無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查

1、重大出生缺陷無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查重大出生缺陷無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查 內(nèi)容提要內(nèi)容提要 常見染色體疾病概述常見染色體疾病概述 染色體非整倍體病發(fā)病機(jī)理染色體非整倍體病發(fā)病機(jī)理 傳統(tǒng)產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)介紹傳統(tǒng)產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)介紹 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前項(xiàng)目工作流程無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前項(xiàng)目工作流程 四 一 二 三 一、染色體非整倍體概述（唐氏綜合征為例一、染色體非整倍體概述（唐氏綜合征為例 ） BRCA1 7世紀(jì) 考古學(xué)家挖掘出考古學(xué)家挖掘出 典型唐氏綜合征典型唐氏綜合征 體征顱骨。體征顱骨。 素描畫中見到具素描畫中見到具 有唐氏綜合征樣有唐氏綜合征樣 面容的兒童。面容的兒童。 John Langdon John Langdon D D o

2、wn own 醫(yī)生第一次對(duì)醫(yī)生第一次對(duì) 唐氏綜合征的典型唐氏綜合征的典型 體征進(jìn)行完整的描體征進(jìn)行完整的描 述并發(fā)表述并發(fā)表。 Downs syndromeDowns syndrome. . 法國(guó)遺傳學(xué)家法國(guó)遺傳學(xué)家 (Jerome LeJeune)(Jerome LeJeune) 發(fā)現(xiàn)唐氏綜合征發(fā)現(xiàn)唐氏綜合征 是由人體的是由人體的第第2121 號(hào)染色體的三體號(hào)染色體的三體 變異變異造成的現(xiàn)象。造成的現(xiàn)象。16世紀(jì) 18661866年年 19591959年年 染色體非整倍體疾病臨床表現(xiàn)染色體非整倍體疾病臨床表現(xiàn) 21、18、13-三體綜合征是人類最常見的三種染色 體疾病，患兒面容特殊，絕大多數(shù)

3、為嚴(yán)重智力障 礙及器官畸形，對(duì)家庭和社會(huì)造成巨大危害和負(fù) 擔(dān)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)胎兒染色體疾病尚無(wú)有效治療方 法，最好的方法是在孕期通過(guò)產(chǎn)前篩查及診斷， 發(fā)現(xiàn)異常并及時(shí)采取相應(yīng)措施 21三體核型分析圖三體核型分析圖 21三體形成原因三體形成原因 21三體發(fā)病率與產(chǎn)婦年齡關(guān)系三體發(fā)病率與產(chǎn)婦年齡關(guān)系 三、現(xiàn)有的產(chǎn)前篩查與診斷手段三、現(xiàn)有的產(chǎn)前篩查與診斷手段 l 產(chǎn)前篩查產(chǎn)前篩查 母血清學(xué)篩查母血清學(xué)篩查 頸項(xiàng)透明膜厚度篩查頸項(xiàng)透明膜厚度篩查 l 產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷 羊水穿刺羊水穿刺 絨毛取樣絨毛取樣 臍靜脈穿刺臍靜脈穿刺 風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算 侵入性診斷方式侵入性診斷方式 傳統(tǒng)篩查方式的缺陷傳統(tǒng)篩查方式的缺陷

4、 產(chǎn)前篩查（S） 100,000 篩查結(jié)果陽(yáng)性 （SP）7,000 篩查結(jié)果陰性 （SN）93,000 唐氏綜合征胎兒 400 真陽(yáng)性 （TSP） 340 假陰性 （FSN） 60 非唐氏綜合征胎兒 99,600 假陽(yáng)性（FSP） 6,660 真陰性 （TSN） 92,940 英國(guó)的統(tǒng)計(jì)顯示，英國(guó)的統(tǒng)計(jì)顯示，1996-2002年全國(guó)因羊水穿刺導(dǎo)致的抬兒流失數(shù)為年全國(guó)因羊水穿刺導(dǎo)致的抬兒流失數(shù)為 5619名名 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)篩技術(shù)原理的提出無(wú)創(chuàng)產(chǎn)篩技術(shù)原理的提出 胎兒胎兒DNADNA來(lái)源和特點(diǎn)來(lái)源和特點(diǎn) 來(lái)源：來(lái)源： 1 胎兒細(xì)胞通過(guò)胎盤滲透到母血中，被 母體免疫系統(tǒng)破壞，胎兒DNA殘留下來(lái)； 2 胎兒

5、細(xì)胞凋亡； 3 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的凋亡 基本特點(diǎn)：基本特點(diǎn)： 1 含量有一定的變化規(guī)律。妊娠第4周開 始可檢出胎兒游離DNA，隨著孕周增加而 增加，存在個(gè)體差異，平均濃度。 2 分娩后短時(shí)間內(nèi)消失，平均半衰期為 16.3min (4-30min)， 2h就無(wú)法檢出。 再次妊娠不影響檢測(cè)結(jié)果。 3 DNA片段較小，平均166bp左右。常規(guī) 技術(shù)很難檢測(cè) 母體和胎 兒 的混合物 Unique reads (單一序列讀單一序列讀 取取 ）: no mismatch, one location 母血漿母血漿DNA+DNA+高通量測(cè)序高通量測(cè)序 以21-三體為例：100 DNA單位 /毫升血漿。其中，95

6、個(gè)單位來(lái)源于母親， 5個(gè)單位來(lái)源于胎兒 母親母親 Chr 21Chr 21： 95952=1902=190 正常胎兒正常胎兒 Chr 21Chr 21： 5 52=102=10 母體外周血中母體外周血中 Chr 21=190+10=200Chr 21=190+10=200 21-21-三體胎兒三體胎兒 Chr 21 Chr 21： 5 53=153=15 母親母親 Chr 21Chr 21： 95952=1902=190 母體外周血中母體外周血中 Chr 21=Chr 21=190+190+15=20515=205 通過(guò)大規(guī)模并行測(cè)序，獲得分布在每條染色體上的真實(shí)的核酸片段數(shù)通過(guò)大規(guī)模并行測(cè)序

7、，獲得分布在每條染色體上的真實(shí)的核酸片段數(shù) 量，經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)與比較：量，經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)與比較： 正常胎兒正常胎兒 或者或者 21-21-三體胎兒三體胎兒 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)流程無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)流程 醫(yī)醫(yī) 院院 楓林龍鼎實(shí)驗(yàn)室 楓林龍鼎實(shí)驗(yàn)室 10-13.510-13.5周周 早孕期篩查早孕期篩查( (檢出率檢出率85%85%)中孕期篩查中孕期篩查 (檢出率檢出率81%) 15-2015-20周周 16-2216-22周周 羊水穿刺羊水穿刺 （流產(chǎn)率（流產(chǎn)率0.5-1%0.5-1%） 24-2824-28周周 臍帶血取樣臍帶血取樣 （流產(chǎn)率（流產(chǎn)率1-3%） 12-2412-24周周 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)無(wú)創(chuàng)產(chǎn)

8、前基因檢測(cè) （準(zhǔn)確率準(zhǔn)確率99%99%） 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢的優(yōu)勢(shì)無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢的優(yōu)勢(shì) 適應(yīng)癥和禁忌癥適應(yīng)癥和禁忌癥 u適應(yīng)癥： 1、經(jīng)B超確認(rèn)的單胎、活胎孕婦 2、孕周在12周至24周之間 3、可同時(shí)檢測(cè)18三體，13三體，45,X，47,XXY， 47,XYY，47,XXX等多種染色體非整倍體疾病 u禁忌癥： 1、雙胎或多胎 2、孕婦本人是染色體非整倍體患者 3、孕婦接受過(guò)異體輸血、移植手術(shù)、干細(xì)胞或免疫細(xì)胞 治療 u 抽取孕婦外周血5 mL，采用 EDTA 抗凝； u 采血完畢后，輕微顛倒采血管4次，并及時(shí)將 采血管放置于4冰箱中，在4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行血漿 分離工作。 【注意事項(xiàng)】 u 采血時(shí)孕婦無(wú)需空腹；

9、u 采血管為 5 mL EDTA 抗凝管。做7項(xiàng)檢測(cè)需要 用10ml抗凝管； u 顛倒混勻時(shí)動(dòng)作不能太劇烈，防止溶血。 樣本采集樣本采集 u 1、將采血管在、將采血管在4 環(huán)境下環(huán)境下 1600轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)/分離心分離心10分鐘，上清（血漿）分裝到置分鐘，上清（血漿）分裝到置 于冰盒上且已編號(hào)的于冰盒上且已編號(hào)的2.0ml的的 EP 管中。管中。 【注意事項(xiàng)】 1）嚴(yán)格核對(duì)樣本編號(hào)、確保編號(hào)唯一； 2）開啟離心管時(shí)，不能碰到管內(nèi)蓋； 3）吸取血漿過(guò)程中不要吸到中間層的白細(xì)胞。 u 2、上述血漿、上述血漿 4 16000轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)/分離心分離心10 min，冰盒上將上清轉(zhuǎn)入已編號(hào)的，冰盒上將上清轉(zhuǎn)入已編號(hào)的

10、2支支2.0ml EP 管中，每個(gè)離心管轉(zhuǎn)入管中，每個(gè)離心管轉(zhuǎn)入600ul血漿。同時(shí)在每個(gè)血漿。同時(shí)在每個(gè)2.0ml離心離心 管上標(biāo)記樣本編號(hào)、血漿體積、分離日期。管上標(biāo)記樣本編號(hào)、血漿體積、分離日期。 【注意事項(xiàng)】 1）嚴(yán)格核對(duì)樣本編號(hào)、確保樣本編號(hào)唯一； 2）開啟離心管管蓋時(shí)，不能碰到離心管內(nèi)蓋； 3）將分離好的血漿貼上對(duì)應(yīng)的條碼并用封口膜密封，密封結(jié)束后立即將血 漿放入-20 或-80 冰箱中，避免反復(fù)凍融。 【注意事項(xiàng)】 全血須保證在4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行血漿分離； 分離后的血漿在-20 冰箱中可保存3天，長(zhǎng)期保存需存放于-80 冰箱。 樣本前處理樣本前處理 樣本儲(chǔ)存與運(yùn)輸樣本儲(chǔ)存與運(yùn)輸 1、全

11、血樣本在冰袋(4 )條件下運(yùn)輸，且在4小時(shí)內(nèi) 送達(dá)樣本接收處，樣本接收后要立即完成血漿分 離。 2、血漿樣本在干冰（-20 ）條件下運(yùn)輸，并確保 樣本送達(dá)時(shí)有干冰剩余，到達(dá)后及時(shí)存放于-80 冰箱中，禁止將樣本在室溫下放置。 【注意事項(xiàng)】 1）泡沫箱的規(guī)格：壁厚6cm、外徑長(zhǎng)39cm、外徑寬 32cm、外徑高35cm。 2）干冰用量：10公斤/2-3天；15公斤/4-5天；根據(jù) 運(yùn)送時(shí)間的長(zhǎng)短，相應(yīng)增加干冰用量。 樣本數(shù)T21T18T13XOXXYXXXXYY 樣本總數(shù)26619272891513753 核型分析347619163108643 假陽(yáng)性 1101000 假陰性 0000000 檢出率100%100%100%100%100%1