微生物的檢驗(yàn)

1、gb 4789.2-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定錄入時間:2010-4-28 9:02:54 來源：國家衛(wèi)生部前言本標(biāo)準(zhǔn)代替gb/t 4789.2-2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定。本標(biāo)準(zhǔn)與gb/t 4789.2-2008相比，主要修改如下：修改了標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱；修改了菌落總數(shù)計(jì)算公式中的解釋；修改了培養(yǎng)基和試劑；刪除了第二法 菌落總數(shù)petrifilm tm測試片法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄a是規(guī)范性附錄。gb 4789.2-2010所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：gb 4789.2-1984、gb 4789.2-1994、gb/t 4789.2-2003、gb

2、/t 4789.2-2008。食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)（aerobic plate count）的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測定。2 術(shù)語和定義2.1 菌落總數(shù) aerobic plate count食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等）培養(yǎng)后，所得每g（ml） 檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。3 設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：3.1 恒溫培養(yǎng)箱：36 1 ，30 1 。3.2 冰箱：2 5 。3.3 恒溫水浴箱：46 1 。3.4 天平：感量為 0.1 g。3.5

3、均質(zhì)器。3.6 振蕩器。3.7 無菌吸管：1 ml（具 0.01 ml 刻度）、10 ml（具 0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸頭。3.8 無菌錐形瓶：容量 250 ml、500 ml。3.9 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm。3.10 ph 計(jì)或 ph 比色管或精密 ph 試紙。3.11 放大鏡或/和菌落計(jì)數(shù)器。4 培養(yǎng)基和試劑4.1 平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基：見附錄 a 中 a.1。4.2 磷酸鹽緩沖液：見附錄 a 中 a.2。4.3 無菌生理鹽水：見附錄 a 中 a.3。5 檢驗(yàn)程序 菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序見圖1。 6 操作步驟 6.1 樣品的稀釋6.1.1 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品

4、置盛有 225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min10000 r/min 均質(zhì) 1 min2 min，或放入盛有 225 ml 稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均 質(zhì)器拍打 1 min2 min，制成 1:10 的樣品勻液。6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 ml 樣品置盛有 225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶 （瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。 6.1.3 用 1 ml 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 ml，沿管壁緩慢注于盛有 9 ml 稀釋液的 無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及

5、稀釋液面），振搖試管或換用 1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混 合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。6.1.4 按 6.1.3 操作程序，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次 1 ml 無菌吸管 或吸頭。6.1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 2 個3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行 10 倍遞增稀釋時，吸取 1 ml 樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸 取 1 ml 空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。6.1.6 及時將 15 ml20 ml 冷卻至 46 的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于 46 1 恒溫水浴箱中 保溫）傾

6、注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。6.2 培養(yǎng)6.2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 1 培養(yǎng) 48 h2 h。水產(chǎn)品 30 1 培養(yǎng) 72 h3 h。6.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層 瓊脂培養(yǎng)基（約 4 ml），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按 6.2.1 條件進(jìn)行培養(yǎng)。6.3 菌落計(jì)數(shù)可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units，cfu）表示。6.3.1 選取菌落數(shù)在 30 cfu300 cfu 之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于 30 c

7、fu 的 平板記錄具體菌落數(shù)，大于 300 cfu 的可記錄為多不可計(jì)。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。6.3.2 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋 度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個平板后乘以 2，代表一個平板菌落數(shù)。6.3.3 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計(jì)數(shù)。7 結(jié)果與報(bào)告7.1 菌落總數(shù)的計(jì)算方法7.1.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每 g（ml）樣品中菌落總數(shù)結(jié)

8、果。7.1.2 若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時，按公式（1）計(jì)算: 式中：n樣品中菌落數(shù)c平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n 1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；n 2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；d稀釋因子（第一稀釋度）。示例： 上述數(shù)據(jù)按7.2.2數(shù)字修約后，表示為25000或2.5104。7.1.3 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300 cfu，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.1.4 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30 cfu，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.1.5

9、若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在 30 cfu300 cfu 之間，其中一部分小于 30 cfu 或大于 300 cfu 時，則以最接近 30 cfu 或 300 cfu 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.2 菌落總數(shù)的報(bào)告7.2.1 菌落數(shù)小于 100 cfu 時，按四舍五入原則修約，以整數(shù)報(bào)告。7.2.2 菌落數(shù)大于或等于 100 cfu 時，第 3 位數(shù)字采用四舍五入原則修約后，取前 2 位數(shù)字，后面用 0 代替位數(shù)；也可用 10 的指數(shù)形式來表示，按四舍五入原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。7.

10、2.3 若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。7.2.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。7.2.5 稱重取樣以 cfu/g 為單位報(bào)告，體積取樣以 cfu/ml 為單位報(bào)告。gb 4789.15-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)錄入時間:2010-4-28 9:02:54 來源：國家衛(wèi)生部本標(biāo)準(zhǔn)自實(shí)施之日起代替 gb/t 4789.15-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù) 。 本標(biāo)準(zhǔn)與 gb/t 4789.15-2003 相比，主要修改如下： 修改了范圍； 修改了檢驗(yàn)程序和操作步驟； 修改了培養(yǎng)基和試劑； 修改了設(shè)備和材料； 修改

11、了附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 a為規(guī)范性附錄，附錄 b 為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： gb 4789.15-1984、gb 4789.15-1994、gb/t 4789.15-2003。 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts）的計(jì)數(shù)方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)。2 設(shè)備和材料 除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：2.1 冰箱：25。 2.2 恒溫培養(yǎng)箱： 281。 2.3 均質(zhì)器。 2.4 恒溫振蕩器。 2.5 顯微鏡：10100。 2.6 電子天平：感量 0.1 g。 2.7 無菌錐形瓶:容量

12、 500 ml、250 ml。 2.8 無菌廣口瓶：500 ml。 2.9 無菌吸管：1 ml(具0.01 ml 刻度)、10 ml(具0.1 ml 刻度)。 2.10 無菌平皿：直徑 90 mm。 2.11 無菌試管: 10 mm75 mm。 2.12 無菌牛皮紙袋、塑料袋。3 培養(yǎng)基和試劑3.1 馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基：見附錄 a 中 a.1。 3.2 孟加拉紅培養(yǎng)基：見附錄 a 中 a.2。4 檢驗(yàn)程序 霉菌和酵母計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)程序見圖1。 5 操作步驟5.1 樣品的稀釋 5.1.1 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品至盛有 225 ml 滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為 1:1

13、0 稀釋液?；蚍湃胧⒂?225 ml 無菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 2min，制成 1:10 的樣品勻液。 5.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 ml 樣品至盛有 225 ml 無菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。 5.1.3 取 1 ml 1:10 稀釋液注入含有 9 ml 無菌水的試管中, 另換一支 1 ml 無菌吸管反復(fù)吹吸,此液為 1:100 稀釋液。 5.1.4 按 5.1.3 操作程序，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次 1 ml 無菌吸管。 5.1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)

14、，選擇 2 個3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）， 在進(jìn)行 10 倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取 1 ml 樣品勻液于 2 個無菌平皿內(nèi)。同時分別取 1 ml 樣品稀釋液加入 2 個無菌平皿作空白對照。 5.1.6 及時將 15 ml20 ml 冷卻至 46的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基(可放置于 461恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。5.2 培養(yǎng) 待瓊脂凝固后，將平板倒置，281培養(yǎng) 5d，觀察并記錄。 5.3 菌落計(jì)數(shù) 肉眼觀察，必要時可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（colony forming units，c

15、fu）表示。 選取菌落數(shù)在 10 cfu150 cfu 的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。6 結(jié)果與報(bào)告6.1 計(jì)算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)算。 6.1.2 若所有平板上菌落數(shù)均大于 150 cfu，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多 不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。 6.1.3 若所有平板上菌落數(shù)均小于 10 cfu，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 6.1.4 若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算；如為原液，則以

16、小于 1 計(jì)數(shù)。 6.2 報(bào)告 6.2.1 菌落數(shù)在 100 以內(nèi)時，按四舍五入原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。 6.2.2 菌落數(shù)大于或等于 100 時，前 3 位數(shù)字采用四舍五入原則修約后，取前 2 位數(shù)字，后面用 0 代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用 10 的指數(shù)形式來表示，此時也按四舍五入原則修約，采用兩位有效數(shù)字。 6.2.3 稱重取樣以 cfu/g 為單位報(bào)告，體積取樣以 cfu/ml 為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和/或酵母數(shù)。 gb 4789.3-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)錄入時間:2010-4-28 9:02:54 來源：國家衛(wèi)生部前言本標(biāo)準(zhǔn)代替gb

17、/t 4789.3-2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)。本標(biāo)準(zhǔn)與gb/t 4789.3-2008相比，主要修改如下：修改了標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱；第二法 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法的平板菌落數(shù)的選擇范圍修改為15 cfu150 cfu；刪除了第三法 大腸菌群petrifilm tm測試片法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄a、附錄b為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：gb 4789.3-1984、gb 4789.3-1994、gb /t 4789.3-2003、gb /t 4789.3-2008。食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中大腸菌群（coliforms）計(jì)數(shù)的

18、方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中大腸菌群的計(jì)數(shù)。2 術(shù)語和定義2.1 大腸菌群 coliforms在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。2.2 最可能數(shù) most probable number，mpn基于泊松分布的一種間接計(jì)數(shù)方法。3 設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：3.1 恒溫培養(yǎng)箱：36 1 。3.2 冰箱：2 5 。3.3 恒溫水浴箱：46 1 。3.4 天平：感量 0.1 g。3.5 均質(zhì)器。3.6 振蕩器。3.7 無菌吸管：1 ml（具 0.01 ml 刻度）、10 ml（具 0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸頭。3.

19、8 無菌錐形瓶：容量 500 ml。3.9 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm。3.10 ph 計(jì)或 ph 比色管或精密 ph 試紙。3.11 菌落計(jì)數(shù)器。4 培養(yǎng)基和試劑4.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（lauryl sulfate tryptose，lst）肉湯：見附錄 a 中 a.1。4.2 煌綠乳糖膽鹽（brilliant green lactose bile，bglb）肉湯：見附錄 a 中 a.2。4.3 結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（violet red bile agar，vrba）：見附錄 a 中 a.3。4.4 磷酸鹽緩沖液：見附錄 a 中 a.4。4.5 無菌生理鹽水：見附錄 a 中 a.5

20、。4.6 無菌 1 mol/l naoh：見附錄 a 中 a.6。4.7 無菌 1 mol/l hcl：見附錄 a 中 a.7。 第一法 大腸菌群 mpn 計(jì)數(shù)法5 檢驗(yàn)程序大腸菌群mpn計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)程序見圖1。 圖1 大腸菌群 mpn 計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序6 操作步驟6.1 樣品的稀釋 6.1.1 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品,放入盛有 225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi), 8000 r/min10000 r/min 均質(zhì) 1 min2 min,或放入盛有 225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋 中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min2 min，制成 1:10 的樣品

21、勻液。6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 ml 樣品置盛有 225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶 （瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。6.1.3 樣品勻液的 ph 值應(yīng)在 6.57.5 之間，必要時分別用 1 mol/l naoh 或 1 mol/l hcl 調(diào)節(jié)。 6.1.4 用 1 ml 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 ml，沿管壁緩緩注入 9 ml 磷酸鹽緩沖液 或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用 1 支 1 ml 無菌 吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成 1:100 的樣

22、品勻液。6.1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋 1 次，換用 1 支 1 ml 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過 15 min。6.2 初發(fā)酵試驗(yàn)每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3 管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（lst）肉湯，每管接種1ml（如接種量超過1 ml，則用雙料lst肉湯），36 1 培養(yǎng)24 h2 h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24 h2 h產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，如未產(chǎn)氣則繼續(xù) 培養(yǎng)至48 h2 h，產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。6.3

23、復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 用接種環(huán)從產(chǎn)氣的lst肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（bglb）管中，36 1 培養(yǎng)48 h2 h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽性管。6.4 大腸菌群最可能數(shù)（mpn）的報(bào)告按6.3確證的大腸菌群lst陽性管數(shù)，檢索mpn表（見附錄b），報(bào)告每g（ml）樣品中大腸菌群的 mpn值。第二法 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法 7 檢驗(yàn)程序 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法的檢驗(yàn)程序見圖2。 圖2 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序8 操作步驟8.1 樣品的稀釋按6.1進(jìn)行。8.2 平板計(jì)數(shù)8.2.1 選取2個3個適宜的連續(xù)稀釋度, 每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1 ml。同時取1 ml生理鹽水

24、加入無菌平皿作空白對照。8.2.2 及時將15 ml20 ml冷至46 的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（vrba）約傾注于每個平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3 ml4 mlvrba覆蓋平板表層。翻轉(zhuǎn)平板，置于36 1 培養(yǎng)18 h24 h。8.3 平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在 15 cfu150 cfu 之間的平板，分別計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。 典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為 0.5 mm 或更大。8.4 證實(shí)試驗(yàn)從 vrba 平板上挑取 10 個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于 bglb 肉湯管內(nèi)，36 1 培養(yǎng) 24

25、h48 h，觀察產(chǎn)氣情況。凡 bglb 肉湯管產(chǎn)氣，即可報(bào)告為大腸菌群陽性。8.5 大腸菌群平板計(jì)數(shù)的報(bào)告經(jīng)最后證實(shí)為大腸菌群陽性的試管比例乘以8.3中計(jì)數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每g （ml）樣品中大腸菌群數(shù)。例：10-4 樣品稀釋液1 ml，在vrba平板上有100個典型和可疑菌落，挑取 其中10個接種bglb肉湯管，證實(shí)有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：1006/10104/g（ml）=6.0105 cfu/g（ml）。gb 4789.3-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)錄入時間:2010-4-28 9:02:54 來源：國家衛(wèi)生部前言本標(biāo)準(zhǔn)代替g

26、b/t 4789.3-2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)。本標(biāo)準(zhǔn)與gb/t 4789.3-2008相比，主要修改如下：修改了標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱；第二法 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法的平板菌落數(shù)的選擇范圍修改為15 cfu150 cfu；刪除了第三法 大腸菌群petrifilm tm測試片法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄a、附錄b為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：gb 4789.3-1984、gb 4789.3-1994、gb /t 4789.3-2003、gb /t 4789.3-2008。食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中大腸菌群（coliforms）計(jì)數(shù)

27、的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中大腸菌群的計(jì)數(shù)。2 術(shù)語和定義2.1 大腸菌群 coliforms在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。2.2 最可能數(shù) most probable number，mpn基于泊松分布的一種間接計(jì)數(shù)方法。3 設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：3.1 恒溫培養(yǎng)箱：36 1 。3.2 冰箱：2 5 。3.3 恒溫水浴箱：46 1 。3.4 天平：感量 0.1 g。3.5 均質(zhì)器。3.6 振蕩器。3.7 無菌吸管：1 ml（具 0.01 ml 刻度）、10 ml（具 0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸頭。3

28、.8 無菌錐形瓶：容量 500 ml。3.9 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm。3.10 ph 計(jì)或 ph 比色管或精密 ph 試紙。3.11 菌落計(jì)數(shù)器。4 培養(yǎng)基和試劑4.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（lauryl sulfate tryptose，lst）肉湯：見附錄 a 中 a.1。4.2 煌綠乳糖膽鹽（brilliant green lactose bile，bglb）肉湯：見附錄 a 中 a.2。4.3 結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（violet red bile agar，vrba）：見附錄 a 中 a.3。4.4 磷酸鹽緩沖液：見附錄 a 中 a.4。4.5 無菌生理鹽水：見附錄 a 中 a.

29、5。4.6 無菌 1 mol/l naoh：見附錄 a 中 a.6。4.7 無菌 1 mol/l hcl：見附錄 a 中 a.7。 第一法 大腸菌群 mpn 計(jì)數(shù)法5 檢驗(yàn)程序大腸菌群mpn計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)程序見圖1。 圖1 大腸菌群 mpn 計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序6 操作步驟6.1 樣品的稀釋 6.1.1 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品,放入盛有 225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi), 8000 r/min10000 r/min 均質(zhì) 1 min2 min,或放入盛有 225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋 中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min2 min，制成 1:10 的樣

30、品勻液。6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 ml 樣品置盛有 225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶 （瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。6.1.3 樣品勻液的 ph 值應(yīng)在 6.57.5 之間，必要時分別用 1 mol/l naoh 或 1 mol/l hcl 調(diào)節(jié)。 6.1.4 用 1 ml 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 ml，沿管壁緩緩注入 9 ml 磷酸鹽緩沖液 或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用 1 支 1 ml 無菌 吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成 1:100 的

31、樣品勻液。6.1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋 1 次，換用 1 支 1 ml 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過 15 min。6.2 初發(fā)酵試驗(yàn)每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3 管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（lst）肉湯，每管接種1ml（如接種量超過1 ml，則用雙料lst肉湯），36 1 培養(yǎng)24 h2 h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24 h2 h產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，如未產(chǎn)氣則繼續(xù) 培養(yǎng)至48 h2 h，產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。6.3

32、 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 用接種環(huán)從產(chǎn)氣的lst肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（bglb）管中，36 1 培養(yǎng)48 h2 h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽性管。6.4 大腸菌群最可能數(shù)（mpn）的報(bào)告按6.3確證的大腸菌群lst陽性管數(shù)，檢索mpn表（見附錄b），報(bào)告每g（ml）樣品中大腸菌群的 mpn值。第二法 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法 7 檢驗(yàn)程序 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法的檢驗(yàn)程序見圖2。 圖2 大腸菌群平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序8 操作步驟8.1 樣品的稀釋按6.1進(jìn)行。8.2 平板計(jì)數(shù)8.2.1 選取2個3個適宜的連續(xù)稀釋度, 每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1 ml。同時取1 ml生理鹽

33、水加入無菌平皿作空白對照。8.2.2 及時將15 ml20 ml冷至46 的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（vrba）約傾注于每個平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3 ml4 mlvrba覆蓋平板表層。翻轉(zhuǎn)平板，置于36 1 培養(yǎng)18 h24 h。8.3 平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在 15 cfu150 cfu 之間的平板，分別計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。 典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為 0.5 mm 或更大。8.4 證實(shí)試驗(yàn)從 vrba 平板上挑取 10 個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于 bglb 肉湯管內(nèi)，36 1 培養(yǎng) 24

34、 h48 h，觀察產(chǎn)氣情況。凡 bglb 肉湯管產(chǎn)氣，即可報(bào)告為大腸菌群陽性。8.5 大腸菌群平板計(jì)數(shù)的報(bào)告經(jīng)最后證實(shí)為大腸菌群陽性的試管比例乘以8.3中計(jì)數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每g （ml）樣品中大腸菌群數(shù)。例：10-4 樣品稀釋液1 ml，在vrba平板上有100個典型和可疑菌落，挑取 其中10個接種bglb肉湯管，證實(shí)有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：1006/10104/g（ml）=6.0105 cfu/g（ml）。gb 4789.10-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)錄入時間:2010-4-28 9:02:54 來源：國家衛(wèi)生部前言本

35、標(biāo)準(zhǔn)代替 gb/t 4789.10-2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)和gb/t 4789.37-2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)。 本標(biāo)準(zhǔn)與 gb/t 4789.10-2008 和 gb/t 4789.37-2008 相比，主要修改如下：修改了標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱； 修改了范圍； 規(guī)范了樣品制備過程；增加了計(jì)算公式中系數(shù) 1.1 的解釋； 修改了附錄 a 中胰酪胨大豆肉湯的名稱，規(guī)范為 10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯； 增加了第二法金黃色葡萄球菌 baird-parker 平板計(jì)數(shù)和第三法金黃色葡萄球菌 mpn 計(jì)數(shù)。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 a、附錄 b、附錄 c 是規(guī)范性附錄

36、。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： gb 4789.10-84、gb 4789.10-1994、gb/t 4789.10-2003、gb/t 4789.10-2008。 gb/t 4789.37-2008。食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus）的檢驗(yàn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗(yàn)；第二法適用于金黃色葡萄球菌含量較高的食品中金黃色葡萄球菌的計(jì)數(shù)；第三法適用于金黃色葡萄球菌含量較低而雜菌含量較高的食品中金黃色 葡萄球菌的計(jì)數(shù)。2 設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培

37、養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：2.1 恒溫培養(yǎng)箱：36 1 。 2.2 冰箱：2 5 。 2.3 恒溫水浴箱：37 65 。2.4 天平：感量 0.1 g。 2.5 均質(zhì)器。2.6 振蕩器。2.7 無菌吸管：1 ml（具 0.01 ml 刻度）、10 ml（具 0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸頭。2.8 無菌錐形瓶：容量 100 ml、500 ml。 2.9 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm。 2.10 注射器：0.5 ml。 2.11 ph 計(jì)或 ph 比色管或精密 ph 試紙。 3 培養(yǎng)基和試劑 3.1 10 %氯化鈉胰酪胨大豆肉湯：見附錄 a 中 a.1。 3.2 7.5 %氯化鈉肉湯：

38、見附錄 a 中 a.2。 3.3 血瓊脂平板：見附錄 a 中 a.3。 3.4 baird-parker 瓊脂平板：見附錄 a 中 a.4。3.5 腦心浸出液肉湯(bhi) ：見附錄 a 中 a.5。 3.6 兔血漿：見附錄 a 中 a.6。3.7 稀釋液：磷酸鹽緩沖液：見附錄 a 中 a.7。 3.8 營養(yǎng)瓊脂小斜面：見附錄 a 中 a.8。 3.9 革蘭氏染色液：見附錄 a 中 a.9。 3.10 無菌生理鹽水：見附錄 a 中 a.10。第一法 金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)4 檢驗(yàn)程序 金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)程序見圖1。圖1 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)程序 5 操作步驟5.1 樣品的處理稱取 25 g

39、樣品至盛有 225 ml 7.5 %氯化鈉肉湯或 10 %氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無菌均質(zhì)杯內(nèi)， 8000 r/min10000 r/min 均質(zhì) 1 min2 min，或放入盛有 225 ml 7.5 %氯化鈉肉湯或 10 %氯化鈉胰酪胨 大豆肉湯的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min2 min。若樣品為液態(tài)，吸取 25 ml 樣品至盛有 225 ml 7.5 %氯化鈉肉湯或 10 %氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)可預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠 )中，振蕩混勻。5.2 增菌和分離培養(yǎng)5.2.1 將上述樣品勻液于 36 1 培養(yǎng) 18 h24 h。金黃色葡萄球菌在 7.5%氯化鈉肉湯

40、中呈混濁生 長，污染嚴(yán)重時在 10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯內(nèi)呈混濁生長。 5.2.2 將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到 baird-parker 平板和血平板，血平板 36 1 培養(yǎng) 18 h24 h。 baird-parker 平板 36 1 培養(yǎng) 18 h24 h 或 45 h48 h。 5.2.3 金黃色葡萄球菌在 baird-parker 平板上，菌落直徑為 2 mm3 mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為 淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會遇 到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌 落所產(chǎn)生

41、的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、 金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈。挑取上述菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固 酶試驗(yàn)。5.3 鑒定5.3.1 染色鏡檢：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列呈葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，直徑約為0.5m1m。 5.3.2 血漿凝固酶試驗(yàn)：挑取、baird-parker 平板或血平板上可疑菌落 1 個或以上，分別接種到 5 ml bhi 和營養(yǎng)瓊脂小斜面，36 1 培養(yǎng) 18 h24 h。 取新鮮配置兔血漿 0.5 ml，放入小試管中，再加入 bhi 培養(yǎng)物 0.2 ml0.3 ml，振蕩搖勻，置 3

42、6 1 溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察 6 h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝 塊）或凝固體積大于原體積的一半，被判定為陽性結(jié)果。同時以血漿凝固酶試驗(yàn)陽性和陰性葡萄球菌菌 株的肉湯培養(yǎng)物作為對照。也可用商品化的試劑，按說明書操作，進(jìn)行血漿凝固酶試驗(yàn)。結(jié)果如可疑，挑取營養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到 5 ml bhi，36 1 培養(yǎng) 18 h48 h，重復(fù)試驗(yàn)。5.4 葡萄球菌腸毒素的檢驗(yàn) 可疑食物中毒樣品或產(chǎn)生葡萄球菌腸毒素的金黃色葡萄球菌菌株的鑒定，應(yīng)按附錄b檢測葡萄球菌腸毒素。6 結(jié)果與報(bào)告 6.1 結(jié)果判定：符合 5.2.3、5.3，可判定為金黃色葡萄球菌。6.2 結(jié)果報(bào)告：在

43、25 g（ml）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。第二法 金黃色葡萄球菌 baird-parker平板計(jì)數(shù)7 檢驗(yàn)程序 金黃色葡萄球菌平板計(jì)數(shù)程序見圖2。圖 2 金黃色葡萄球菌 baird-parker 平板法檢驗(yàn)程序8 操作步驟8.1 樣品的稀釋8.1.1 固體和半固體樣品：稱取25 g樣品置盛有225 ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min10000 r/min均質(zhì)1 min2 min，或置盛有225 ml稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成1:10的樣品勻液。8.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25 ml樣品置盛有225 ml磷酸鹽緩

44、沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶 內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。8.1.3 用 1 ml 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 ml，沿管壁緩慢注于盛有 9 ml 稀釋液的無 菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用 1 支 1 ml 無菌吸管反復(fù)吹打使 其混合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。8.1.4 按 8.1.3 操作程序，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次 1 ml 無菌吸管或吸頭。8.2 樣品的接種 根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 2 個3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），

45、在 進(jìn)行 10 倍遞增稀釋時，每個稀釋度分別吸取 1 ml 樣品勻液以 0.3 ml、0.3 ml、0.4 ml 接種量分別加入三塊 baird-parker 平板，然后用無菌 l 棒涂布整個平板，注意不要觸及平板邊緣。使用前，如 baird-parker 平板表面有水珠，可放在 25 50 的培養(yǎng)箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。8.3 培養(yǎng)8.3.1.1 在通常情況下，涂布后，將平板靜置 10 min，如樣液不易吸收，可將平板放在培養(yǎng)箱 36 1 培養(yǎng) 1 h；等樣品勻液吸收后翻轉(zhuǎn)平皿，倒置于培養(yǎng)箱，36 1 培養(yǎng)，45 h48 h。8.4 典型菌落計(jì)數(shù)和確認(rèn)8.4.1 金黃色葡萄球菌在

46、baird-parker 平板上，菌落直徑為 2 mm3 mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為 淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會遇 到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌 落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。8.4.2 選擇有典型的金黃色葡萄球菌菌落的平板，且同一稀釋度 3 個平板所有菌落數(shù)合計(jì)在 20 cfu 200 cfu 之間的平板，計(jì)數(shù)典型菌落數(shù)。如果：a） 如果只有一個稀釋度平板的菌落數(shù)在20 cfu200 cfu之間且有典型菌落，計(jì)數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落；b） 最低稀釋度

47、平板的菌落數(shù)小于 20 cfu 且有典型菌落，計(jì)數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落；c） 某一稀釋度平板的菌落數(shù)大于 200 cfu 且有典型菌落，但下一稀釋度平板上沒有典型菌落，應(yīng)計(jì)數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落；d） 某一稀釋度平板的菌落數(shù)大于 200 cfu 且有典型菌落，且下一稀釋度平板上有典型菌落，但其平板上的菌落數(shù)不在 20 cfu200 cfu 之間，應(yīng)計(jì)數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落；以上按公式（1）計(jì)算。e） 2 個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)均在 20 cfu200 cfu 之間，按公式（2）計(jì)算。8.4.3 從典型菌落中任選 5 個菌落（小于 5 個全選），分別按 5.3.2 做血漿凝固酶試驗(yàn)

48、。9 結(jié)果計(jì)算：公式（1）：t=ab /cd （1）式中： t樣品中金黃色葡萄球菌菌落數(shù)； a某一稀釋度典型菌落的總數(shù)； b某一稀釋度血漿凝固酶陽性的菌落數(shù)； c某一稀釋度用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù)； d稀釋因子。公式（2）： t=(a1b1/c1+a2b2/c2)/1.1d (2) 式中：t 樣品中金黃色葡萄球菌菌落數(shù)；a1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）典型菌落的總數(shù)； a2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）典型菌落的總數(shù)； b1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）血漿凝固酶陽性的菌落數(shù)；b2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）血漿凝固酶陽性的菌落數(shù)； c1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù)； c2第二稀釋度（高稀

49、釋倍數(shù)）用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù)； 1.1計(jì)算系數(shù)；d 稀釋因子（第一稀釋度）。10 結(jié)果與報(bào)告根據(jù)baird-parker平板上金黃色葡萄球菌的典型菌落數(shù)，按9中公式計(jì)算，報(bào)告每g（ml）樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)，以cfu/g(ml)表示；如t值為0，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告。第三法 金黃色葡萄球菌mpn計(jì)數(shù)11 檢驗(yàn)程序 金黃色葡萄球菌mpn計(jì)數(shù)程序見圖3。圖3 金黃色葡萄球菌mpn法檢驗(yàn)程序12 操作步驟12.1 樣品的稀釋 按8.1進(jìn)行。12.2 接種和培養(yǎng) 12.2.1 根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn) 行 10 倍遞增稀釋

50、時，每個稀釋度分別吸取 1 ml 樣品勻液接種到 10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯管，每個稀 釋度接種 3 管，將上述接種物于 36 1 培養(yǎng) 45 h48 h。12.2.2 用接種環(huán)從有細(xì)菌生長的各管中，移取 1 環(huán)，分別接種 baird-parker 平板，36 1 培養(yǎng) 45 h48 h。12.3 典型菌落確認(rèn) 12.3.1 見 8.4.1。 12.3.2 從典型菌落中至少挑取 1 個菌落接種到 bhi 肉湯和營養(yǎng)瓊脂斜面，36 1 培養(yǎng) 18 h24 h。進(jìn)行血漿凝固酶試驗(yàn)，見 5.3.2。13 結(jié)果與報(bào)告 計(jì)算血漿凝固酶試驗(yàn)陽性菌落對應(yīng)的管數(shù)，查 mpn 檢索表（見附錄 c），報(bào)告每 g(

51、ml)樣品中金黃色葡萄球菌的最可能數(shù)，以 mpn/g（ml）表示。gb 4789.18-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 乳與乳制品檢驗(yàn)錄入時間:2010-4-28 9:02:54 來源：國家衛(wèi)生部本標(biāo)準(zhǔn)代替 gb/t 4789.18-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 乳與乳制品檢驗(yàn) 。 本標(biāo)準(zhǔn)與gb/t 4789.18-2003相比，主要變化如下： 修改了標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱； 修改了“范圍”和“規(guī)范性引用文件” ； 修改了采樣方案和各類乳制品的處理方法。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替的歷次版本發(fā)布情況為： gb 4789.18-1984、gb 4789.18-1994、gb/t 4789.18-200

52、3。1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于乳與乳制品的微生物學(xué)檢驗(yàn)。2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3 設(shè)備和材料 3.1 采樣工具 采樣工具應(yīng)使用不銹鋼或其他強(qiáng)度適當(dāng)?shù)牟牧希砻婀饣?，無縫隙，邊角圓潤。采樣工具應(yīng)清洗和滅菌，使用前保持干燥。采樣工具包括攪拌器具、采樣勺、匙、切割絲、刀具（小刀或抹刀）、采樣鉆等。 3.2 樣品容器 樣品容器的材料（如玻璃、不銹鋼、塑料等）和結(jié)構(gòu)應(yīng)能充分保證樣品的原有狀態(tài)。容器和蓋子應(yīng)清潔、無菌、干燥。樣品容器應(yīng)有足夠的體積

53、，使樣品可在測試前充分混勻。樣品容器包括采樣袋、采樣管、采樣瓶等。 3.3 其他用品 包括溫度計(jì)、鋁箔、封口膜、記號筆、采樣登記表等。 3.4 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)用品 3.4.1 常規(guī)檢驗(yàn)用品按 gb 4789.1 執(zhí)行。 3.4.2 微生物指標(biāo)菌檢驗(yàn)分別按 gb 4789.2、gb 4789.3、gb 4789.15 執(zhí)行。 3.4.3 致病菌檢驗(yàn)分別按 gb 4789.4、gb 4789.10、gb 4789.30 和 gb 4789.40 執(zhí)行。 3.4.4 雙歧桿菌和乳酸菌檢驗(yàn)分別按 gb/t 4789.34、gb 4789.35 執(zhí)行。4 采樣方案 樣品應(yīng)當(dāng)具有代表性。采樣過程采用無菌操作，

54、采樣方法和采樣數(shù)量應(yīng)根據(jù)具體產(chǎn)品的特點(diǎn)和產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求執(zhí)行。樣品在保存和運(yùn)輸?shù)倪^程中，應(yīng)采取必要的措施防止樣品中原有微生物的數(shù)量變化，保持樣品的原有狀態(tài)。 4.1 生乳的采樣 4.1.1 樣品應(yīng)充分?jǐn)嚢杌靹?，混勻后?yīng)立即取樣，用無菌采樣工具分別從相同批次（此處特指單體的貯奶罐或貯奶車）中采集 n 個樣品，采樣量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的要求。 4.1.2 具有分隔區(qū)域的貯奶裝置，應(yīng)根據(jù)每個分隔區(qū)域內(nèi)貯奶量的不同，按比例從中采集一定量經(jīng)混合均勻的代表性樣品，將上述奶樣混合均勻采樣。 4.2 液態(tài)乳制品的采樣 適用于巴氏殺菌乳、發(fā)酵乳、滅菌乳、調(diào)制乳等。取相同批次最小零售原包裝，每批至少取 n 件。 4

55、.3 半固態(tài)乳制品的采樣 4.3.1 煉乳的采樣 適用于淡煉乳、加糖煉乳、調(diào)制煉乳等。 4.3.1.1 原包裝小于或等于 500 g（ml）的制品：取相同批次的最小零售原包裝，每批至少取 n 件。采樣量不小于 5 倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品。 4.3.1.2 原包裝大于 500 g（ml）的制品（再加工產(chǎn)品，進(jìn)出口）：采樣前應(yīng)搖動或使用攪拌器攪拌，使其達(dá)到均勻后采樣。如果樣品無法進(jìn)行均勻混合，就從樣品容器中的各個部位取代表性樣。采樣量不小于 5 倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品。 4.3.2 奶油及其制品的采樣 適用于稀奶油、奶油、無水奶油等。 4.3.2.1 原包裝小于或等于 1000 g（ml）的制品：

56、取相同批次的最小零售原包裝，采樣量不小于 5 倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品。4.3.2.2 原包裝大于 1000 g（ml）的制品：采樣前應(yīng)搖動或使用攪拌器攪拌，使其達(dá)到均勻后采樣。對于固態(tài)制品，用無菌抹刀除去表層產(chǎn)品，厚度不少于 5 mm。將潔凈、干燥的采樣鉆沿包裝容器切口方向往下，勻速穿入底部。當(dāng)采樣鉆到達(dá)容器底部時，將采樣鉆旋轉(zhuǎn) 180，抽出采樣鉆并將采集的樣品轉(zhuǎn)入樣品容器。采樣量不小于 5 倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品。 4.4 固態(tài)乳制品采樣 適用于干酪、再制干酪、乳粉、乳清粉、乳糖和酪乳粉等。 4.4.1 干酪與再制干酪的采樣 4.4.1.1 原包裝小于或等于 500 g 的制品：取相同批次的最小零售原包裝，采樣量不小于 5 倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品。 4.4.1.2 原包裝大于 500 g 的制品：根據(jù)干酪的形狀和類型，可分別使用下列方法：（1）在距邊緣不小于 10 cm 處，把取樣器向干酪中心斜插到一個平表面，進(jìn)行一次或幾次。（2）把取樣器垂直插入一個面，并穿過干酪中心到對面。（3）從兩個平面之間，將取樣器水平插入干酪的豎直面，插向干酪中心。（4）若干酪是裝在桶、箱或其它大容器中，或是將干酪制成壓緊的大塊時，將取樣器從容器頂斜穿到底進(jìn)行采樣。采樣量不小于 5 倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品。 4.