色譜定性和定量分析

1、Finding Whoa at Office 2.0 1 第八章第八章 色譜的定性分析色譜的定性分析 混合物混合物 樣品的來源性質(zhì)和分析目的樣品的來源性質(zhì)和分析目的 一般定性一般定性 單體 利用已知標(biāo)準(zhǔn)物對照定性利用已知標(biāo)準(zhǔn)物對照定性 依據(jù)：相同的色譜操作條件，組分有固定的色譜依據(jù)：相同的色譜操作條件，組分有固定的色譜 保留值保留值 保留時(shí)間 有了解, 組成比較簡單, 有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作對照 2、利用保留體積對照定性、利用保留體積對照定性 避免載氣流速變化的影響避免載氣流速變化的影響 V是利用載氣流速和保留時(shí)間來計(jì)算是利用載氣流速和保留時(shí)間來計(jì)算 利用利用T和和V與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的比較與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的比較 可

2、靠性與分離度有關(guān)可靠性與分離度有關(guān) 樣品中組分多，色譜峰密集，直接比較困難樣品中組分多，色譜峰密集，直接比較困難 同一保留時(shí)間對應(yīng)多種化合物同一保留時(shí)間對應(yīng)多種化合物 3、利用加入法、利用加入法 將已知物質(zhì)加入到樣品，觀察各組分色譜峰的相對將已知物質(zhì)加入到樣品，觀察各組分色譜峰的相對 變化來進(jìn)行定性變化來進(jìn)行定性 適用于樣品中組分色譜峰過密適用于樣品中組分色譜峰過密 操作方法：操作方法： 做出樣品的色譜圖做出樣品的色譜圖 加入某純已知物加入某純已知物 在同樣的色譜條件下做混合物的色譜圖在同樣的色譜條件下做混合物的色譜圖 峰高增加即可能為加入的已知物峰高增加即可能為加入的已知物 另一種情況：增加

3、了一個(gè)色譜峰另一種情況：增加了一個(gè)色譜峰 2. 利用文獻(xiàn)保留值定性利用文獻(xiàn)保留值定性 相對保留值定性相對保留值定性 組分和基準(zhǔn)物質(zhì)的調(diào)整保留值的比值組分和基準(zhǔn)物質(zhì)的調(diào)整保留值的比值 僅與固定液和柱溫僅與固定液和柱溫 適用于：組成簡單、已知范圍的混合物適用于：組成簡單、已知范圍的混合物 選定一定基準(zhǔn)物按文獻(xiàn)報(bào)道的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，選定一定基準(zhǔn)物按文獻(xiàn)報(bào)道的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)， 計(jì)算兩組分的相對保留值計(jì)算兩組分的相對保留值 選擇易得到純品，與分析組分保留至相近的作基準(zhǔn)選擇易得到純品，與分析組分保留至相近的作基準(zhǔn) 物質(zhì)物質(zhì) 不受柱長、固定相填充情況、固定液用量、載氣的不受柱長、固定相填充情況、固定液用

4、量、載氣的 流速影響流速影響 保留指數(shù)保留指數(shù)retention index 利用已知物得文獻(xiàn)保留值與未知物得測定保留值對照利用已知物得文獻(xiàn)保留值與未知物得測定保留值對照 保留指數(shù)保留指數(shù) 與柱溫和固定相性質(zhì)有關(guān)與柱溫和固定相性質(zhì)有關(guān) 計(jì)算：計(jì)算：Kovats指數(shù)指數(shù) 正構(gòu)烷烴的保留指數(shù)為碳原子數(shù)乘以正構(gòu)烷烴的保留指數(shù)為碳原子數(shù)乘以100 試驗(yàn)方法：試驗(yàn)方法： 測出組分保留時(shí)間測出組分保留時(shí)間 選擇選擇3種正構(gòu)烷烴，分別大于小于樣品種正構(gòu)烷烴，分別大于小于樣品 以正構(gòu)烷烴的調(diào)整保留值的對數(shù)值對保留指數(shù)以正構(gòu)烷烴的調(diào)整保留值的對數(shù)值對保留指數(shù)I作圖作圖 由被測組分的調(diào)整保留值的對數(shù)從圖上求得保留

5、指數(shù)由被測組分的調(diào)整保留值的對數(shù)從圖上求得保留指數(shù) 保留指數(shù)的精密度及誤差來源保留指數(shù)的精密度及誤差來源 1、系統(tǒng)誤差：、系統(tǒng)誤差： 氣流速控不穩(wěn)，如鋼瓶出口壓力低氣流速控不穩(wěn)，如鋼瓶出口壓力低 氣路有污染氣路有污染 溫度控制不十分準(zhǔn)確溫度控制不十分準(zhǔn)確 2、測量誤差、測量誤差 死時(shí)間、保留時(shí)間、保留距離的測量死時(shí)間、保留時(shí)間、保留距離的測量 3、采用雙柱或多柱、采用雙柱或多柱 4、用保留指數(shù)進(jìn)行定性需要知道被測樣品的化合物類型、用保留指數(shù)進(jìn)行定性需要知道被測樣品的化合物類型 ，從文獻(xiàn)查找該類物質(zhì)的色譜條件，從文獻(xiàn)查找該類物質(zhì)的色譜條件 溫度對保留指數(shù)的影響溫度對保留指數(shù)的影響 不同溫度下的保

6、留指數(shù)不同溫度下的保留指數(shù) 1、同一物質(zhì)、同一色譜柱上的保留指數(shù)在一定溫度范圍內(nèi)、同一物質(zhì)、同一色譜柱上的保留指數(shù)在一定溫度范圍內(nèi) 與柱溫呈線性關(guān)系與柱溫呈線性關(guān)系 非極性固定相線性范圍比極性固定相大，非極性固定相線性范圍比極性固定相大， 2、保留指數(shù)的溫度效應(yīng)、保留指數(shù)的溫度效應(yīng) 保留指數(shù)的溫度變化率（保留指數(shù)的溫度變化率（ I/ t）對于不同類物質(zhì)是不同）對于不同類物質(zhì)是不同 的，如的，如 芳烴芳烴環(huán)烷烴環(huán)烷烴三取代烴三取代烴二取代烴和一取代烴二取代烴和一取代烴 4、計(jì)算機(jī)檢索、計(jì)算機(jī)檢索 計(jì)算機(jī)儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)保留指數(shù)換算為用戶色譜條件下的保留計(jì)算機(jī)儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)保留指數(shù)換算為用戶色譜條件下的保留

7、 指數(shù)和保留時(shí)間指數(shù)和保留時(shí)間 5、保留指數(shù)的優(yōu)點(diǎn)、保留指數(shù)的優(yōu)點(diǎn) 以正構(gòu)烷烴，把某組分的保留行為與緊靠它的正構(gòu)烷烴來以正構(gòu)烷烴，把某組分的保留行為與緊靠它的正構(gòu)烷烴來 標(biāo)定，計(jì)算更為準(zhǔn)確標(biāo)定，計(jì)算更為準(zhǔn)確 具有形象化優(yōu)點(diǎn)具有形象化優(yōu)點(diǎn) 與文獻(xiàn)值對照可定性鑒定，與固定相的性質(zhì)和柱溫有關(guān)，與文獻(xiàn)值對照可定性鑒定，與固定相的性質(zhì)和柱溫有關(guān)， 準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性好準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性好 想關(guān)性好，利于判斷結(jié)構(gòu)想關(guān)性好，利于判斷結(jié)構(gòu) 保留指數(shù)是對數(shù)值，一組同系物的保留指數(shù)是對數(shù)值，一組同系物的I值與化合物的沸點(diǎn)和值與化合物的沸點(diǎn)和 碳數(shù)呈線性關(guān)系碳數(shù)呈線性關(guān)系 比保留體積定性比保留體積定性Vg 氣液色譜法中最重

8、要的定性指標(biāo)氣液色譜法中最重要的定性指標(biāo) 缺點(diǎn)：實(shí)際工作中，需要準(zhǔn)確得知柱中固定液的量缺點(diǎn)：實(shí)際工作中，需要準(zhǔn)確得知柱中固定液的量 ，固定液流失，固定液流失 利用保留值規(guī)律進(jìn)行定性利用保留值規(guī)律進(jìn)行定性 1、利用雙柱或雙體系、利用雙柱或雙體系 同分異構(gòu)體在同一色譜柱上保留值相同同分異構(gòu)體在同一色譜柱上保留值相同 極性不同的色譜柱，極性相差越大，保留至相差也越極性不同的色譜柱，極性相差越大，保留至相差也越 大大 非極性柱與極性柱配合使用非極性柱與極性柱配合使用 同系物的保留值在兩根不同極性色譜柱上呈線性關(guān)系同系物的保留值在兩根不同極性色譜柱上呈線性關(guān)系 非極性主上，各物質(zhì)按沸點(diǎn)高低出峰，極性柱上

9、由化合物非極性主上，各物質(zhì)按沸點(diǎn)高低出峰，極性柱上由化合物 結(jié)構(gòu)決定結(jié)構(gòu)決定 兩個(gè)純物質(zhì)在性能不同的兩根或多根色譜柱上由完全相同兩個(gè)純物質(zhì)在性能不同的兩根或多根色譜柱上由完全相同 的保留值，為同一物質(zhì)的保留值，為同一物質(zhì) 改變色譜條件，添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對比色譜條件改變前后樣改變色譜條件，添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對比色譜條件改變前后樣 品中組分的分離結(jié)果品中組分的分離結(jié)果 GC中的碳數(shù)規(guī)律中的碳數(shù)規(guī)律 一定溫度下，同系物的調(diào)整保留值的變化遵循如下規(guī)律一定溫度下，同系物的調(diào)整保留值的變化遵循如下規(guī)律 lgVr = An+B n為分子的碳數(shù)為分子的碳數(shù) 已知同系物中幾個(gè)組分保留值，推測其他組分的保留值，已知同系

10、物中幾個(gè)組分保留值，推測其他組分的保留值， 再與未知物的色譜圖對比再與未知物的色譜圖對比 先判斷未知物的類型先判斷未知物的類型 適用于任何同系物，有機(jī)化合物含有硅、硫及某些重復(fù)單適用于任何同系物，有機(jī)化合物含有硅、硫及某些重復(fù)單 元（苯環(huán)，元（苯環(huán)，C=C等）的數(shù)目，也適用等）的數(shù)目，也適用 GC中的沸點(diǎn)規(guī)律中的沸點(diǎn)規(guī)律 同族具有相同碳原子數(shù)目的同分異構(gòu)體的對數(shù)調(diào)整保留值同族具有相同碳原子數(shù)目的同分異構(gòu)體的對數(shù)調(diào)整保留值 與沸點(diǎn)的關(guān)系與沸點(diǎn)的關(guān)系 lgVr = CTb + D 與碳數(shù)規(guī)律相同與碳數(shù)規(guī)律相同 CX4，CHX3，CH2X2，CH3X 根據(jù)色譜圖上未知峰的根據(jù)色譜圖上未知峰的Vr值，

11、查處該組分可能的沸點(diǎn)，參值，查處該組分可能的沸點(diǎn)，參 考文獻(xiàn)上有關(guān)沸點(diǎn)的數(shù)據(jù)，就可以推斷該組分為何種化合考文獻(xiàn)上有關(guān)沸點(diǎn)的數(shù)據(jù)，就可以推斷該組分為何種化合 物物 LC中的保留值規(guī)則中的保留值規(guī)則 分離機(jī)理復(fù)雜分離機(jī)理復(fù)雜 不僅與固定相有關(guān)，還與流動(dòng)相不僅與固定相有關(guān)，還與流動(dòng)相 lnk = a + b lnCB + cCB 3. 利用選擇性檢測器定性利用選擇性檢測器定性 FID，有機(jī)化合物，有機(jī)化合物 ECD，含鹵素、電負(fù)性強(qiáng)的原子或基團(tuán)，含鹵素、電負(fù)性強(qiáng)的原子或基團(tuán) FPD，含，含S或或P NPD，含，含N、P UVD，具有雙鍵共軛結(jié)構(gòu)，具有雙鍵共軛結(jié)構(gòu) DAD 雙檢測器定性雙檢測器定性 串

12、聯(lián)，非破壞性串聯(lián)，非破壞性 TCD 并聯(lián)，破壞性，并聯(lián)，破壞性，F(xiàn)ID和和FPD (三通三通) 4. 聯(lián)用方法定性聯(lián)用方法定性 色譜色譜-質(zhì)譜聯(lián)用質(zhì)譜聯(lián)用 GC-MS,LC-MS 色譜色譜-傅里葉變換紅外光譜聯(lián)用傅里葉變換紅外光譜聯(lián)用 GC-FTIR 色譜色譜-核磁共振聯(lián)用核磁共振聯(lián)用 GC-NMR 1) 色譜色譜-質(zhì)譜聯(lián)用質(zhì)譜聯(lián)用 質(zhì)譜靈敏度高，掃描快，給出分子量質(zhì)譜靈敏度高，掃描快，給出分子量 真空匹配和接口，真空匹配和接口，LC-MS NIST庫庫; NIST/EPA/NIH; 應(yīng)用最廣泛應(yīng)用最廣泛 Wiley-農(nóng)藥庫；農(nóng)藥庫； Standard Pesticide Library 藥物

13、庫，藥物庫，Pfleger Drug Library 揮發(fā)油庫揮發(fā)油庫 Essential Oil Library 2) 色譜色譜-傅里葉變換紅外光譜聯(lián)用傅里葉變換紅外光譜聯(lián)用 有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)分析有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)分析 官能團(tuán)定性官能團(tuán)定性 有大量的標(biāo)準(zhǔn)圖譜可查有大量的標(biāo)準(zhǔn)圖譜可查 只適用于氣相和正相液相色譜只適用于氣相和正相液相色譜-MS EPA、Sadtler、Aldrich、Nicolet 色譜色譜-原子光譜聯(lián)用原子光譜聯(lián)用 金屬元素的定性定量分析金屬元素的定性定量分析 金屬元素的不同價(jià)態(tài)獲不同形態(tài)金屬元素的不同價(jià)態(tài)獲不同形態(tài) 色譜色譜-核磁共振聯(lián)用核磁共振聯(lián)用 色譜色譜-色譜聯(lián)用色譜聯(lián)

14、用 GC-GC, GC-LC, LC-LC, LC-CE 液相色譜的輔助技術(shù)定性液相色譜的輔助技術(shù)定性 5. 化學(xué)方法定性化學(xué)方法定性 1) 柱前預(yù)處理法柱前預(yù)處理法 使用物理或化學(xué)消除劑將樣品中某類化合物消除、減少或使用物理或化學(xué)消除劑將樣品中某類化合物消除、減少或 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 消除劑涂在載體上或放入消除柱消除劑涂在載體上或放入消除柱 放在進(jìn)樣的注射器放在進(jìn)樣的注射器 化合物發(fā)生不可逆吸附或化學(xué)反應(yīng)，比對色譜圖化合物發(fā)生不可逆吸附或化學(xué)反應(yīng)，比對色譜圖 加入化學(xué)試劑加入化學(xué)試劑 樣品中含有特定官能團(tuán)樣品中含有特定官能團(tuán) 含羥基的；乙酸酐；保留時(shí)間減小含羥基的；乙酸酐；保留時(shí)間減小 鹵代烷；乙醇

15、鹵代烷；乙醇-硝酸銀；沉淀；吸收峰消失硝酸銀；沉淀；吸收峰消失 伯胺、仲胺；三氟乙酸酐；叔胺伯胺、仲胺；三氟乙酸酐；叔胺 石油，烷烯芳烴；石油，烷烯芳烴；HBr；保留時(shí)間增加；保留時(shí)間增加 酮類；酮類；2,4-二硝基苯肼；橙黃色沉淀二硝基苯肼；橙黃色沉淀 裂解色譜法裂解色譜法 熱裂解有一定規(guī)律性，熱烈后的產(chǎn)物組成和含量是特征性的熱裂解有一定規(guī)律性，熱烈后的產(chǎn)物組成和含量是特征性的 2) 柱上選擇除去法柱上選擇除去法 吸附劑或載體裝入短柱，串聯(lián)在分析柱前吸附劑或載體裝入短柱，串聯(lián)在分析柱前 5A分子篩；分子篩；C3-C11的正構(gòu)烷烴的正構(gòu)烷烴 KOH涂漬的石英粉；羧酸和酚類涂漬的石英粉；羧酸和酚

16、類 酸性預(yù)柱酸性預(yù)柱-吸附胺類吸附胺類 3) 柱后流出物化學(xué)反應(yīng)定性法柱后流出物化學(xué)反應(yīng)定性法 顏色反應(yīng)顏色反應(yīng) 沉淀試劑沉淀試劑 放出氣體放出氣體 使用非破壞性檢測器，使用非破壞性檢測器， 6. 平面色譜的定性法平面色譜的定性法 比移值比移值 固定相性質(zhì)、展開劑的性質(zhì)、被分離組分的性質(zhì)、展開時(shí)溫度和固定相性質(zhì)、展開劑的性質(zhì)、被分離組分的性質(zhì)、展開時(shí)溫度和 展開距離展開距離 載體紙或吸附劑的種類和規(guī)格、薄層厚度、展開劑、平衡時(shí)間、載體紙或吸附劑的種類和規(guī)格、薄層厚度、展開劑、平衡時(shí)間、 展開方式和距離、溫度。展開方式和距離、溫度。 相對比移值相對比移值 斑點(diǎn)的顯色斑點(diǎn)的顯色 自然光觀察半點(diǎn)顏色

17、，紫外光觀察顏色和熒光自然光觀察半點(diǎn)顏色，紫外光觀察顏色和熒光 使用專屬性顯色劑使用專屬性顯色劑 7. 多種方法配合定性多種方法配合定性 GC-MS和保留指數(shù)配合和保留指數(shù)配合 GC-MS和和GC-FTIR配合定性配合定性 色譜定量分析色譜定量分析 定量分析的基本公式定量分析的基本公式 m = f A m，被測組分的量，被測組分的量 f, 被測組分的校正因子被測組分的校正因子 A, 被測組分的峰面積被測組分的峰面積 定量校正因子定量校正因子 使檢測器產(chǎn)生的信號能真實(shí)反映物質(zhì)的量使檢測器產(chǎn)生的信號能真實(shí)反映物質(zhì)的量 對峰面積進(jìn)行校正對峰面積進(jìn)行校正 在定量分析時(shí)引入校正因子在定量分析時(shí)引入校正因

18、子(f)，指單位峰，指單位峰 面積所代表的被測組分的量面積所代表的被測組分的量 1. 絕對校正因子絕對校正因子 同一個(gè)檢測器，同一物質(zhì)其響應(yīng)值只與該同一個(gè)檢測器，同一物質(zhì)其響應(yīng)值只與該 物質(zhì)的量有關(guān)，物質(zhì)的量有關(guān)， 主要由儀器的靈敏度決定，而靈敏度受樣主要由儀器的靈敏度決定，而靈敏度受樣 品、時(shí)間、操作條件等影響品、時(shí)間、操作條件等影響 2. 相對校正因子相對校正因子f 某物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)絕對校正因子之比某物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)絕對校正因子之比 TCD用苯作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用苯作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，F(xiàn)ID用正庚烷用正庚烷 將相對校正因子簡稱為校正因子。將相對校正因子簡稱為校正因子。 樣品一定時(shí)，樣品一定時(shí)，f只與檢測器

19、類型有關(guān)，與色譜條件無關(guān)只與檢測器類型有關(guān)，與色譜條件無關(guān) 1) 質(zhì)量校正因子質(zhì)量校正因子fm 組分的量用質(zhì)量表示組分的量用質(zhì)量表示 mi，Ai被測組分的質(zhì)量和峰面積被測組分的質(zhì)量和峰面積 ms，As標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量和峰面積標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量和峰面積 mi/Ai ms/As = mi ms As Ai fm = fi fs = 2) 摩爾校正因子摩爾校正因子fM Mi被測組分的摩爾質(zhì)量被測組分的摩爾質(zhì)量 Ms標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的摩爾質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的摩爾質(zhì)量 Ms Mi fM =fm 3) 體積校正因子fM Mi被測組分的摩爾質(zhì)量 Ms標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的摩爾質(zhì)量 氣體樣品，摩爾校正因子等于體積校正因子 Vi Vs As

20、Ai fV = 注意：注意： 物質(zhì)的校正因子可以通過查閱文獻(xiàn)或手冊獲得；物質(zhì)的校正因子可以通過查閱文獻(xiàn)或手冊獲得； 相對校正因子隨檢測器的類別和使用的載氣不同而有差異相對校正因子隨檢測器的類別和使用的載氣不同而有差異 有時(shí)候也受物質(zhì)濃度、儀器結(jié)構(gòu)和操作條件的影響有時(shí)候也受物質(zhì)濃度、儀器結(jié)構(gòu)和操作條件的影響 在引用文獻(xiàn)數(shù)據(jù)和與文獻(xiàn)對照時(shí)要注意影響因素在引用文獻(xiàn)數(shù)據(jù)和與文獻(xiàn)對照時(shí)要注意影響因素 3. 峰高定量校正因子峰高定量校正因子fh 適用于用峰高進(jìn)行定量的色譜峰適用于用峰高進(jìn)行定量的色譜峰 受操作條件影響較大，不能直接引用文獻(xiàn)值，在實(shí)際工作受操作條件影響較大，不能直接引用文獻(xiàn)值，在實(shí)際工作 中

21、，需標(biāo)準(zhǔn)純物質(zhì)測定。中，需標(biāo)準(zhǔn)純物質(zhì)測定。 不適用于不對稱的色譜峰和保留時(shí)間過小的色譜峰。不適用于不對稱的色譜峰和保留時(shí)間過小的色譜峰。 4. 響應(yīng)值響應(yīng)值 絕對響應(yīng)值絕對響應(yīng)值 單位量組分通過檢測器時(shí)產(chǎn)生的信號值，也成為絕對靈單位量組分通過檢測器時(shí)產(chǎn)生的信號值，也成為絕對靈 敏度。敏度。 相對響應(yīng)值相對響應(yīng)值 被測樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品絕對應(yīng)答值的比值被測樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品絕對應(yīng)答值的比值。 5. 校正因子的測量方法校正因子的測量方法 純品的待測化合物和標(biāo)準(zhǔn)物純品的待測化合物和標(biāo)準(zhǔn)物 將二者配成已知比例的混合物將二者配成已知比例的混合物 取準(zhǔn)確量的該混合物進(jìn)樣，在一定色譜條件下分析取準(zhǔn)確量的該混合物進(jìn)樣

22、，在一定色譜條件下分析 準(zhǔn)確測量組分和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)所得色譜峰的峰面積準(zhǔn)確測量組分和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)所得色譜峰的峰面積 按上述公式計(jì)算校正因子按上述公式計(jì)算校正因子 注：測量定量校正因子的色譜條件最好與注：測量定量校正因子的色譜條件最好與 樣品分析時(shí)的色譜條件一致或相近。樣品分析時(shí)的色譜條件一致或相近。 6. 確定校正因子的其他方法確定校正因子的其他方法 1) 利用文獻(xiàn)。利用文獻(xiàn)。 文獻(xiàn)查閱氣相色譜檢測器的相關(guān)組分校正因子文獻(xiàn)查閱氣相色譜檢測器的相關(guān)組分校正因子 液相影響因素多，難以重復(fù)文獻(xiàn)中的條件，需要液相影響因素多，難以重復(fù)文獻(xiàn)中的條件，需要 自己進(jìn)行測定自己進(jìn)行測定 2) 校正因子的估算校正因子的估算

23、 熱導(dǎo)池檢測器熱導(dǎo)池檢測器 內(nèi)插法內(nèi)插法 加和法加和法 換算法換算法 氫火焰離子化檢測器氫火焰離子化檢測器 內(nèi)插法內(nèi)插法 有效碳數(shù)法有效碳數(shù)法 定量方法定量方法 把所有出峰組分的含量之和計(jì)為把所有出峰組分的含量之和計(jì)為100%，計(jì)算，計(jì)算 器中某一組分含量百分?jǐn)?shù)的定量方法，稱為歸器中某一組分含量百分?jǐn)?shù)的定量方法，稱為歸 一化法。一化法。 適用條件：待測樣品中各組分均能流出色譜注適用條件：待測樣品中各組分均能流出色譜注 ，在檢測器上都能獨(dú)立的產(chǎn)生信號，在檢測器上都能獨(dú)立的產(chǎn)生信號 1. 歸一化法歸一化法 i = mi mi = fiAi fiAi i i 若樣品中的組分為同系物或同分異構(gòu)體，校正

24、因子近似相若樣品中的組分為同系物或同分異構(gòu)體，校正因子近似相 等，可不用引入校正因子，將峰面積或峰高直接利用歸已等，可不用引入校正因子，將峰面積或峰高直接利用歸已 化公式，化公式， i = Ai Ai i X 100% X 100% 優(yōu)點(diǎn)：簡便、準(zhǔn)確；進(jìn)樣量、流速、柱溫等條件的變化優(yōu)點(diǎn)：簡便、準(zhǔn)確；進(jìn)樣量、流速、柱溫等條件的變化 對定量結(jié)果的影響很小。對定量結(jié)果的影響很小。 缺點(diǎn)缺點(diǎn) 校正因子的測定較為麻煩校正因子的測定較為麻煩 必須所有組分都出峰，重疊色譜峰影響峰面積的測定，必須所有組分都出峰，重疊色譜峰影響峰面積的測定， 引起含量誤差。引起含量誤差。 1.不適用于選擇性檢測器不適用于選擇性

25、檢測器 歸一化法主要用于歸一化法主要用于GC的定量測定，在的定量測定，在HPLC中很少使用中很少使用 。 GC中的中的FID和和TCD，對組分的校正因子相近或有一定的，對組分的校正因子相近或有一定的 規(guī)律，從文獻(xiàn)中可以查到或計(jì)算得到。且當(dāng)為同系物時(shí)，規(guī)律，從文獻(xiàn)中可以查到或計(jì)算得到。且當(dāng)為同系物時(shí)， 可直接利用峰面積歸一化定量可直接利用峰面積歸一化定量 ，操作方便，結(jié)果誤差較，操作方便，結(jié)果誤差較 小。小。 HPLC中，常用的紫外、熒光等檢測器對樣品的響應(yīng)值差中，常用的紫外、熒光等檢測器對樣品的響應(yīng)值差 別較大別較大(即使是同系物即使是同系物)，不能忽略校正因子的影響；另外，不能忽略校正因子的

26、影響；另外 ，該類檢測器對某些組分沒有響應(yīng)值。，該類檢測器對某些組分沒有響應(yīng)值。 外標(biāo)法外標(biāo)法 HPLC分析中比較常用分析中比較常用 操作簡單，計(jì)算方便，快速的操作簡單，計(jì)算方便，快速的絕對定量絕對定量分分 析方法析方法 2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 1. 標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 配制梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在待測組分的分子色譜條件配制梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在待測組分的分子色譜條件 下，等體積進(jìn)樣，作出峰面積對濃度的工作曲線，即為標(biāo)下，等體積進(jìn)樣，作出峰面積對濃度的工作曲線，即為標(biāo) 準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)曲線。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率為絕對校正因子。標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率為絕對校正因子。 2. 樣品

27、測定樣品測定 在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的色譜條件下，對相同量或定量的樣品進(jìn)在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的色譜條件下，對相同量或定量的樣品進(jìn) 行色譜分析，得到色譜圖。行色譜分析，得到色譜圖。 測量色譜峰的峰面積或峰高，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品組分測量色譜峰的峰面積或峰高，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品組分 的濃度，得到樣品的量。的濃度，得到樣品的量。 單點(diǎn)校正法單點(diǎn)校正法 若得到的工作曲線通過原點(diǎn)若得到的工作曲線通過原點(diǎn)，已知待測組分的大概含量，已知待測組分的大概含量， 可采用單點(diǎn)校正法?？刹捎脝吸c(diǎn)校正法。 實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作 配制一個(gè)與待測組分含量相近的已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在配制一個(gè)與待測組分含量相近的已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在 相同的

28、色譜條件下，分別將二者等體積進(jìn)樣，得到色譜圖相同的色譜條件下，分別將二者等體積進(jìn)樣，得到色譜圖 ，比較二者的峰面積或峰高，計(jì)算得出含量。，比較二者的峰面積或峰高，計(jì)算得出含量。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)： 測定工作操作簡單，計(jì)算方便測定工作操作簡單，計(jì)算方便 適合于大批量樣品分析適合于大批量樣品分析 給出的為樣品的絕對量給出的為樣品的絕對量 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 儀器和操作條件對分析結(jié)果影響很大，待測組分需與其他儀器和操作條件對分析結(jié)果影響很大，待測組分需與其他 組分完全分離組分完全分離 色譜條件必須完全一致色譜條件必須完全一致 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度要求較高標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度要求較高 樣品前處理過程的

29、損耗無法補(bǔ)償樣品前處理過程的損耗無法補(bǔ)償 標(biāo)準(zhǔn)曲線使用一段時(shí)間后，需用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校正標(biāo)準(zhǔn)曲線使用一段時(shí)間后，需用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校正 將純物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)物加到待測樣品中，依將純物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)物加到待測樣品中，依 據(jù)待測組分與標(biāo)準(zhǔn)物在檢測器上的響應(yīng)值據(jù)待測組分與標(biāo)準(zhǔn)物在檢測器上的響應(yīng)值( 峰面積或峰高峰面積或峰高)之比，參照標(biāo)準(zhǔn)物的量進(jìn)行之比，參照標(biāo)準(zhǔn)物的量進(jìn)行 定量的方法定量的方法 3. 內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法 i = As Ai fis ms m 相對校正因子，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量，樣品質(zhì)量，相對校正因子，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量，樣品質(zhì)量， 峰面積峰面積(峰高峰高) 選擇合適的內(nèi)標(biāo)物是內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵選擇合適的內(nèi)標(biāo)物是內(nèi)標(biāo)法

30、的關(guān)鍵 內(nèi)標(biāo)物的要求內(nèi)標(biāo)物的要求 樣品中不存在的純物質(zhì)樣品中不存在的純物質(zhì) 與待測組分的性質(zhì)相近，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不與樣品或固與待測組分的性質(zhì)相近，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不與樣品或固 定相發(fā)生反應(yīng)定相發(fā)生反應(yīng) 能與樣品完全互溶能與樣品完全互溶 與樣品中所有組分能完全分離，峰不重疊與樣品中所有組分能完全分離，峰不重疊 加入內(nèi)標(biāo)物的量接近待測組分的量加入內(nèi)標(biāo)物的量接近待測組分的量 稱量準(zhǔn)確稱量準(zhǔn)確 內(nèi)標(biāo)物的校正因子容易得到內(nèi)標(biāo)物的校正因子容易得到 內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法 待測組分的純物質(zhì)配制梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液待測組分的純物質(zhì)配制梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液 取相同體積標(biāo)液加入同樣量的內(nèi)標(biāo)物，在相同的取相同體積標(biāo)液加

31、入同樣量的內(nèi)標(biāo)物，在相同的 色譜條件下分析色譜條件下分析 以濃度為橫坐標(biāo)，以待測組分和內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)值以濃度為橫坐標(biāo)，以待測組分和內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)值 之比為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。之比為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。 相同條件分析樣品相同條件分析樣品 內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn) 可以忽略色譜條件可以忽略色譜條件(柱溫、載氣流速、橋電流和進(jìn)樣量柱溫、載氣流速、橋電流和進(jìn)樣量)對測定結(jié)果的對測定結(jié)果的 影響影響 補(bǔ)償待測組分在樣品處理過程中的損失補(bǔ)償待測組分在樣品處理過程中的損失 消除進(jìn)樣量不準(zhǔn)確產(chǎn)生的誤差，提高定量的準(zhǔn)確度消除進(jìn)樣量不準(zhǔn)確產(chǎn)生的誤差，提高定量的準(zhǔn)確度 缺點(diǎn)缺點(diǎn) 選擇合適的內(nèi)標(biāo)物困難選擇合適的內(nèi)標(biāo)物困難 內(nèi)標(biāo)物稱量要準(zhǔn)確內(nèi)標(biāo)物稱量要準(zhǔn)確 需要測得相對校正因子需要測得相對校正因子 要求待測組分、內(nèi)標(biāo)物和其他組分能完全分離要求待測組分、內(nèi)標(biāo)物和其他組分能完全分離 以樣品中已有組分作為內(nèi)標(biāo)物，將改組分以樣品中已有組分作為內(nèi)標(biāo)物，將改組分 的純品加到待測樣品中，在相同的色譜條的純品加到待測樣品中，在相同的色譜條 件下，比較加入內(nèi)標(biāo)物前后的響應(yīng)值件下，比較加入內(nèi)標(biāo)物前后的響應(yīng)值(峰面峰面 積或峰高積或峰高)，計(jì)算得待測組分的含量。，計(jì)算得待測組分的含量。 4. 疊加法疊加法 操作步驟操作步驟 對樣品進(jìn)行色譜分析對樣品進(jìn)行色譜分析 稱取樣品稱取樣品m，加入內(nèi)標(biāo)物，加入內(nèi)標(biāo)物mi，在同