【大學(xué)課件】《儀器分析實(shí)驗(yàn)》高效液相色譜法

1、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?了解了解HPLC儀器根本結(jié)構(gòu)儀器根本結(jié)構(gòu),掌握實(shí)驗(yàn)儀器的一般使掌握實(shí)驗(yàn)儀器的一般使 用方法；用方法； 加深對(duì)色譜別離原理的理解，掌握主要實(shí)驗(yàn)條件加深對(duì)色譜別離原理的理解，掌握主要實(shí)驗(yàn)條件 的選擇；的選擇； 掌握液相色譜定性定量分析技術(shù)。掌握液相色譜定性定量分析技術(shù)。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 反相高效液相色譜法別離測(cè)定烷基苯系反相高效液相色譜法別離測(cè)定烷基苯系 物物 實(shí)驗(yàn)講解要點(diǎn)實(shí)驗(yàn)講解要點(diǎn) 一、色譜別離原理一、色譜別離原理 二、色譜分析技術(shù)二、色譜分析技術(shù) 三、三、 HPLC儀器和使用方法儀器和使用方法 四、四、 HPLC和和GC的比較的比較 五、五、 RP-HPLC測(cè)定烷基苯化

2、合物原測(cè)定烷基苯化合物原 理理 一、色譜別離原理一、色譜別離原理 色譜法是一類高效別離方法。色譜法是一類高效別離方法。 色譜別離原理是什么？色譜別離原理是什么？ HPLC和和GC儀器的別離部件是什么？?jī)x器的別離部件是什么？ 它們有什么不同？它們有什么不同？ HPLC和和GC的主要差異？的主要差異？ 二、色譜分析技術(shù)二、色譜分析技術(shù) 色譜分析是一類重要的儀器分析方法，其色譜分析是一類重要的儀器分析方法，其 特點(diǎn)是別離能力強(qiáng)、定量準(zhǔn)確，適合于復(fù)雜特點(diǎn)是別離能力強(qiáng)、定量準(zhǔn)確，適合于復(fù)雜 樣品或多組分樣品分析。樣品或多組分樣品分析。 常見的色譜定性方法？常見的色譜定性方法？ 色譜定量分析的依據(jù)？色譜定

3、量分析的依據(jù)？ 氣相色譜實(shí)驗(yàn)采用那種定量分析方法？有何氣相色譜實(shí)驗(yàn)采用那種定量分析方法？有何 特點(diǎn)？特點(diǎn)？ HPLC HPLC和和GCGC的應(yīng)用特點(diǎn)的應(yīng)用特點(diǎn) 三、三、 HPLC儀器和實(shí)驗(yàn)技術(shù)儀器和實(shí)驗(yàn)技術(shù) HPLC HPLC儀器的根本組分？?jī)x器的根本組分？ 主要部件的工作原理？主要部件的工作原理？ HPLC HPLC和和GCGC儀器的比較儀器的比較 HPLC HPLC和和GCGC實(shí)驗(yàn)技術(shù)的比較實(shí)驗(yàn)技術(shù)的比較 有人認(rèn)為色譜分析實(shí)驗(yàn)很簡(jiǎn)單，就是打一有人認(rèn)為色譜分析實(shí)驗(yàn)很簡(jiǎn)單，就是打一 針樣品而已，你是怎么認(rèn)為的？你是否給病針樣品而已，你是怎么認(rèn)為的？你是否給病 人打過針？為什么沒有？人打過針？為

4、什么沒有？ 四、高效液相色譜儀的根本組成四、高效液相色譜儀的根本組成 分幾個(gè)系統(tǒng)？分幾個(gè)系統(tǒng)？ 和和GCGC有何不同？有何不同？ 高壓泵工作原理？高壓泵工作原理？ GCGC是如何進(jìn)樣的？是如何進(jìn)樣的？ 記錄系統(tǒng)和記錄系統(tǒng)和GCGC一樣一樣 嗎？嗎？ 高壓泵工作原理單向閥高壓泵工作原理單向閥 高壓液體有危險(xiǎn)嗎？高壓液體有危險(xiǎn)嗎？ 高壓泵如何改變流速？高壓泵如何改變流速？ 高壓泵工作原理單向閥高壓泵工作原理單向閥 HPLC HPLC進(jìn)樣針與進(jìn)樣針與GCGC有何不同？有何不同？ 為什么為什么HPLCHPLC與與GCGC進(jìn)樣要求不同？進(jìn)樣要求不同？ 六通閥工作原理流路切換六通閥工作原理流路切換 五、五

5、、 RP-HPLC測(cè)定烷基苯化合物原理測(cè)定烷基苯化合物原理 什么是正相色譜？什么是反相色譜？什么是正相色譜？什么是反相色譜？ 什么是鍵合固定相？什么是鍵合固定相？ 預(yù)測(cè)一下苯和甲苯在預(yù)測(cè)一下苯和甲苯在C18C18反相柱上的保存反相柱上的保存 順序？順序？ 什么是反相色譜疏水機(jī)理？什么是反相色譜疏水機(jī)理？ 本實(shí)驗(yàn)的主要色譜分析條件有那些？本實(shí)驗(yàn)的主要色譜分析條件有那些？ 流動(dòng)相組成對(duì)保存時(shí)間有何影響？舉例說(shuō)流動(dòng)相組成對(duì)保存時(shí)間有何影響？舉例說(shuō) 明？明？ 改變檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)色譜圖有何影響？改變檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)色譜圖有何影響？ HPLC的溶劑選擇的溶劑選擇 本實(shí)驗(yàn)采用什么流動(dòng)相？本實(shí)驗(yàn)采用什么流動(dòng)相？ 什么是

6、什么是HPLCHPLC級(jí)甲醇、乙腈溶劑？級(jí)甲醇、乙腈溶劑？ 如何獲得超純水？如何獲得超純水？ 本實(shí)驗(yàn)所用的流動(dòng)相如何配制？本實(shí)驗(yàn)所用的流動(dòng)相如何配制？ 流動(dòng)相為什么要除氣？如何除氣？流動(dòng)相為什么要除氣？如何除氣？ 六、實(shí)驗(yàn)局部六、實(shí)驗(yàn)局部 一、溶液配制一、溶液配制 1 1 配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 三組分混標(biāo)液：每三組分混標(biāo)液：每mLmL溶液分別含苯、甲苯和乙苯。溶液分別含苯、甲苯和乙苯。 分別準(zhǔn)確移取、和三組分混標(biāo)液于分別準(zhǔn)確移取、和三組分混標(biāo)液于10mL10mL容量瓶容量瓶 中，用流動(dòng)相溶劑定容。中，用流動(dòng)相溶劑定容。 2 2 流動(dòng)相的配制、過濾和除氣。流動(dòng)相的配制、過濾和除氣。

7、五組分混標(biāo)液：含適量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁五組分混標(biāo)液：含適量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁 苯。苯。 標(biāo)準(zhǔn)苯測(cè)試液。標(biāo)準(zhǔn)苯測(cè)試液。 未知樣品未知樣品1 1號(hào)、號(hào)、2 2號(hào)和號(hào)和3 3號(hào)。號(hào)。 二、色譜實(shí)驗(yàn)條件二、色譜實(shí)驗(yàn)條件 A A組：組：Waters HPLCWaters HPLC儀儀 色譜柱：色譜柱：Nova Pak C18 (3.9Nova Pak C18 (3.9150mm, 4m)150mm, 4m) 流動(dòng)相：流動(dòng)相：CH3OH-H2O (70/30, v/v)CH3OH-H2O (70/30, v/v) 流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)波長(zhǎng)：254

8、nm254nm 進(jìn)樣體積：進(jìn)樣體積：20L20L B B組：組：TSP HPLCTSP HPLC儀儀 色譜柱：色譜柱：Hypersil BDS C18 (4.0Hypersil BDS C18 (4.0200mm, 5m)200mm, 5m) 流動(dòng)相：流動(dòng)相：CH3OH-H2O (80/20, v/v)CH3OH-H2O (80/20, v/v) 流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm254nm 進(jìn)樣體積：進(jìn)樣體積：20L20L 三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與主要步驟三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與主要步驟 1 1 更換流動(dòng)相。更換流動(dòng)相。 2 2 開動(dòng)儀器，讓色譜柱平衡。開動(dòng)儀器，讓色譜柱平衡。 3 3 設(shè)置色譜工作站參數(shù)。設(shè)置色譜工作站參數(shù)。 4 4 進(jìn)樣、采集色譜圖。進(jìn)樣、采集色譜圖。 1 1五