血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?n掌握谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的掌握谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的 原理和方法原理和方法 l血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用于由丙氨酸及血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用于由丙氨酸及a a一酮戊一酮戊 二酸組成的基質(zhì)。產(chǎn)生丙酮酸及谷氨酸二酸組成的基質(zhì)。產(chǎn)生丙酮酸及谷氨酸 l血清加基液保溫后產(chǎn)生丙酮酸的多少，即血清加基液保溫后產(chǎn)生丙酮酸的多少，即 反應(yīng)出谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的大小。反應(yīng)出谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的大小。 l丙酮酸與丙酮酸與2 2，4-4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯肼作用生成丙酮酸 二硝基苯腙，在酸性溶液中顯二硝基苯腙，在酸性溶液中顯黃色黃色，在堿，在堿 性溶液中成醌型顯性溶液中成醌型顯棕紅色棕紅色。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理

2、 本實(shí)驗(yàn)是在堿性條件下，生成醌類化合物的量反本實(shí)驗(yàn)是在堿性條件下，生成醌類化合物的量反 應(yīng)丙酮酸的量，即反應(yīng)了谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性。應(yīng)丙酮酸的量，即反應(yīng)了谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性。 本法以本法以lml血清與基質(zhì)液在血清與基質(zhì)液在37，保溫，保溫30分鐘生分鐘生 成成2.5g丙酮酸為谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性丙酮酸為谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性1單位單位 求酶活性單位的方法：求酶活性單位的方法： 1、標(biāo)準(zhǔn)品對照法：、標(biāo)準(zhǔn)品對照法：檢品與標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸液同樣處檢品與標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸液同樣處 理呈色，進(jìn)行比色，計(jì)算出酶活性單位。理呈色，進(jìn)行比色，計(jì)算出酶活性單位。 2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法：、標(biāo)準(zhǔn)曲線法：取含待測物的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶取含待測物的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶 液

3、，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得活性單位。液，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得活性單位。 一、標(biāo)準(zhǔn)品對照法一、標(biāo)準(zhǔn)品對照法 取試管取試管4支，標(biāo)號，按下表加試劑：支，標(biāo)號，按下表加試劑： 基基 質(zhì)質(zhì) 液液 血血 清清 丙丙 酮酮 酸酸 水水 4個管同個管同 時放入時放入 37水浴水浴 中。中。 準(zhǔn)確保溫準(zhǔn)確保溫 30分鐘，分鐘， 呈呈 色色 試試 劑劑 基基 質(zhì)質(zhì) 液液 A A（檢品）（檢品）0.50.10.5 B B（檢對照）（檢對照）0.10.50.5 S S（標(biāo)準(zhǔn)）（標(biāo)準(zhǔn)）0.50.10.5 S S（標(biāo)對照）（標(biāo)對照） 0.10.50.5 實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作 56放置放置5分鐘。分鐘。 加加0.4N

4、 NaOH液液5.0ml 慢慢加入慢慢加入（約（約1分鐘），邊加邊混勻。分鐘），邊加邊混勻。 室溫放置室溫放置 30分鐘，分鐘， 測測OD值，波長值，波長 520nm，用，用蒸餾水蒸餾水調(diào)零點(diǎn)。調(diào)零點(diǎn)。 計(jì) 算 （ODA-ODB） （ODs-ODs） = = X （待測樣品丙酮酸含量）（待測樣品丙酮酸含量） 50ug/ml 0.1 ml X = = （ODA-ODB） （ODs-ODs） 5 5 SGPT單位單位= （ODA-ODB） （ODs-ODs） 5 5 0.10.12.52.5 = （ODA-ODB） （ODs-ODs） 2020 二二、標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)

5、丙酮酸液，并且各加以適量的基質(zhì)液，配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸液，并且各加以適量的基質(zhì)液， 作成標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體做法如下表。作成標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體做法如下表。 管號管號1 12 23 34 45 5空白空白 標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸 （50g/ml50g/ml） 基質(zhì)液基質(zhì)液mlml 蒸餾水蒸餾水mlml 丙酮酸含量丙酮酸含量gg 相當(dāng)相當(dāng)GPTGPT單位單位 0.050.05 0.50.5 0.450.45 2.52.5 1010 0.10.1 0.50.5 0.40.4 5.05.0 2020 0.20.2 0.50.5 0.30.3 1010 4040 0.30.3 0.50.5 0.20.2

6、1515 6060 0.40.4 0.50.5 0.10.1 2020 8080 - - 0.50.5 0.50.5 - - 0 0 。 各管混勻，放各管混勻，放37水浴水浴5分鐘分鐘 加加0.4N NaOH液液5.0ml 慢慢加入慢慢加入（約（約1分鐘），邊加邊混勻分鐘），邊加邊混勻 然后各加呈色試劑然后各加呈色試劑0.5ml，混勻，混勻 56放置放置5分鐘。分鐘。 室溫放置室溫放置 30分鐘分鐘 測定測定OD值值, 波長波長 520nm，用，用蒸餾水蒸餾水調(diào)零點(diǎn)。調(diào)零點(diǎn)。 ABSS OD值值 一標(biāo)準(zhǔn)對照法一標(biāo)準(zhǔn)對照法 .原始數(shù)據(jù)記錄原始數(shù)據(jù)記錄 2、公式計(jì)算酶活性單位（要求帶入數(shù)據(jù)，寫出結(jié)

7、果、公式計(jì)算酶活性單位（要求帶入數(shù)據(jù)，寫出結(jié)果） 二、標(biāo)準(zhǔn)曲線法二、標(biāo)準(zhǔn)曲線法 .原始數(shù)據(jù)記錄原始數(shù)據(jù)記錄 12345空白空白 OD標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn) OD標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn) OD空白空白(縱坐標(biāo)縱坐標(biāo))- 標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)GPT單位單位(橫坐標(biāo)橫坐標(biāo))1020406080- 2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，（要求規(guī)范作圖）、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，（要求規(guī)范作圖） 3、通過方法一的、通過方法一的ODA-ODB，在標(biāo)準(zhǔn)曲線中，查得酶活性單位，在標(biāo)準(zhǔn)曲線中，查得酶活性單位 實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) n操作中加操作中加 0.4N NaOH0.4N NaOH液時，需以較慢速度液時，需以較慢速度 加入，并且邊加邊搖勻加快時則加入，并且邊加邊搖

8、勻加快時則a a一戊酮二一戊酮二 酸引起的發(fā)色增強(qiáng)。酸引起的發(fā)色增強(qiáng)。 n本實(shí)驗(yàn)中各試劑加量都需要準(zhǔn)確，并且要本實(shí)驗(yàn)中各試劑加量都需要準(zhǔn)確，并且要 注意控制條件，保溫時間要嚴(yán)格注意控制條件，保溫時間要嚴(yán)格 n本法測定本法測定SGTPSGTP正常值為正常值為4040單位以下。單位以下。 n分析實(shí)驗(yàn)誤差產(chǎn)生的原因分析實(shí)驗(yàn)誤差產(chǎn)生的原因 n血清血清GPT活性測定的意義活性測定的意義 實(shí)驗(yàn)討論實(shí)驗(yàn)討論 l血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用于由丙氨酸及血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用于由丙氨酸及a a一酮戊一酮戊 二酸組成的基質(zhì)。產(chǎn)生丙酮酸及谷氨酸二酸組成的基質(zhì)。產(chǎn)生丙酮酸及谷氨酸 l血清加基液保溫后產(chǎn)生丙酮酸的多少，即血清加基液保

9、溫后產(chǎn)生丙酮酸的多少，即 反應(yīng)出谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的大小。反應(yīng)出谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的大小。 l丙酮酸與丙酮酸與2 2，4-4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯肼作用生成丙酮酸 二硝基苯腙，在酸性溶液中顯二硝基苯腙，在酸性溶液中顯黃色黃色，在堿，在堿 性溶液中成醌型顯性溶液中成醌型顯棕紅色棕紅色。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 （ODA-ODB） （ODs-ODs） = = X （待測樣品丙酮酸含量）（待測樣品丙酮酸含量） 50ug/ml 0.1 ml X = = （ODA-ODB） （ODs-ODs） 5 5 SGPT單位單位= （ODA-ODB） （ODs-ODs） 5 5 0.10.12.52.5 = （ODA-ODB） （ODs-ODs） 2020 各管混勻，放各管混勻，放37水浴水浴5分鐘分鐘 加加0.