分配色譜法分離液-液分配色譜的固定相和流動相是互不相溶的兩種溶劑，分離時,組分溶入兩相，不同的組分因分配系數(shù)（K）的不同而被分離.目前廣泛使用的化學(xué)鍵合固定 相是將固定液的官能團鍵合在載體上而制成的，使用化學(xué)鍵合固定相的色譜方法 （簡稱鍵合相色譜法）可以用分配色譜的原理加以解釋鍵合相色

5、譜法在HPLC中 占有極其重要的地位，是應(yīng)用最廣的色譜法按照固定相和流動相極性的不同，分 配色譜法又可分為正相色譜法和反相色譜法兩類 .二、高效液相色譜儀簡介高效液相色譜儀主要由：輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、色譜柱系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)等組成。色譜轉(zhuǎn)柱1r卡己隸僅Y1檢測磐1、輸液泵：高效液相色譜的流動相采用高壓泵輸送，有不同類型的輸液泵按輸液性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵.目前使用較多的是柱塞式往復(fù)泵2、進樣器 ：進樣器是將試樣送入色譜柱的裝置 .一般要求進樣裝置的密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進樣 ,進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力 ,流量影響小。3、色譜柱 ： 色譜柱是色譜分離的核心 .為了保

6、證色譜柱的柱效高 ,使用壽 命長 ,一般使用由專業(yè)化工廠生產(chǎn)的商品柱.色譜柱管多由不銹鋼制成 ,內(nèi)裝一定的固定相色譜往長一般1030cm,內(nèi)徑25mm.化學(xué)鍵合相是廣泛使用的固定 相 , 其中又以十八烷基硅烷鍵合硅膠的應(yīng)用最為廣泛。4、檢測器 ：樣品經(jīng)色譜柱分離后進入檢側(cè)器進行檢測 .按其適用范圍檢測 器可分為通用型和專屬型兩大類 ,專屬型檢測器只能檢測某些組分的某一性質(zhì),紫外檢測器（UVD）,熒光檢測器（ED）屬于這一類，它們只對有紫外吸收或熒光發(fā)射的 組分有響應(yīng) ;通用型檢測器檢測的是一般物質(zhì)均具有的性質(zhì),示差折光檢測器（RID）,蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）等.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-

7、MS）則是用質(zhì)譜作為 高效液相色譜的檢測器。5、數(shù)據(jù)記錄處理和計算機控制系統(tǒng) : 現(xiàn)代 HPLC 的特征是用微機控制儀 器.HPLC儀器的中心計算機控制系統(tǒng)，即能做數(shù)據(jù)采集和分析工作，又能程序控制 儀器的各個部件 ,還能在分析一個試樣之后自動改變條件而進行下一個試樣的分 析,許多色譜儀的軟件系統(tǒng)具有方法認(rèn)證功能 ,使分析工作更加規(guī)范化 .三、高效液相色譜的特點高壓 壓力可達150300 kg/cm2。色譜柱每米降壓為 75 kg/cm2以上。 高速流速為0.110.0 mL/min。高效塔板數(shù)可達 5000/米。在一根柱中 同時分離成份可達100種。高靈敏度一一紫外檢測器靈敏度可達 0.01

8、ng。同時消 耗樣品少。四、高效液相色譜法的應(yīng)用1. 在鑒別中的應(yīng)用 在HPLC法中,保留時間與組分的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)有關(guān)，是定性的參數(shù),可用于藥物的鑒 別.如中國藥典收載的藥物頭孢羥氨芐的鑒別項下規(guī)定:在含量測定項下記錄的色譜圖中,供試品主峰的保留時間應(yīng)與對照品主峰的保留時間一致.頭抱拉定,頭孢噻酚鈉等頭孢類藥物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多種藥物均采用HPLC 法進行鑒別。2. 在雜質(zhì)檢查中的應(yīng)用HPLC 分離效能高 ,靈敏 ,在藥物的雜質(zhì)檢查中應(yīng)用廣泛 .主要用于藥物中有關(guān)物質(zhì) 的檢查?！坝嘘P(guān)物質(zhì)”是指藥物中存在的合成原料 ,中間體 ,副產(chǎn)物 ,降解產(chǎn)物等物 質(zhì) ,這些物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與

9、藥物相似 ,含量很低 ,只有采用色譜的方法才能將其 分離并檢測 .若雜質(zhì)是已知的 ,又有雜質(zhì)的對照品 ,可用雜質(zhì)對照品做對照進行檢 查 .若雜質(zhì)是未知的 ,可以采用主成分自身對照法或峰面積歸一化法進行檢查。3. 在含量測定中的應(yīng)用 用高效液相色譜法側(cè)定含量可以消除藥物中的雜質(zhì) ,制劑中的附加劑及共存的藥 物對測定的干擾 .中藥材及其制劑組成復(fù)雜 ,基中不少有效成分的含量測定也越來 越多地采用了高效液相色譜法。參考文獻1、周蓉，齊莉，王雅芬，朱一川 .藥物分析雜志， 2008， 18（增刊）：3233242、劉穎華，何開澤，張軍峰 .高壓液相色譜分析法 .應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報 .2003（. 9）： 1411453、何偉，韓笑，譚天偉 .北京化工大學(xué)學(xué)報， 2002，29（ 4）：88894、于村，俞沙，丁鋼