金標(biāo)類檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則(報(bào)批稿)

1、金標(biāo)類檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制注冊技 術(shù)審查指導(dǎo)原則（報(bào)批稿） 2010-11-09 01:30 金標(biāo)類檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量 控制注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（報(bào)批稿） 一、前言 本指導(dǎo)原則的主要目的是規(guī)范申請人對金標(biāo)類類檢測 試劑的主要原材料研究資料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究資料 的準(zhǔn)備，并對產(chǎn)品質(zhì)量控制提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。 本指導(dǎo)原則系對金標(biāo)類檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng) 依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需 詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。 本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不 包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行， 如果有能夠

2、滿足相關(guān)法規(guī)要求的其它方法，也可以采用，但 是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī) 的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水 平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的 不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。 二、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于第三類體外診斷試劑中金標(biāo)類試劑 的注冊技術(shù)審查，其他類金標(biāo)試劑可作參考。 三、基本要求 （一）基本原則 1. 診斷試劑的研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定 相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。 2. 診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀 器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境， 獲得醫(yī)療器械

3、生產(chǎn)許可證 ； 同時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照 體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則 （試行） 的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí) 施并保持有效運(yùn)行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過體外診斷試劑生 產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）的考核。 3. 診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研 發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。 4. 研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能 涉及的安全性方面的事宜。 5. 生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì) 量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。 （二）原材料質(zhì)量控制 1. 主要生物原料 與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種天 然抗原、重組抗原

4、、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生 物原科。這類原料可用于膠體金標(biāo)記、包被硝酸纖維膜及用 于制備質(zhì)控線的抗原或抗體等。使用前應(yīng)按照工藝要求對這 類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若 購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果 主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān) 法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。 主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括： （1）外觀 肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異 物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其 他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。 （2）純度

5、和分子量 主要經(jīng)SDS-PAGE電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析， 也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物 原料的分子量選擇適宜的聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一 般每個(gè)電泳道加樣量為 5卩g;電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán) 染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的 純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng) 在正確的條帶位置。 （3）蛋白濃度 蛋白濃度可通過 Lowry 法、 280nm 光吸收法、雙縮脲方 法等進(jìn)行檢測。 （4）效價(jià) 效價(jià)的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋 法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。 （5）功能性實(shí)驗(yàn) 功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑

6、盒實(shí)際生產(chǎn)中的情 況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性 等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。用于制備質(zhì)控線的抗 原或抗體可采用其他適宜方法進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)。 2. 生物輔料 生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的 一類生物原料，主要包括牛血清白蛋白等。這些生物原料的 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（ 20 00 年版）規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求并檢驗(yàn)合格，達(dá)到相應(yīng)的質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)后方可用于生產(chǎn)。 建議對牛血清白蛋白作以下檢驗(yàn)： 外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色凍干粉末，無吸潮， 無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。 溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，溶解時(shí)間在 18

7、-26 C時(shí)應(yīng)不大于 15分鐘，pH值應(yīng)為6.5 7.1 o 總蛋白含量：用雙縮脲方法來測定，其標(biāo)準(zhǔn)為大于等于 95% 總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo) 準(zhǔn)為95% BSA的凈含量：總蛋白含量乘以總蛋白中的BSA含量， 其標(biāo)準(zhǔn)為90% 生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供 應(yīng)商。 3. 化學(xué)原材料 化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照中國生物制品主要原輔材 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）分析純級別進(jìn)行檢驗(yàn)。主要的檢 測指標(biāo)包括：外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、 干燥失重、熾灼殘?jiān)取?主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生 變更?；瘜W(xué)原材料在購入時(shí)，原材料的生

8、產(chǎn)商必須提供該批 次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 4. 其他物料 硝酸纖維素膜、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙、玻璃纖 維膜等在購入時(shí)，其生產(chǎn)商必須提供該批次材料的質(zhì)量保證 材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)。 （1）硝酸纖維素膜 硝酸纖維素膜應(yīng)具有厚度、孔徑大小等要求，毛細(xì)遷移 速度，韌性（切割時(shí)膜破損引起的廢品率）、均一性（厚度 偏差范圍、毛細(xì)遷移速度偏差范圍）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。 （2）玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙 玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應(yīng)具有厚度、毛細(xì)遷移速 度、重量等要求，均一性（厚度偏差范圍，毛細(xì)遷移速度偏 差范圍

9、，重量偏差范圍）應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。 （3）玻璃纖維膜 適用于全血檢測的金標(biāo)試劑，過濾紅細(xì)胞所用玻璃纖維 膜或其他材料具有不吸附蛋白質(zhì)的特點(diǎn)，應(yīng)具有厚度、孔徑 大小等要求。 （4）塑料襯片 塑料襯片應(yīng)具有厚度、硬度（切割時(shí)一次未能整條切下 的百分率）、尺寸（與標(biāo)識吻合）、粘性（切割時(shí)造成玻璃 纖維與塑料襯片分離的百分率）等要求。 （5）其他 粘膠紙、 鋁箔袋、 說明書、 包裝外盒、 瓶子和干燥劑等， 應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的體外診斷試劑說明 書編寫指導(dǎo)原則和醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管 理規(guī)定建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 （三）試劑盒的制備 本類試劑的生產(chǎn)包括膠體金及膠體金標(biāo)記抗原或抗體

10、 的制備，膠體金標(biāo)記的包被，檢測線及質(zhì)控線的制備，膠體 金標(biāo)記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配 置等步驟，并通過產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個(gè)質(zhì)控過 程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。 1. 膠體金標(biāo)記物的制備 采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金 顆粒大小應(yīng)符合規(guī)定，膠體金標(biāo)記物在510、560nm波長處應(yīng) 有最大吸收值，置 2 8C保存，應(yīng)在規(guī)定的保存期內(nèi)使用。 采用合適的方法確定膠體金標(biāo)記物、包被抗原或抗體工作濃 度，將工作濃度的膠體金標(biāo)記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維 膜上。 2. 檢測線及質(zhì)控線的制備 取已確定使用濃度的相關(guān)抗原或抗體，在硝酸纖維素膜 上制備檢測線，應(yīng)用同

11、樣方法制備質(zhì)控線，根據(jù)生產(chǎn)工藝在 規(guī)定的溫度、濕度條件下干燥，置規(guī)定的濕度（通過驗(yàn)證方 法確定相對濕度要求）條件下存放。檢測線與質(zhì)控線應(yīng)具有 間隔距離要求，應(yīng)對所用的金標(biāo)用玻璃纖維及硝酸纖維素膜 等進(jìn)行質(zhì)量檢測，如尺寸、外觀、包裝及吸附性能等，并記 錄批號、數(shù)目、標(biāo)識，不同批號的玻璃纖維及硝酸纖維素膜 不能混用。 3. 貼膜、切割、裝袋 貼膜、切割及裝袋應(yīng)在具有相應(yīng)濕度（通過驗(yàn)證方法確 定相對濕度要求）條件下操作，切割的膜條應(yīng)有寬度要求。 （四）質(zhì)量控制 用于半成品及成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括靈敏度、特異 性、精密度等指標(biāo)，如具有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）的產(chǎn)品應(yīng) 使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)

12、品（參考品）標(biāo)化 的企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考 品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì) 量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其 質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn) 品的質(zhì)量。 1. 半成品質(zhì)量控制 （ 1）半成品抽樣 檢驗(yàn)人員按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作號標(biāo)記，待 檢。 （ 2）半成品檢驗(yàn) 對所抽樣的半成品做陰 / 陽性參考品符合率、靈敏度、 特異性、 精密度等試劑盒性能方面的檢測， 應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究，并制 定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可在在特定溫度或特定條件 下完成。 2. 成品質(zhì)量控制 每一批金標(biāo)試劑報(bào)批批量應(yīng)至少為 3000 人份。 一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）對成品進(jìn)行檢驗(yàn)，并達(dá) 到相應(yīng)質(zhì)量要求。 若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品 （參考品） 則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制 程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng) 不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì) 量。 （1）物理檢查 應(yīng)進(jìn)行外觀是否平整，材料附著是否牢固，液體移行速 度，膜條寬度等物理檢查，應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 （2）性能方面的檢測 陰/ 陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試 劑盒性能方面的檢測，應(yīng)符