重點(diǎn)腸道傳染病實(shí)

1、o 霍亂弧菌培養(yǎng)、分型操作方法。 o 傷寒、副傷寒培養(yǎng)操作方法。 o 細(xì)菌性痢疾（阿米巴痢疾）培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作 方法。、 o 手足口病實(shí)驗(yàn)操作方法。 o 細(xì)菌藥敏試驗(yàn) 微生物標(biāo)本的采集微生物標(biāo)本的采集 通常有血液、腦脊液、尿液、傷口的膿液、胸水腹水、糞便、痰液 及泌尿生殖系統(tǒng)的分泌物。 1采集的一般原則： a早期采集 b無(wú)菌采集 o注意對(duì)局部及周圍皮膚的消毒。 o寄生部位采集的標(biāo)本應(yīng)明確目的菌，采用選擇培養(yǎng)基。 C不同菌不同采集方法 D采集適量標(biāo)本，量不應(yīng)過(guò)少，注意采集不同時(shí)間不同部位標(biāo)本， 要全面。 E安全采集 o 2 標(biāo)本處理 2h送到檢驗(yàn)處，部分菌應(yīng)保溫于一定環(huán)境中 保存。如尸檢組織、支氣管

2、洗液、心包液、 痰、尿等標(biāo)本要保存于4環(huán)境中，腦脊液 保存于25。注意安全尤其對(duì)烈性傳染病。 有時(shí)可以直接用抽取標(biāo)本的注射器。 o 3各部位標(biāo)本的采集及注意事項(xiàng) 霍亂檢驗(yàn)程序 o標(biāo)本的采集和 送檢 o分離培養(yǎng) o鑒定 一、標(biāo)本的采集和送檢 1.標(biāo)本的采集：標(biāo)本采集的好壞，對(duì)整個(gè)檢驗(yàn)工作的質(zhì)量影響很大。 糞便標(biāo)本的采集應(yīng)爭(zhēng)取在發(fā)病早期，服用抗菌藥物之前并盡快送到檢驗(yàn) 室。 標(biāo)本以病人糞便為主。采便方法可用棉拭采取自然排出的新鮮大便， 亦可用直腸棉拭或采便管由肛門(mén)插入直腸內(nèi)35cm處采取。采用后者 應(yīng)注意棉拭大小適宜，避免采便量過(guò)少。一般要求水樣便采取13ml， 成形便采取指甲大小的糞量。在某些情

3、況下，病人的嘔吐物、沾染糞便 的衣物和尸體的腸內(nèi)容物亦可作為檢材。 2.標(biāo)本的送檢：采得的標(biāo)本應(yīng)立即接種于培養(yǎng)基。劇烈腹 瀉病人的水樣便含有大量病菌（106109/ml），直接分離培 養(yǎng)不難檢出陽(yáng)性。不能立即檢查的，要接種于保存培養(yǎng)基內(nèi)， 盡快送往檢驗(yàn)室。送檢標(biāo)本可放入堿性蛋白胨水、文堿性蛋白胨水、文臘二臘二 氏保存液或插入氏保存液或插入CaryBlair二氏半固體保存培養(yǎng)基二氏半固體保存培養(yǎng)基中。后者 不僅對(duì)霍亂弧菌，而且對(duì)其它腸道致病菌也有保存作用。標(biāo)本 與保存液的比例要適當(dāng)，810ml保存液可加入13ml液體便 或指甲大小的成形便，過(guò)多的大便量可降低保存液的pH值。 二、分離培養(yǎng)方法 1

4、.直接分離培養(yǎng)：急性期病人水樣大便標(biāo)本在增菌培養(yǎng)的同時(shí)，可取其 粘液絮片或用棉拭標(biāo)本直接作分離培養(yǎng)。這不僅能縮短檢出時(shí)間，還可避免 標(biāo)本中其他雜菌特別是非O1群霍亂弧菌經(jīng)增菌后大量繁殖而影響O1群霍亂 弧菌的分離 分離培養(yǎng)基有選擇性強(qiáng)、弱之不同。選擇性強(qiáng)的培養(yǎng)基常用的慶大霉素慶大霉素 瓊脂和瓊脂和4號(hào)瓊脂號(hào)瓊脂等；選擇性弱的有堿性瓊脂和堿性膽鹽瓊脂堿性瓊脂和堿性膽鹽瓊脂等。培養(yǎng)基的使 用，可根據(jù)當(dāng)?shù)鼐唧w情況和各檢驗(yàn)室的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)來(lái)選擇。近年的趨勢(shì)是使用 堿性蛋白胨水增菌，再用強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離。瓊脂平皿應(yīng)新鮮配置， 接種前培養(yǎng)基表面適當(dāng)烘干。劃線培養(yǎng)應(yīng)掌握能分離出盡量多的單個(gè)菌落。 一般每個(gè)

5、標(biāo)本接種一個(gè)平皿，必要時(shí)一個(gè)標(biāo)本接種強(qiáng)和弱選擇性培養(yǎng)基各一 個(gè)。在慶大霉素瓊脂平皿上，腸內(nèi)細(xì)菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)受到顯著抑制 ?；【L(zhǎng)快、菌落大，培養(yǎng)45小時(shí)，原劃線處有菌臺(tái)生長(zhǎng)，810小時(shí) 可長(zhǎng)出小菌落，16小時(shí)菌落直徑可達(dá)2mm。菌落弱帶灰色、半透明、扁平 、稍隆起、光滑濕潤(rùn)，培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)或室溫放置后，菌落略帶黃色，中心厚 而周圍透明，培養(yǎng)基含亞碲酸鉀時(shí)菌落呈灰色，中心形成黑色金屬碲沉淀培養(yǎng)基含亞碲酸鉀時(shí)菌落呈灰色，中心形成黑色金屬碲沉淀 。在堿性瓊脂平皿上弧菌生長(zhǎng)也較快，菌落較透明。在這些平皿上挑取菌落 做玻片凝集容易形成懸液，凝集狀態(tài)良好。 2.增菌后分離培養(yǎng)：所有糞便標(biāo)本都應(yīng)經(jīng)過(guò)

6、增菌，尤其是恢 復(fù)期病人、帶菌者或用過(guò)抗菌藥物的病人標(biāo)本含菌量少，單靠直接 分離不易檢出，須經(jīng)增菌培養(yǎng)再作分離。堿胨水標(biāo)本管放37增菌 68小時(shí)后分離，夏天可將運(yùn)送時(shí)間計(jì)算在內(nèi)。標(biāo)本如為保存液或 半固體保存培養(yǎng)基，則取1.0ml或?qū)⒚奘棉D(zhuǎn)種至810ml堿胨水中， 并將棉拭內(nèi)容物在胨水管壁上擠出。37培養(yǎng)68小時(shí)后，平穩(wěn)地 從溫箱中取出試管架，從霍亂弧菌生長(zhǎng)最茂盛的菌膜下表層，取一 接種環(huán)，劃線接種于強(qiáng)選擇性瓊脂平皿。 標(biāo)本含菌量少時(shí)，為提高檢出率，可實(shí)行2次增菌，取第一次 堿胨水增菌68小時(shí)的培養(yǎng)物的表層液0.10.2ml，接種于8 10ml的堿胨水中，37培養(yǎng)68小時(shí)再做分離。 三、鑒定 鑒

7、定標(biāo)準(zhǔn)以血清學(xué)性狀為主，結(jié) 合形態(tài)學(xué)和生化學(xué)性狀作出判定。血 清學(xué)性狀以玻片凝集實(shí)驗(yàn)為主，可疑 菌落先用O1群或/和O139群霍亂弧 菌診斷血清作檢查。 玻片凝集實(shí)驗(yàn)玻片凝集實(shí)驗(yàn)：自分離培養(yǎng)基上挑取可疑菌落與O1群或/和O139群霍亂診 斷血清做玻片凝集試驗(yàn)。因標(biāo)本中可能存在O1群、O139群或非O1群/非 O139群霍亂弧菌，為減少工作量及避免遺漏，推薦使用O1群和O139群霍 亂兩價(jià)診斷血清，檢出陽(yáng)性時(shí)再用單價(jià)血清進(jìn)一步鑒定。玻片凝集用血清 的效價(jià)，一般應(yīng)為1：401：50（不低于1：32，不高于1：64）。即根據(jù) 血清原效價(jià)作適當(dāng)稀釋，使其效價(jià)成為1：401：50，如原效價(jià)為1： 128

8、0，制成1：50效價(jià)的血清，即須稀釋1：25（12801/5025.6）使用 。將稀釋血清滴加在潔凈的玻片或平皿內(nèi)，再以接種針或小接種環(huán)取可疑 菌落放在血清液滴近旁，磨勻，然后混入血清內(nèi)制成均勻懸液。很快（一 般不超過(guò)10秒鐘）出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的明顯凝集者為陽(yáng)性。凝集的菌落應(yīng)以生 理鹽水作對(duì)照，檢查有無(wú)自然凝集。將凝集的菌落接種普通瓊脂斜面上， 培養(yǎng)68小時(shí)后準(zhǔn)備做進(jìn)一步的鑒定，如菌落還有足夠的剩余，亦可用來(lái) 做單價(jià)血清的玻片凝集，以確定血清型。 有的標(biāo)本可能同時(shí)存在非O1群/非O139群霍亂弧菌，因此，可疑菌落較 多時(shí)，應(yīng)挑選5個(gè)以上的菌落逐個(gè)進(jìn)行玻片凝集檢查。必要時(shí)，取原劃線菌苔 邊緣透明部分

9、再做玻片凝集。這對(duì)一次流行的首批病人進(jìn)行檢查時(shí)尤應(yīng)注意 。此外，平皿分離未獲分散的單個(gè)菌落，而在密集部位仍有可疑菌落時(shí)，應(yīng) 將該部分再做或經(jīng)增菌后再做分離。 有時(shí)從恢復(fù)期病人分離出菌落典型但不凝集的弧菌，這時(shí)應(yīng)以霍亂粗糙 型血清作玻片凝集，檢查是否為本菌的粗糙型。 傷寒桿菌檢測(cè)程序 一、標(biāo)本采集一、標(biāo)本采集 用無(wú)菌方法采集新鮮標(biāo)本，置于滅菌容器中，或直接接種于增菌培養(yǎng)基中，登記 好標(biāo)本號(hào)碼填寫(xiě)送檢單及時(shí)送檢。運(yùn)送途中嚴(yán)防污染及容器破損。如不能及時(shí)送檢 ，可于4保存。為提高標(biāo)本的陽(yáng)性率，應(yīng)根據(jù)病程的不同階段采集不同的標(biāo)本。 血：血：血標(biāo)本宜在傷寒發(fā)病早期和使用抗生素前采集。以無(wú)菌方法采血5毫升。

10、第一周 血培養(yǎng)陽(yáng)性率可達(dá)90%。傷寒患者血液中有殺傷寒菌素，膽鹽可以抑制這種殺菌素 的作用，故可選用葡萄膽鹽肉湯增菌葡萄膽鹽肉湯增菌培養(yǎng)基。如標(biāo)本已凝固，可取出血清作肥達(dá)反 應(yīng)，將血塊攪碎后做血培養(yǎng)。 糞便糞便：用棉拭采取患者新鮮糞便1一2克置于增菌液內(nèi)，也可用緩沖甘油鹽水甘油鹽水或Cary Blair運(yùn)送培養(yǎng)基保存送檢。最好在用抗菌藥物治療前3天后采樣。 尿：尿：病程第2、3周起，可取尿培養(yǎng)。用無(wú)菌導(dǎo)尿法或取中段尿50毫升，離心取 物增菌或直接分離。 骨髓骨髓：培養(yǎng)陽(yáng)性率高，特別對(duì)經(jīng)過(guò)治療的傷寒病人，可考慮作骨髓培養(yǎng)。 二、分離培養(yǎng)二、分離培養(yǎng) 1、血標(biāo)本 取病人靜脈血5毫升加入約10倍量的

11、葡萄糖膽鹽肉湯中，37培養(yǎng)，逐日 觀察結(jié)果。如出現(xiàn)混濁即可用血瓊脂或血瓊脂或SS、麥康凱瓊脂、麥康凱瓊脂進(jìn)行分離培養(yǎng)，37 培養(yǎng)18一24小時(shí)，挑取疑菌落作進(jìn)一步鑒定。 一般增菌1一2天陽(yáng)性率高，如至第7天培養(yǎng)物仍清澈透明，經(jīng)接種培養(yǎng)仍無(wú)菌 生長(zhǎng)，則可判為陰性。 2、糞便標(biāo)本 （1）直接分離培養(yǎng)將標(biāo)本接種到SS和麥康凱瓊脂和麥康凱瓊脂上，37培養(yǎng)18一 24小時(shí)，挑取可疑菌落進(jìn)行鑒定。 （2）增菌培養(yǎng)將標(biāo)本乳化后接種在改良的亞硒酸氫鈉甘露醇亞硒酸氫鈉甘露醇（SFM） 增菌培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)15一18小時(shí)后，再接種到SS和麥康凱瓊脂和麥康凱瓊脂上，37 培養(yǎng)18一24小時(shí)后，挑取可疑菌落。 3、

12、尿、膽汁、骨髓標(biāo)本 取患者尿或膽汁經(jīng)離心后的沉淀物或骨髓液，作直接分離或增菌分離培 養(yǎng)，方法與糞便標(biāo)本分離培養(yǎng)方法相同。 三、鑒定 1、初步生化鑒定 挑取上述分離培養(yǎng)基上無(wú)色、透明或 半透明的可疑菌落2一3個(gè)，分別接種雙糖 鐵斜面（KIA）和動(dòng)力靛基質(zhì)尿素半固體 （MIU）各一支，37培養(yǎng)18一24小時(shí)， 觀察生化反應(yīng)。若符傷寒或副傷寒桿菌生 化反時(shí)，則取KIA斜面上菌苔進(jìn)行血清學(xué) 鑒定。 2、血清學(xué)分型 （1）0血清群別判定初步生化反應(yīng)符 合傷寒或甲、乙、丙型副傷寒桿菌時(shí)， 先用AF群沙門(mén)氏“0”多價(jià)血清作玻片 凝集，以判定其群別。 （2）H抗原判定0抗原判定后，依次 用相應(yīng)的H因子血清檢查

13、第一相和第二相 抗原與Hd因子血清凝集。 （3）Vi抗原檢查新分離的傷寒桿菌有 Vi抗原，能與Vi血清凝集。 一、標(biāo)本采集、運(yùn)送、包裝、保存、接收 可采用便盒留便、肛拭或采便管采便。便盒留便：留取 糞便時(shí)應(yīng)采集新鮮糞便的膿血部分、粘液部分、水樣便或稀便 。便量15g。集體腹瀉或食源性暴發(fā)患者糞便采集的數(shù)額，應(yīng) 根據(jù)患者人數(shù)的多少，決定采取標(biāo)本的數(shù)量。當(dāng)懷疑患者為菌 血癥時(shí)，應(yīng)以無(wú)菌操作，從靜脈血管采取1015mL血液，放入 加有EDTA抗凝劑瓶中送檢。所采取的糞便標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，不 得超過(guò)2h送到化驗(yàn)室，否則標(biāo)本應(yīng)放入Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送培養(yǎng)基 中，運(yùn)送時(shí)間超過(guò)2h者，應(yīng)在冰浴條

14、件下送檢。送交分型分析 菌株的接收要求：1)經(jīng)過(guò)分純的沒(méi)有污染的菌株;2)分離菌株應(yīng) 該用甘油半固體保存；3)與分離菌株相對(duì)應(yīng)的患者的臨床癥狀和 流行病學(xué)資料；4)經(jīng)血清和生化證實(shí)為志賀菌。 痢疾檢驗(yàn)程序痢疾檢驗(yàn)程序 二、糞便標(biāo)本志賀菌的分離方法 1、分離方法 （1）用接種環(huán)多點(diǎn)沾取標(biāo)本病變部分，直接劃線分離于SS、 EMB（或HE、麥康凱）瓊脂平板。37培養(yǎng)24h。 （2）血液培養(yǎng) 將采取的抗凝血液標(biāo)本，放入葡萄糖肉湯，37培養(yǎng)，逐日 觀察結(jié)果。一般13d內(nèi)陽(yáng)性較高。為提高陽(yáng)性檢出率，可以 在標(biāo)本中加入0.5mLOP乳化劑（聚乙二醇辛基苯基醚），使血 球溶解，以提高陽(yáng)性檢出率。 （3）挑選可

15、疑菌落 從37培養(yǎng)1624h的分離培養(yǎng)基上，觀察挑選可疑菌落， 其形態(tài)為無(wú)色，半透明，圓形，濕潤(rùn)、光滑、突起，大小為1 2mm；挑選可疑菌落，接種TSI和葡萄糖半固體或綜合培養(yǎng)基 ，先劃線后穿刺，做好標(biāo)記，放37培養(yǎng)16h以上，觀察結(jié)果 2、初步生化反應(yīng) 志賀菌屬在TSI上的生化反應(yīng)為：斜面紅色，底層產(chǎn)酸黃色， 不產(chǎn)氣。在葡萄糖半固體管內(nèi)產(chǎn)酸為黃色，不產(chǎn)氣，無(wú)動(dòng)力。在 綜合培養(yǎng)基上為：斜面紅色中立段產(chǎn)酸黃色，底層綠色，無(wú)動(dòng)力 ，福氏志賀菌6型在上述三種培養(yǎng)基中，有時(shí)可產(chǎn)生少量氣體。 3、生化學(xué)鑒定 （1）凡屬志賀氏菌屬的培養(yǎng)物，應(yīng)符合表Al所列的生化特性。 （2）志賀菌屬分為四個(gè)生化群。血清學(xué)

16、分型與生化反應(yīng)不一致 者，均為非志賀菌。 （3）生化反應(yīng)或血清學(xué)反應(yīng)可疑的培養(yǎng)物，均應(yīng)做革蘭氏染色 鏡儉，并加做V.P、苯丙氨酸、西蒙氏檸檬酸鹽、賴氨酸和葡萄糖 n銨試驗(yàn),與有關(guān)的細(xì)菌相鑒別。 腸出血性大腸桿菌O157：H7的檢驗(yàn) 程序 糞便或其它標(biāo)本 增菌6小時(shí)左右 磁珠濃縮 山梨醇麥康凱 培養(yǎng)基培養(yǎng)18-24小時(shí) 可疑菌落 革蘭氏 生化 血清學(xué) 毒力因子 染色 反應(yīng) 鑒定 鑒定* 根據(jù)結(jié)果判定 * 有條件的單位可進(jìn)行如用PCR檢 測(cè)SLT1 、SLT2、Hly、EAE的基因 【注】 1、培養(yǎng)及增菌均在37進(jìn)行； 2、山梨醇-麥康凱培養(yǎng)基中應(yīng)加入適當(dāng)?shù)囊志鷦?3、“科瑪嘉”培養(yǎng)基加入亞碲酸

17、鉀后選擇效果更好； 4、在SMAC中加入下列抑制劑的一種均可增加培養(yǎng)基的選擇性； 1）亞碲酸鉀2.5mg/l和先鋒霉素類抗生素Cefixime0.05mg/l； 2）新生霉素10mg/l； 3）萬(wàn)古霉素40mg/l； 5、在科瑪嘉或S-MAC平板上挑選可疑菌落與O157診斷血清、H7血清或O157單克隆抗體作試探性凝集試驗(yàn)， 若不凝集，但臨床表現(xiàn)疑為EHEC感染，則應(yīng)做如下處理。因?yàn)閭€(gè)別腸出血性大腸桿菌O157：H7具有K 抗原，應(yīng)在生化反應(yīng)確定為大腸桿菌后用生理鹽水制備菌懸液，并100水浴加熱10-15分鐘再與O157診 斷血清或O157單克隆抗體做凝集試驗(yàn)。 6、當(dāng)生化反應(yīng)和血清學(xué)反應(yīng)結(jié)果

18、均與腸出血性大腸桿菌O157：H7符合時(shí)，才能確認(rèn)為腸出血性大腸桿菌 O157：H7。 7、目前許多國(guó)家使用的O157和H7特異性抗體與及少數(shù)細(xì)菌具有不同程度的交叉反應(yīng)，如美國(guó)、法國(guó)還有我國(guó) 自己生產(chǎn)的試劑都與弗勞地枸櫞酸桿菌有交叉反應(yīng)，因此，用生化試驗(yàn)確定為大腸桿菌是必須的,最為重 要的是硫化氫試驗(yàn)。絕大多數(shù)腸出血性大腸桿菌菌株在24小時(shí)內(nèi)不的發(fā)酵D-山梨醇。但是，也報(bào)道了一 些能夠快速發(fā)酵D-山梨醇的菌株。 8、典型大腸桿菌的主要生化反應(yīng)結(jié)果如下： 1）動(dòng)力試驗(yàn)葡萄糖麥芽糖甘露醇蔗糖硫化氫尿素試驗(yàn) +/ 2）靛基質(zhì)甲基紅V-P試驗(yàn)枸櫞酸鹽苯丙氨酸脫氨酶 3）賴氨酸脫羧酶鳥(niǎo)氨酸脫羧酶氧化酶氰

19、化鉀 +/+/ PCR在感染性疾病病原體在感染性疾病病原體 檢測(cè)中的應(yīng)用檢測(cè)中的應(yīng)用 u 病毒的檢測(cè)病毒的檢測(cè) o 定量定量 o 定性定性 o 基因型及基因突變基因型及基因突變 u 細(xì)菌及其它微生物的檢測(cè)細(xì)菌及其它微生物的檢測(cè) o 難培養(yǎng)菌難培養(yǎng)菌 o 耐藥基因耐藥基因 u 寄生蟲(chóng)的檢測(cè)寄生蟲(chóng)的檢測(cè) 手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法 u病毒分離病毒分離 采集的樣本經(jīng)過(guò)相應(yīng)處理后接種于相應(yīng)細(xì)胞，進(jìn)行腸道病毒采集的樣本經(jīng)過(guò)相應(yīng)處理后接種于相應(yīng)細(xì)胞，進(jìn)行腸道病毒 的培養(yǎng)，通過(guò)觀察細(xì)胞毒性變化來(lái)判斷是否感染腸道病毒。的培養(yǎng)，通過(guò)觀察細(xì)胞毒性變化來(lái)判斷是否感染腸道病毒。 u測(cè)定人雙份血清

20、標(biāo)本的中和抗體滴度測(cè)定人雙份血清標(biāo)本的中和抗體滴度 用急性期血清與恢復(fù)期血清滴度進(jìn)行比較，抗體滴度用急性期血清與恢復(fù)期血清滴度進(jìn)行比較，抗體滴度4倍或倍或 4倍以上增高證明病毒感染。倍以上增高證明病毒感染。 u核酸檢測(cè)核酸檢測(cè) 主要是逆轉(zhuǎn)錄主要是逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR） 普通普通PCR和熒光定量和熒光定量PCR 手足口病檢測(cè) o 待檢標(biāo)本類型及檢測(cè)方法待檢標(biāo)本類型及檢測(cè)方法 編號(hào)編號(hào)檢測(cè)方法檢測(cè)方法標(biāo)本類型標(biāo)本類型 1病毒分離病毒分離糞便、腦脊液、皰疹液和咽糞便、腦脊液、皰疹液和咽 拭液拭液 2雙份血清標(biāo)本的中和抗體雙份血清標(biāo)本的中和抗體 滴度滴度 血清、腦脊液血清、

21、腦脊液 3核酸檢測(cè)（核酸檢測(cè)（RT-PCR)血清、糞便、腦脊液、皰疹血清、糞便、腦脊液、皰疹 液和咽拭液液和咽拭液 PCR實(shí)驗(yàn)室布局 細(xì)菌藥敏試驗(yàn) o 紙片擴(kuò)散法紙片擴(kuò)散法 o 稀釋法稀釋法 o 抗生素濃度梯度法抗生素濃度梯度法 o 自動(dòng)化儀器法自動(dòng)化儀器法 一、標(biāo)本的采集和送檢 1.標(biāo)本的采集：標(biāo)本采集的好壞，對(duì)整個(gè)檢驗(yàn)工作的質(zhì)量影響很大。 糞便標(biāo)本的采集應(yīng)爭(zhēng)取在發(fā)病早期，服用抗菌藥物之前并盡快送到檢驗(yàn) 室。 標(biāo)本以病人糞便為主。采便方法可用棉拭采取自然排出的新鮮大便， 亦可用直腸棉拭或采便管由肛門(mén)插入直腸內(nèi)35cm處采取。采用后者 應(yīng)注意棉拭大小適宜，避免采便量過(guò)少。一般要求水樣便采取13ml， 成形便采取指甲大小的糞量。在某些情況下，病人的嘔吐物、沾染糞便 的衣物和尸體的腸內(nèi)容物亦可作為檢材。 2.標(biāo)本的送檢：采得的標(biāo)本應(yīng)立即接種于培養(yǎng)基。劇烈腹 瀉病人的水樣便含有大量病菌（106109/ml），直接分離培 養(yǎng)不難檢出陽(yáng)性。不能立即檢查的，要接種于保存培養(yǎng)基內(nèi)， 盡快送往檢驗(yàn)室。送檢標(biāo)本可放入堿性蛋白胨水、文堿性蛋白胨水、文臘二臘二 氏保存液或插入氏保存液或插入CaryBlair二氏半固體保存培養(yǎng)基二氏半固體保存培養(yǎng)基中。后者 不僅對(duì)霍亂弧菌，而且對(duì)其它腸道