【doc】猴頭菌液體培養(yǎng)復(fù)因子篩選

1、猴頭菌液體培養(yǎng)復(fù)因子篩選中國(guó)食用蘺ediblefung1ofchinavo1.10,no.3猴頭菌液體培養(yǎng)復(fù)因子篩選喬德生李紹木呂翠蘭趙洪斌吳甲初解思泌張長(zhǎng)鎧(山東惠民地區(qū)農(nóng)科所256615)(山東農(nóng)科院濟(jì)南)(山東大學(xué)濟(jì)南)自t0yew于1968年發(fā)明了在液體培養(yǎng)基質(zhì)里培養(yǎng)真菌菌絲體的技術(shù)以來(lái),食用菌的液體培養(yǎng)發(fā)展很快,其用途越來(lái)越廣泛.但名貴食用菌猴頭的復(fù)因子液體培養(yǎng),未見(jiàn)報(bào)道.為探討影響猴頭菌敞體培養(yǎng)產(chǎn)量的主要因子和篩選高產(chǎn)組合,擬采用正交試驗(yàn).已獲得了培養(yǎng)8天,生物量占菌液32.95%的高產(chǎn)組合.現(xiàn)匯綜如下t一,材料與方法(一)培養(yǎng)基.斜面培養(yǎng)基為pda另加0.5%的蛋白胨,ph6.5

2、.搖瓶培養(yǎng)基.a1玉米粉2%,a2黃豆粉2%,a3玉米粉,黃豆粉各1%混合,a4麩皮5%,均過(guò)60目篩.輔料皆為葡萄糖2%,蛋白胨o.2%,酵母粉0.2oi,kh2po40.15%.mgsol0.075%.(二)試驗(yàn)設(shè)計(jì):按混合水平l8(4x2)設(shè)計(jì)四水平一因素及二水平三因素試驗(yàn).8個(gè)組合,兩次重復(fù),隨機(jī)置于wdp型微生物多用培養(yǎng)箱搖求內(nèi)培養(yǎng).因素水平見(jiàn)1.表1試驗(yàn)因素及水平表水j3d索abcd培養(yǎng)疑菌種接種量(m1)pha1a2a3a4b1b2c1(1o)c2(5)d1(7?0)d2(5.0):l引j中國(guó)扳科院土肥所b2引自黑龍江黑河農(nóng)科所(三)培養(yǎng)條件:搖瓶培養(yǎng)基各主料均煮沸3o鐘.6層紗

3、布過(guò)濾,取濾液補(bǔ)足水加輔料,按設(shè)計(jì)調(diào)ph,搖瓶培養(yǎng)基裝量150ml/500ml,6層紗布封口,1.2kg/cm壓力滅菌3o分鐘.選優(yōu)良猴頭斜面母種,在無(wú)菌條件下刮取菌苔和少量培養(yǎng)基,每支用10ml無(wú)菌水制成菌懸液,搖勻后照設(shè)計(jì)接種.爾后恒溫穗置24小時(shí),搖床轉(zhuǎn)速為180rpm,t=250.5,培養(yǎng)192小時(shí)取樣.(四)測(cè)定方法:菌球密度的測(cè)定:用擴(kuò)口式大吸管吸取5ml菌液注入內(nèi)徑為9.3cm的培養(yǎng)皿內(nèi),加等量水搖勻.皿下放一張劃有若干紅色0.25cm方格的黑色底紙,置雙目解剖鏡下統(tǒng)計(jì),梅花形五點(diǎn)取樣,每點(diǎn)四格,n為2o格菌球數(shù),按2.718n求取菌球密度,測(cè)量四次取平均值.同時(shí)用1/2mm測(cè)尺

4、測(cè)量菌球直徑,方法同前.生物量測(cè)定:吸取10ml均勻菌液,置3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,得濕重,再于105烘至恒重,用千分之一天平稱(chēng)千重,生物量皆為兩次測(cè)定結(jié)果的平均值.以各試驗(yàn)菌球密度,濕墼的最大值分別為5o分,則y=(組合菌球密度/同次試驗(yàn)最大密度+組合濕重/同次試驗(yàn)最大濕重)50,綜合評(píng)分.y值大產(chǎn)量高.(五)驗(yàn)證試驗(yàn).選正交試驗(yàn)直觀分析結(jié)果r值最大的a因素的四種培養(yǎng)基,分別和k值較大的菌種b2,接種量c1,ph值d2組成理論新組合,重復(fù)三次,隨機(jī)排列.二,試驗(yàn)結(jié)果(一)試驗(yàn)因素主次分析;從表2直觀分析中看出,四因素極差r值均大于re值,表明試驗(yàn)結(jié)果可靠.而且a因素r值為46.17,顯著

5、大于其他三因素b,c,d的r值,說(shuō)明因素a在猴頭液體培養(yǎng)中效應(yīng)最大,對(duì)猴頭產(chǎn)量影響起主要作用.其主次順序?yàn)橐蛩豠>b>c>d.(=)試驗(yàn)組合培養(yǎng)觀察.試驗(yàn)得知,培養(yǎng)192小時(shí),a2,a3,al三種培養(yǎng)基組合均表現(xiàn)菌液粘稠,黃棕色,均勻,滿布菌球,菌球顏色較醪液色淺,芳香味濃郁,ph降至3.84.4.而培養(yǎng)基at雖滿布菌球,但菌液清稀,粘度差,顏色較前三種淺,ph值降至4.35.1,較aha3,a4微高.四種培養(yǎng)基較培養(yǎng)前菌液顏色均變深.但培養(yǎng)前ph值為7.o的其菌液顏色又均深于ph值為5.o的顏色,從直觀分析結(jié)果中(表2)看出,麩皮培養(yǎng)基al菌球直徑大,密度高,菌絲生物量重,

6、同玉米培養(yǎng)基a-相比差異明顯.表明猴頭菌在液體培養(yǎng)中適當(dāng)營(yíng)養(yǎng)對(duì)產(chǎn)量影響顯著.(三)直觀分析:從表2得知,各因素中最大的水平為a4=88.62(a2為86.82),b2=80.461=79.46,d2=78.86,所以本次試驗(yàn)表明,猴頭菌液體培養(yǎng)的高產(chǎn)組合應(yīng)是a,b2,c和d2,其次是a22,c1和d:組合.其他因子結(jié)果關(guān)系詳見(jiàn)圖示.第10卷第3期中國(guó)食用菌edibiefungiofchina表2l8(42)正交表猴頭液體培養(yǎng)結(jié)果直觀分析因素組abcde隨籮直徑菌球密度濕xs干重y(ram)!延堡!g11l1111110.40.084.791.1540.08203.4733.9133?69212

7、2220.40.085352.1920.14752.475o.0051?243211220.4土0.0713863.0770.16692.7094?4903?604222110.4土0.0713002.3730.13278.0182.0980?c55312120.40.0811112.2570.11972.2471.4971.876321210140.0813722.9980.158g1.019208701?947412210.50.0912202.4610.15i79.9277.3978.66842l12054-00814523.2590.20598.1693.c58?6142.4669.5

8、479.4671.0571.08k86.8280.4670?4578?8678?8381.9088.63r46.1711.0i9.0i7.8i7?76嘲囊對(duì)嘏叢生長(zhǎng)t的彩喃(四)組合問(wèn)差異顯著性測(cè)驗(yàn):表3中組合間差異顯著性測(cè)驗(yàn)表明,以第8號(hào)組合為最優(yōu),產(chǎn)量最高.其次是第3號(hào)組合.第8號(hào)組合由培養(yǎng)基a.菌種bz,接種量c1,ph值d.組成.這同直觀分析結(jié)果相比除d因素不同外,其他完全一致,也表明ph值在猴頭液體培養(yǎng)r1對(duì)產(chǎn)量影響不是主要因素.因此可用試驗(yàn)最佳ph值dz配成新高產(chǎn)組合.其他組合詳見(jiàn)表3.表5組合差異顯著性測(cè)驗(yàn)注:s=1.1336表4方差分析表水平xa4a2a3a188.6386.8

9、281.e042.46顯著性0.050.01aabc注:s=0?80j6(五)方差分祈及a因素測(cè)驗(yàn),從表4中看出,正交試驗(yàn)中因素a,b,c,d的f值均大于fo.0l值,表明四因素水平問(wèn)的差異均達(dá)極顯著.因素a有四個(gè)水平,故再進(jìn)一步比較.表5表明培養(yǎng)基a.,a2兩水平較優(yōu)與a3,al呈極顯著差異.這同直觀分析是一致的.表明在液體培養(yǎng)中a.,az是適合猴頭生長(zhǎng)的培養(yǎng)基.它對(duì)生物量的提高起著重要作用.另則菌種b2,接種量c1,phd2分別極顯著優(yōu)于b1c2d2,因此方差分析所得高產(chǎn)組合仍是a4bzc1和d2,其次是a4b2c1d2.(六)驗(yàn)證試驗(yàn)分析.把三次霓復(fù)試驗(yàn)結(jié)果取平均數(shù)列入表6,按其產(chǎn)量出高

10、到低排列位次.從表六中看出,驗(yàn)證試驗(yàn)的菌球密度,菌球工徑部干,濕重等指標(biāo)均同正交試驗(yàn)結(jié)果趨向一致,且平22中國(guó)食用菌ediblefiing!ofchinavo1.10.no.3木屑栽培香菇高產(chǎn)技術(shù)研究陳秀炳(稿建省尤溪林業(yè)科學(xué)研究所)劉葉高(福建省尤溟縣食用茁開(kāi)發(fā)辦公室)摘要本文對(duì)木屑栽培香菇優(yōu)質(zhì),高產(chǎn),穩(wěn)產(chǎn)技術(shù)進(jìn)行初步研究,得出l(1)cr20,cro4,l26,0.87,l7等五個(gè)菌株是木屑栽培香菇高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的苗抹;(2)以問(wèn)葉樹(shù)木屑76,麥皮2o,蔗糖1.5%,碳酸鈣2%,過(guò)磷酸鈣0.2,尿素0.3%為較佳配方,生物效率高速15o%;(3)裝袋前培養(yǎng)料先堆剞發(fā)酵處理是控制污染的最有效方法;

11、(4)茵袋噴施濃度25ppmfi檸檬酸,10ppm的三干烷醇,20ppm赤霉素溶液,能促進(jìn)香菇子實(shí)體原基分化,增產(chǎn)效果顯著.近年來(lái),福建省在實(shí)施星火計(jì)劃中,把發(fā)展木屑袋栽香菇作為主要的項(xiàng)目來(lái)抓.但由于袋栽香菇歷史較短,經(jīng)驗(yàn)不足,特別是如何根據(jù)香菇的生物學(xué)特性進(jìn)行科學(xué)管理,缺乏一整套相應(yīng)的技術(shù),表現(xiàn)在產(chǎn)量上的變幅較大,每袋產(chǎn)鮮菇0.251.5公斤不等(生物學(xué)效率在25-100%).為了提高栽培技術(shù).推動(dòng)香菇生產(chǎn)的進(jìn)一步發(fā)展,筆者對(duì)木屑栽培香菇中高產(chǎn)技術(shù)問(wèn)題進(jìn)行了一些初步的研究,現(xiàn)報(bào)告如下.一,材料與方法(一)供試蓖株:cr20,cr04,l26,l7,087,cr02.(二)培養(yǎng)基組成,(1)母

12、種培養(yǎng)基pda,(2)原種培養(yǎng)基常規(guī),即培養(yǎng)基配方一i(3)袋栽培養(yǎng)料配方設(shè)計(jì)(表1).(三)雜菌防治試驗(yàn):先將配方額定木屑與麥皮加水拌勻,料水比為1:1.2.堆積發(fā)酵,待溫度升到6o后,再翻堆發(fā)酵,連繼翻堆2次,使發(fā)酵均勻,溫度下降56后,加適量糖和碳酸鈣并調(diào)節(jié)水和ph值后立即裝袋.并且對(duì)發(fā)酵前后的培養(yǎng)成分進(jìn)行測(cè)定,其測(cè)定方法按常規(guī)分析法,ca,k,mg用子吸收光譜法.(四)激素增產(chǎn)試驗(yàn);選用25ppm檸檬酸,loppm三十烷醇和20ppm赤霉素,對(duì)香菇噴施.設(shè)3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)5o袋,共15o袋,用清水作對(duì)照.htj,噴壺每個(gè)理每次噴1000ppm,每次噴灑3天后開(kāi)始澆水管理.每收完一潮菇

13、后讓菌袋干燥一周左右,然后在消水中浸泡24小時(shí),又分剖重復(fù)噴琺同等量!鹼法.表1培養(yǎng)基不同配方設(shè)計(jì)培養(yǎng)基干料組成(%)配方木屑麥皮蔗糖尿素碳酸鈣過(guò)磷酸鈣(2ii)試驗(yàn)設(shè)置:分為菌株篩選,培養(yǎng)基配方組合,雜菌防治和采用激素提高出菇產(chǎn)量四個(gè)步驟進(jìn)行.二,試驗(yàn)結(jié)果一一(一)菌株篩選試驗(yàn):從1986年開(kāi)始,先后從各地引進(jìn)1o個(gè)袋栽香菇優(yōu)良菌株,經(jīng)過(guò)初篩后,選出6個(gè)菌株在木屑培養(yǎng)基上進(jìn)行生產(chǎn)性能比較試驗(yàn).1.各菌株菌絲生長(zhǎng)情況比較.采用等量的斜面培養(yǎng)基,常規(guī)木屑袋栽培養(yǎng)基(配方1),常規(guī)操作.試驗(yàn)結(jié)果cr20菌株的菌絲生長(zhǎng)抗雜力優(yōu)于其他菌株,在pda培養(yǎng)基上,cr20菌株9天滿管,而其他菌株要1o一13天.原種的長(zhǎng)勢(shì)也強(qiáng)于其他菌株,菌絲粗壯潔白,抗雜能力強(qiáng).2.各菌株產(chǎn)量比較;各菌棟原種長(zhǎng)滿瓶后約7均產(chǎn)量(高于正交試驗(yàn)結(jié)果.證明正交試毪可靠.各組合位次也表明麩皮培養(yǎng)基組合(a4b2cld2)最好,其次是黃豆粉培養(yǎng)基組合(a2b2cld2),玉米粉培養(yǎng)基組合較差.這同正交試驗(yàn)結(jié)果是一致的.表6驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表(重復(fù)三次)培養(yǎng)基菌球密度菌球直徑濕重千重一位(a)(個(gè)/m1)叉s(mm)(g/lom1)(g/m1)三,小結(jié)與討論猴頭液體培養(yǎng)中,培養(yǎng)基,菌種,接種量ph值適當(dāng)時(shí),對(duì)產(chǎn)量影響均有顯著促進(jìn)作用.在選定適宜猴頭生長(zhǎng)的培養(yǎng)基后,選接優(yōu)良菌株和加大接種量對(duì)提