安捷倫HPLC1260操作流程

1、 儀器的組成 操作前準(zhǔn)備 開機(jī)及關(guān)機(jī) 工作站使用 數(shù)據(jù)分析 注意事項 主體 安捷倫1260HPLC 流動相瓶、四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、 二極管陣列檢測器 附件 電腦、顯示器、打印機(jī)等 安捷倫安捷倫1260HPLC1260HPLC 流動相瓶 四元泵 自動進(jìn)樣器 柱溫箱 二極管陣列檢測器 四元泵 自動進(jìn)樣器 柱溫箱 二極管陣列 檢測器 排氣閥 流動 相瓶 電源開關(guān) 指示燈 色譜柱色譜柱 流動相選擇 流動相過濾 流動相超聲與脫氣 流動相冷卻 流動相選擇 分類：組成分-單組分和多組分 極性-極性、弱極性、非極性 常用溶劑：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、 四氯化碳等 （溶劑最好為HPLC級，水為超

2、純水） 其中多采用二元或多元組合溶劑作為流動相， 通過調(diào)節(jié)各組分的比例改變流動相的極性，已 達(dá)到最佳的分離效果，對于部分情況還可以加 入緩沖鹽，調(diào)節(jié)出峰時間和達(dá)到改善峰型的效 果。 流動相過濾 為了除去流動相中的雜質(zhì),保護(hù)系統(tǒng)和色譜 柱，在流動相使用完后，裝入新的溶劑前應(yīng)使 用抽濾瓶對溶劑進(jìn)行過濾。 濾膜 濾膜：有機(jī)膜和水 系膜，二者不能混 用。一般HPLC流 動相過濾使用孔徑 為0.45m的濾膜。 針對混合溶劑首選 有機(jī)濾膜過濾。 流動相超聲與脫氣 為了除去溶解在流動相中得氣泡,降低基線 噪音，在HPLC開機(jī)前應(yīng)把各溶劑瓶在超聲機(jī)中 超聲30min左右。 對于溶解在流動 相中的極微氣體，安

3、捷倫1260HPLC四元 泵中集合了脫氣機(jī)， 可以進(jìn)一步對混合后 的流動相進(jìn)行脫氣處 理。 流動相冷卻 流動相在超聲機(jī)中長時間超聲后，由于水 分子振動摩擦，使水溫上升，因此流動相瓶中 的溶劑也會被加熱。加熱后的流動相進(jìn)入液相 系統(tǒng)和色譜柱后，會影響基線噪聲的增加，使 平穩(wěn)時間延長。 1260HPLC及化學(xué)工作站開機(jī)使用與關(guān)機(jī) 打開計算機(jī)打開主機(jī)電源點擊儀器1聯(lián)機(jī)進(jìn)入工作站 排氣（A/B/C/D）調(diào)節(jié)流速與流動相比例關(guān)閉排氣閥 打開柱溫箱逐步增大流速檢查壓力穩(wěn)定后打開檢測器 跑基線穩(wěn)定后清洗針與管路樣品命名 進(jìn)樣檢測保存數(shù)據(jù)沖洗管路及關(guān)機(jī) 關(guān)機(jī)前，用90%水沖洗柱子和系統(tǒng)0.5-1小時， 流量1

4、.0mL/min，再用100%有機(jī)溶劑（甲醇） 沖0.5小時，然后保存方法和儀器設(shè)置。 退出化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計算機(jī)。 關(guān)掉液相主機(jī)各模塊電源開關(guān)，拔掉電源插頭。 做好儀器使用登記。 進(jìn)入工作站 主界面 方法和各模塊參數(shù)設(shè)置 跑基線 樣品命名與進(jìn)樣檢測 進(jìn)入工作站 主 界 面 方 法 和 各 模 塊 參 數(shù) 設(shè) 置 在各模塊中 空白處點擊 右鍵，選擇 “方法”編 輯參數(shù)。 1bar14.5psi0.1MPa=100kPa 不同儀器單位不同 視圖在線信號信號窗口1 跑基線 至少平穩(wěn)至少平穩(wěn)30min 單次樣品：樣品命名 序列樣品：命名與序 列表設(shè)置 進(jìn) 樣 檢 測 樣品色譜圖 進(jìn)入儀器

5、1脫機(jī) 打開數(shù)據(jù)文件夾 打開樣品色譜圖 色譜峰編輯 色譜峰數(shù)據(jù) 打印報告 色譜峰實例 打開儀器1脫機(jī) 數(shù)據(jù)文件夾 序列樣品數(shù)據(jù) 單次樣品數(shù)據(jù) 樣品數(shù)據(jù)樣品數(shù)據(jù) 色譜圖色譜圖 色譜圖編輯 色譜峰 數(shù)據(jù) 色譜峰手動積分 報告打印報告 主峰數(shù)據(jù) 主峰要求： 分離度1.5 0.95對稱因子 1.05 塔板數(shù)8000以上 min5101520 mAU 0 10 20 30 40 50 60 70 80 *DAD1 A, Sig=248,4 Ref=off (VPA-TDM-2VPA-SCJ 2015-03-24 11-31-16VPA-20150324001.D) 1 2 患者患者丙戊酸鈉血藥濃度檢測丙

6、戊酸鈉血藥濃度檢測色譜圖色譜圖 環(huán)己烷羧酸 丙戊酸鈉 min5101520 mAU 0 10 20 30 40 50 60 70 80 *DAD1 A, Sig=248,4 Ref=off (VPA-TDM-2VPA-SCJ 2015-04-01 11-36-49VPA-20150401005.D) min05101520 mAU 0 10 20 30 40 50 60 70 80 *DAD1 A, Sig=248,4 Ref=off (VPA-TDM-2VPA-SCJ 2015-04-01 11-36-49VPA-20150401008.D) 1 2 空白 標(biāo)準(zhǔn)品 色譜峰實例色譜峰實例 氘燈是易耗品，分析前應(yīng)最后開燈，不分析樣 品應(yīng)及時關(guān)閉氘燈； 流動相不要使用多日存放的蒸餾水，一般不易 超過三天（易長菌），影響基線平衡； 儀器使用后，應(yīng)用90%水沖洗柱子和系統(tǒng)0.5-1h， 流量1.0mL/min，再用100甲醇沖洗0.5h； 開機(jī)時，打開排氣閥，設(shè)置流動相為100%水， 泵流量5.0mL/min