第11章 熒光分析法

1、第十一章第十一章 熒光分析法熒光分析法 主講主講: : 阿合買提江阿合買提江 熒光分析法熒光分析法 概述概述 w 當(dāng)物質(zhì)分子吸收光子能量而被激發(fā)，然后從激發(fā)當(dāng)物質(zhì)分子吸收光子能量而被激發(fā)，然后從激發(fā) 態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)返回到基態(tài)能級(jí)時(shí)所發(fā)射出的光態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)返回到基態(tài)能級(jí)時(shí)所發(fā)射出的光 稱為熒光稱為熒光(fluorescence) w 根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線位置及其強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)鑒定根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線位置及其強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)鑒定 和物質(zhì)含量測(cè)定的方法稱為熒光分析法和物質(zhì)含量測(cè)定的方法稱為熒光分析法 (fluorometry) 【內(nèi)容提要【內(nèi)容提要】 1、 熒光分析法的基本原理。熒光分析法的基本原理。

2、2、 熒光定量分析方法。熒光定量分析方法。 3、熒光分光光度計(jì)和其他熒光分析技術(shù)。、熒光分光光度計(jì)和其他熒光分析技術(shù)。 第一節(jié)第一節(jié) 熒光分析法的基本原理熒光分析法的基本原理 一、分子熒光分子熒光 （一）分子熒光的產(chǎn)生（一）分子熒光的產(chǎn)生 1 1、分子的電子能級(jí)與激發(fā)過程、分子的電子能級(jí)與激發(fā)過程 分子的基態(tài)分子的基態(tài) 激發(fā)單重態(tài)：激發(fā)單重態(tài)：S S 激發(fā)三重態(tài)：激發(fā)三重態(tài)：T T 電子能級(jí)的多重性電子能級(jí)的多重性: M=2s+1: M=2s+1 s s為總自旋量子數(shù)為總自旋量子數(shù) 單重態(tài)與三重態(tài)的區(qū)別在于電子自旋單重態(tài)與三重態(tài)的區(qū)別在于電子自旋 方向不同，激發(fā)三重態(tài)具有較低能級(jí)。方向不同，激

3、發(fā)三重態(tài)具有較低能級(jí)。 單重態(tài)與三重態(tài)單重態(tài)與三重態(tài) 單重態(tài)單重態(tài)(siglet state,S)： 總自旋量子數(shù)總自旋量子數(shù)s=1/2+(-1/2)=0;多重性多重性M=2s+1=1 基態(tài)基態(tài)(S0) 三重態(tài)三重態(tài)(triplet state,T)： s=1/2+1/2=1； M=2s+1=3 激發(fā)單重態(tài)激發(fā)單重態(tài)(S)激發(fā)三重態(tài)激發(fā)三重態(tài)(T) 2 2、熒光的產(chǎn)生熒光的產(chǎn)生 振動(dòng)弛豫：振動(dòng)弛豫： 它是指在它是指在同一電子能級(jí)中同一電子能級(jí)中，電子由高振動(dòng)能級(jí)，電子由高振動(dòng)能級(jí) 轉(zhuǎn)至低振動(dòng)能級(jí)，而將多余的能量以熱的形式發(fā)轉(zhuǎn)至低振動(dòng)能級(jí)，而將多余的能量以熱的形式發(fā) 出。發(fā)生振動(dòng)弛豫的時(shí)間為出。

4、發(fā)生振動(dòng)弛豫的時(shí)間為1010-12 -12s s數(shù)量級(jí)。 數(shù)量級(jí)。 S2 S1 S0 T1 吸吸 收收 發(fā)發(fā) 射射 熒熒 光光 發(fā)發(fā) 射射 磷磷 光光 系間跨越系間跨越 內(nèi)轉(zhuǎn)內(nèi)轉(zhuǎn) 換換 振動(dòng)弛豫振動(dòng)弛豫 能能 量量 l l 2l l 1 l l 3 外轉(zhuǎn)換外轉(zhuǎn)換 l l 2 T2 內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換 振動(dòng)弛豫振動(dòng)弛豫 S0 S2 S1 T1 吸光l1吸光l2 振動(dòng)弛豫振動(dòng)弛豫 在同一電子能在同一電子能 級(jí)中，電子由級(jí)中，電子由 高振動(dòng)能級(jí)轉(zhuǎn)高振動(dòng)能級(jí)轉(zhuǎn) 至低振動(dòng)能級(jí)，至低振動(dòng)能級(jí)， 而將多余的能而將多余的能 量以量以熱熱 的形式的形式 發(fā)出。發(fā)出。 熒光、磷光熒光、磷光 能級(jí)圖能級(jí)圖 振動(dòng)弛豫振動(dòng)弛

5、豫 內(nèi)轉(zhuǎn)移內(nèi)轉(zhuǎn)移 當(dāng)當(dāng)兩個(gè)電子能級(jí)兩個(gè)電子能級(jí)非?？糠浅？?近以至其振動(dòng)能級(jí)有近以至其振動(dòng)能級(jí)有重疊重疊 時(shí)，常發(fā)生電子由高能級(jí)時(shí)，常發(fā)生電子由高能級(jí) 以以無輻射躍遷方式無輻射躍遷方式轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)移至 低能級(jí)。右圖中指出，處低能級(jí)。右圖中指出，處 于高激發(fā)單重態(tài)的電子，于高激發(fā)單重態(tài)的電子， 通過內(nèi)轉(zhuǎn)移及振動(dòng)弛豫，通過內(nèi)轉(zhuǎn)移及振動(dòng)弛豫， 均躍回到第一激發(fā)單重態(tài)均躍回到第一激發(fā)單重態(tài) 的最低振動(dòng)能級(jí)。的最低振動(dòng)能級(jí)。 S0 S2 S1 T1 吸光吸光l l1吸光吸光l l2 內(nèi)轉(zhuǎn)移內(nèi)轉(zhuǎn)移 熒光、磷光熒光、磷光 能級(jí)圖能級(jí)圖 熒光發(fā)射熒光發(fā)射 處于第一激發(fā)單重態(tài)中處于第一激發(fā)單重態(tài)中 的電子躍回至基態(tài)

6、各振動(dòng)的電子躍回至基態(tài)各振動(dòng) 能級(jí)時(shí)，將得到最大波長(zhǎng)能級(jí)時(shí)，將得到最大波長(zhǎng) 為為3的熒光。注意：的熒光。注意：基態(tài)中基態(tài)中 也有振動(dòng)馳豫躍遷也有振動(dòng)馳豫躍遷。很明。很明 顯，顯，3的波長(zhǎng)較激發(fā)波長(zhǎng)的波長(zhǎng)較激發(fā)波長(zhǎng)1 或或2都長(zhǎng)，而且不論電子開都長(zhǎng)，而且不論電子開 始被激發(fā)至什么高能級(jí)，始被激發(fā)至什么高能級(jí)， 最終將只發(fā)射出波長(zhǎng)最終將只發(fā)射出波長(zhǎng)3為的為的 熒光。熒光的產(chǎn)生在熒光。熒光的產(chǎn)生在10-7- 10-9s內(nèi)完成。內(nèi)完成。 S0 S2 S1 T1 吸光l1吸光l2 熒光l3 熒光熒光 熒光、磷光熒光、磷光 能級(jí)圖能級(jí)圖 外轉(zhuǎn)移外轉(zhuǎn)移 指激發(fā)分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子的相互指激發(fā)分子與溶

7、劑分子或其它溶質(zhì)分子的相互 作用及能量轉(zhuǎn)移，使熒光或磷光強(qiáng)度減弱甚至消作用及能量轉(zhuǎn)移，使熒光或磷光強(qiáng)度減弱甚至消 失。這一現(xiàn)象稱為失。這一現(xiàn)象稱為“熄滅熄滅”或或“猝滅猝滅”。 熒光與磷光的根本區(qū)別：熒光與磷光的根本區(qū)別： 熒光熒光是由激發(fā)是由激發(fā)單重態(tài)單重態(tài)最低振動(dòng)能層至基態(tài)各振最低振動(dòng)能層至基態(tài)各振 動(dòng)能層間躍遷產(chǎn)生的；而動(dòng)能層間躍遷產(chǎn)生的；而磷光磷光是由是由激發(fā)三重態(tài)激發(fā)三重態(tài)的的 最低振動(dòng)能層至基態(tài)各振動(dòng)能層間躍遷產(chǎn)生的。最低振動(dòng)能層至基態(tài)各振動(dòng)能層間躍遷產(chǎn)生的。 體系間跨躍體系間跨躍 指指不不同多重態(tài)間同多重態(tài)間的的 無輻射躍遷無輻射躍遷，例如，例如 S1T1就是一種系間竄就是一種系

8、間竄 躍。通常，發(fā)生系間竄躍。通常，發(fā)生系間竄 躍時(shí)，電子由躍時(shí)，電子由S1的較低的較低 振動(dòng)能級(jí)轉(zhuǎn)移至振動(dòng)能級(jí)轉(zhuǎn)移至T1的較的較 高振動(dòng)能級(jí)處。有時(shí)，高振動(dòng)能級(jí)處。有時(shí)， 通過熱激發(fā)，有可能發(fā)通過熱激發(fā)，有可能發(fā) 生生T1S1，然后由，然后由S1發(fā)發(fā) 生熒光。這是產(chǎn)生延遲生熒光。這是產(chǎn)生延遲 熒光的機(jī)理。熒光的機(jī)理。 S0 S2 S1 T1 吸光吸光l l1吸光吸光l l2 熒光熒光l l3 體系間體系間 跨躍跨躍 熒光、磷光熒光、磷光 能級(jí)圖能級(jí)圖 磷光發(fā)射磷光發(fā)射 電子由基態(tài)單重態(tài)激發(fā)至第電子由基態(tài)單重態(tài)激發(fā)至第 一激發(fā)三重態(tài)的幾率很小，因?yàn)橐患ぐl(fā)三重態(tài)的幾率很小，因?yàn)?這是禁阻躍遷。但

9、是，由第一激這是禁阻躍遷。但是，由第一激 發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，有可發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，有可 能以系間竄躍方式轉(zhuǎn)至第一激發(fā)能以系間竄躍方式轉(zhuǎn)至第一激發(fā) 三重態(tài)，再經(jīng)過振動(dòng)馳豫，轉(zhuǎn)至三重態(tài)，再經(jīng)過振動(dòng)馳豫，轉(zhuǎn)至 其最低振動(dòng)能級(jí)，由此激發(fā)態(tài)躍其最低振動(dòng)能級(jí)，由此激發(fā)態(tài)躍 回至基態(tài)時(shí)，便發(fā)射磷光，這個(gè)回至基態(tài)時(shí)，便發(fā)射磷光，這個(gè) 躍遷過程（躍遷過程（T1S0）也是自旋禁）也是自旋禁 阻的，其發(fā)光速率較慢，約為阻的，其發(fā)光速率較慢，約為10- 4-10s。因此，這種躍遷所發(fā)射的 。因此，這種躍遷所發(fā)射的 光，光，在光照停止后，仍可持續(xù)一在光照停止后，仍可持續(xù)一 段時(shí)間段時(shí)間。 S0 S2 S1

10、T1 吸光吸光l l1吸光吸光l l2 熒光熒光l l3 磷光磷光 磷光磷光 熒光、磷光熒光、磷光 能級(jí)圖能級(jí)圖 (二二 )激發(fā)光譜曲線和熒光、磷光光譜曲線激發(fā)光譜曲線和熒光、磷光光譜曲線 熒光物質(zhì)分子具有兩個(gè)特征光譜：激發(fā)光熒光物質(zhì)分子具有兩個(gè)特征光譜：激發(fā)光 譜和發(fā)射光譜。譜和發(fā)射光譜。 繪制激發(fā)光譜曲線時(shí)，固定測(cè)量波長(zhǎng)為熒繪制激發(fā)光譜曲線時(shí)，固定測(cè)量波長(zhǎng)為熒 光（或磷光）最大發(fā)射波長(zhǎng)，然后改變激發(fā)光（或磷光）最大發(fā)射波長(zhǎng)，然后改變激發(fā) 波長(zhǎng)，根據(jù)所測(cè)得的熒光（磷光）強(qiáng)度與激波長(zhǎng)，根據(jù)所測(cè)得的熒光（磷光）強(qiáng)度與激 發(fā)光波長(zhǎng)的關(guān)系，即可繪制發(fā)光波長(zhǎng)的關(guān)系，即可繪制 激發(fā)光譜曲線激發(fā)光譜曲線。

11、 固定激發(fā)光波長(zhǎng)為其最大激發(fā)波長(zhǎng)，然后固定激發(fā)光波長(zhǎng)為其最大激發(fā)波長(zhǎng)，然后 測(cè)定不同的波長(zhǎng)時(shí)所發(fā)射的熒光或磷光強(qiáng)度，測(cè)定不同的波長(zhǎng)時(shí)所發(fā)射的熒光或磷光強(qiáng)度， 即可繪制即可繪制熒光或磷光光譜曲線。熒光或磷光光譜曲線。 激發(fā)波長(zhǎng)激發(fā)波長(zhǎng) 發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)射波長(zhǎng) 熒光物質(zhì)分子的兩個(gè)特征光譜熒光物質(zhì)分子的兩個(gè)特征光譜 激發(fā)光譜激發(fā)光譜(excitation spectrum)： F l lex 熒光光譜熒光光譜(fluorescence spectrum)： F l lem 200260320380440500560620 熒光激發(fā)光譜熒光激發(fā)光譜 熒光發(fā)射光譜熒光發(fā)射光譜磷光光譜磷光光譜 室溫下菲的乙醇溶

12、液熒（磷）光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜 熒光光譜的普遍特性：熒光光譜的普遍特性： （1）斯托克斯）斯托克斯（Stokes）位移）位移 在溶液中，分子熒光的發(fā)射相對(duì)于吸收位移在溶液中，分子熒光的發(fā)射相對(duì)于吸收位移 到較長(zhǎng)的波長(zhǎng)，到較長(zhǎng)的波長(zhǎng)，稱為稱為Stokes位移位移。這是由于受激。這是由于受激 分子通過振動(dòng)弛豫而失去轉(zhuǎn)動(dòng)能，也由于溶液中分子通過振動(dòng)弛豫而失去轉(zhuǎn)動(dòng)能，也由于溶液中 溶劑分子與受激分子的碰撞，也會(huì)有能量的損失。溶劑分子與受激分子的碰撞，也會(huì)有能量的損失。 因此，在激發(fā)和發(fā)射之間產(chǎn)生了能量損失。因此，在激發(fā)和發(fā)射之間產(chǎn)生了能量損失。 熒光發(fā)射波長(zhǎng)總是大于激發(fā)光波長(zhǎng)！熒光發(fā)

13、射波長(zhǎng)總是大于激發(fā)光波長(zhǎng)！ （ 2）熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān)。）熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān)。 因?yàn)榉肿游樟瞬煌芰康墓庾涌梢杂苫鶓B(tài)因?yàn)榉肿游樟瞬煌芰康墓庾涌梢杂苫鶓B(tài) 激發(fā)到幾個(gè)不同的電子激發(fā)態(tài)，而具有幾個(gè)吸激發(fā)到幾個(gè)不同的電子激發(fā)態(tài)，而具有幾個(gè)吸 收帶。由于較高激發(fā)態(tài)通過內(nèi)轉(zhuǎn)換及振動(dòng)弛豫收帶。由于較高激發(fā)態(tài)通過內(nèi)轉(zhuǎn)換及振動(dòng)弛豫 回到第一電子激發(fā)態(tài)的幾率較高，遠(yuǎn)大于由高回到第一電子激發(fā)態(tài)的幾率較高，遠(yuǎn)大于由高 能激發(fā)態(tài)直接發(fā)射光子的速度，故在熒光發(fā)射能激發(fā)態(tài)直接發(fā)射光子的速度，故在熒光發(fā)射 時(shí)，不論用哪一個(gè)波長(zhǎng)的光輻射激發(fā)，電子都時(shí)，不論用哪一個(gè)波長(zhǎng)的光輻射激發(fā)，電子都 從第一電子激

14、發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能層返回到基態(tài)從第一電子激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能層返回到基態(tài) 的各個(gè)振動(dòng)能層的各個(gè)振動(dòng)能層，所以熒光發(fā)射光譜與激發(fā)波所以熒光發(fā)射光譜與激發(fā)波 長(zhǎng)無關(guān)。長(zhǎng)無關(guān)。 （3）鏡像規(guī)則）鏡像規(guī)則 通常熒光光譜和它的吸收光譜呈鏡像對(duì)稱通常熒光光譜和它的吸收光譜呈鏡像對(duì)稱 關(guān)系。關(guān)系。 吸收光譜是物質(zhì)分子由基態(tài)激發(fā)至第一電吸收光譜是物質(zhì)分子由基態(tài)激發(fā)至第一電 子激發(fā)態(tài)的各振動(dòng)能層形成的。其形狀決定于子激發(fā)態(tài)的各振動(dòng)能層形成的。其形狀決定于 第一電子激發(fā)態(tài)中各振動(dòng)能層的分布情況。第一電子激發(fā)態(tài)中各振動(dòng)能層的分布情況。 二、熒光與分子結(jié)構(gòu)二、熒光與分子結(jié)構(gòu) （一）熒光壽命和熒光效率（一）熒光壽命和熒光效

15、率 1.光量子產(chǎn)率（熒光效率）光量子產(chǎn)率（熒光效率） 熒光量子產(chǎn)率也叫熒光效率或量子效率，它表示物質(zhì)熒光量子產(chǎn)率也叫熒光效率或量子效率，它表示物質(zhì)發(fā)射發(fā)射 熒光的能力熒光的能力，通常用下式表示，通常用下式表示 = 發(fā)射熒光分子數(shù)發(fā)射熒光分子數(shù) / 激發(fā)分子總數(shù)激發(fā)分子總數(shù) 或或 = 發(fā)射熒光量子數(shù)發(fā)射熒光量子數(shù) / 吸收光量子數(shù)吸收光量子數(shù) 在產(chǎn)生熒光的過程中，涉及到許多在產(chǎn)生熒光的過程中，涉及到許多輻射輻射和和無輻射躍遷無輻射躍遷過程，過程， 如熒光發(fā)射、內(nèi)轉(zhuǎn)移，系間竄躍和外轉(zhuǎn)移等。很明顯，如熒光發(fā)射、內(nèi)轉(zhuǎn)移，系間竄躍和外轉(zhuǎn)移等。很明顯， 熒光的量子產(chǎn)率，將與上述每一個(gè)過程的速率常數(shù)有關(guān)。熒

16、光的量子產(chǎn)率，將與上述每一個(gè)過程的速率常數(shù)有關(guān)。 2.熒光壽命熒光壽命 除去激發(fā)光源后分子的熒光強(qiáng)度降低到最大熒光強(qiáng)度的除去激發(fā)光源后分子的熒光強(qiáng)度降低到最大熒光強(qiáng)度的1/e 所需的時(shí)間所需的時(shí)間 （二）、（二）、 熒光與有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)熒光與有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu) 分子產(chǎn)生熒光必須具備的條件：分子產(chǎn)生熒光必須具備的條件： （1）具有合適的結(jié)構(gòu)，能吸收強(qiáng)的紫外可見光；）具有合適的結(jié)構(gòu)，能吸收強(qiáng)的紫外可見光； （2）具有一定的熒光效率。）具有一定的熒光效率。 （1）、共軛效應(yīng)）、共軛效應(yīng) 實(shí)驗(yàn)證明，容易實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)證明，容易實(shí)現(xiàn) 激發(fā)激發(fā) 的芳香族化合物容易的芳香族化合物容易 發(fā)生熒光，能發(fā)生熒光的脂肪族

17、和脂環(huán)族化合物極少發(fā)生熒光，能發(fā)生熒光的脂肪族和脂環(huán)族化合物極少 （僅少數(shù)高度共軛體系化合物除外）。此外，（僅少數(shù)高度共軛體系化合物除外）。此外，增加體系增加體系 的共軛度，熒光效率增大的共軛度，熒光效率增大。 共軛效應(yīng)使熒光增強(qiáng)的原因共軛效應(yīng)使熒光增強(qiáng)的原因 ： 主要是由于增大熒光物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)，有利于產(chǎn)主要是由于增大熒光物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)，有利于產(chǎn) 生更多的激發(fā)態(tài)分子，從而有利于熒光的發(fā)生。生更多的激發(fā)態(tài)分子，從而有利于熒光的發(fā)生。 長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu)長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu) （芳香環(huán)、稠環(huán)或雜環(huán)）（芳香環(huán)、稠環(huán)或雜環(huán)） 共軛系統(tǒng)共軛系統(tǒng) f l lex、 l lem CH2OCOCH 3 VA l lex

18、=327nm， l lem=510nm 稠芳環(huán)分子的幾何排列對(duì)熒光的影響稠芳環(huán)分子的幾何排列對(duì)熒光的影響 含有長(zhǎng)共軛雙鍵的脂肪烴含有長(zhǎng)共軛雙鍵的脂肪烴 (2)、剛性平面結(jié)構(gòu)、剛性平面結(jié)構(gòu) 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，多數(shù)具有剛性平面實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，多數(shù)具有剛性平面 結(jié)構(gòu)的有機(jī)分子具有強(qiáng)烈的熒光。結(jié)構(gòu)的有機(jī)分子具有強(qiáng)烈的熒光。 因?yàn)檫@種結(jié)構(gòu)可以減少分子的振因?yàn)檫@種結(jié)構(gòu)可以減少分子的振 動(dòng)，使分子與溶劑或其它溶質(zhì)分動(dòng)，使分子與溶劑或其它溶質(zhì)分 子的相互作用減少，也就減少了子的相互作用減少，也就減少了 碰撞去活的可能性。碰撞去活的可能性。 剛性平面結(jié)構(gòu)：可降低分子振動(dòng)，減少與溶劑的剛性平面結(jié)構(gòu)：可降低分子振動(dòng)，減少與溶劑的

19、 相互作用，故具有很強(qiáng)的熒光。如熒光素和酚酞有相互作用，故具有很強(qiáng)的熒光。如熒光素和酚酞有 相似結(jié)構(gòu)，相似結(jié)構(gòu)，熒光素有熒光素有很強(qiáng)的熒光，很強(qiáng)的熒光，酚酞卻沒有酚酞卻沒有。 （3）、）、 取代基效應(yīng)取代基效應(yīng) 化合物化合物 熒光相對(duì)強(qiáng)度熒光相對(duì)強(qiáng)度 苯苯 10 苯酚苯酚 18 苯胺苯胺 20 苯甲酸苯甲酸 3 硝基苯硝基苯 0 OH NH2 COOH NO2 給電子基團(tuán)：給電子基團(tuán)：如如OH, OR, NH2, CN， NR2等，等， 增強(qiáng)熒光。增強(qiáng)熒光。 吸電子基團(tuán)：吸電子基團(tuán)：如如COOH, , NO2, NO等，等， 減弱甚至熄滅熒光。減弱甚至熄滅熒光。 C O （三）熒光試劑（三）熒

20、光試劑 w作用：作用：產(chǎn)生強(qiáng)熒光性產(chǎn)物產(chǎn)生強(qiáng)熒光性產(chǎn)物 1. 熒光胺熒光胺 2. 鄰苯二甲醛鄰苯二甲醛 3. 1-二甲氨基二甲氨基-5-氯化磺酰萘氯化磺酰萘 4. 測(cè)定無機(jī)離子的熒光試劑測(cè)定無機(jī)離子的熒光試劑 （三）影響熒光強(qiáng)度的外部因素（三）影響熒光強(qiáng)度的外部因素 1.溫度溫度 溫度上升使熒光強(qiáng)度下降。其中一個(gè)原因是溫度上升使熒光強(qiáng)度下降。其中一個(gè)原因是分子的分子的 內(nèi)部能量轉(zhuǎn)化作用內(nèi)部能量轉(zhuǎn)化作用。當(dāng)激發(fā)分子接受額外熱能時(shí)，有。當(dāng)激發(fā)分子接受額外熱能時(shí)，有 可能使激發(fā)能轉(zhuǎn)換為基態(tài)的振動(dòng)能量，隨后迅速振動(dòng)可能使激發(fā)能轉(zhuǎn)換為基態(tài)的振動(dòng)能量，隨后迅速振動(dòng) 弛豫而喪失振動(dòng)能量。另一個(gè)原因是弛豫而喪

21、失振動(dòng)能量。另一個(gè)原因是碰撞頻率增加碰撞頻率增加， 使外轉(zhuǎn)換的去活幾率增加。使外轉(zhuǎn)換的去活幾率增加。 2.溶劑溶劑 一般情況，一般情況，熒光波長(zhǎng)隨溶劑極性的增強(qiáng)而長(zhǎng)移熒光波長(zhǎng)隨溶劑極性的增強(qiáng)而長(zhǎng)移，熒，熒 光強(qiáng)度增強(qiáng)。光強(qiáng)度增強(qiáng)。 3、溶液溶液pH值值 帶有酸性或堿性官能團(tuán)的大多數(shù)芳香族化帶有酸性或堿性官能團(tuán)的大多數(shù)芳香族化 合物的熒光與溶液的合物的熒光與溶液的pH有關(guān)。不同的有關(guān)。不同的pH值，值， 化合物所處狀態(tài)不同，不同的化合物或化合化合物所處狀態(tài)不同，不同的化合物或化合 物的分子與其離子在電子構(gòu)型上有所不同，物的分子與其離子在電子構(gòu)型上有所不同， 因此，它們的熒光強(qiáng)度因此，它們的熒光強(qiáng)

22、度與溶液的與溶液的pH值有關(guān)值有關(guān)。 4、溶液熒光的猝滅、溶液熒光的猝滅 熒光物質(zhì)分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子相互作用，熒光物質(zhì)分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子相互作用， 引起熒光強(qiáng)度降低或熒光強(qiáng)度與濃度不成線性關(guān)系的引起熒光強(qiáng)度降低或熒光強(qiáng)度與濃度不成線性關(guān)系的 現(xiàn)象?，F(xiàn)象。 1. 碰撞猝滅，碰撞猝滅，A：熒光物質(zhì)分子與猝滅劑分子；：熒光物質(zhì)分子與猝滅劑分子； B：熒光物質(zhì)分子間的碰撞。：熒光物質(zhì)分子間的碰撞。 2.生成不發(fā)生熒光的配合物。生成不發(fā)生熒光的配合物。 3.單重態(tài)變?yōu)槎嘀貞B(tài)。單重態(tài)變?yōu)槎嘀貞B(tài)。 4.氧的熄滅作用。氧的熄滅作用。 5、散射光、散射光 本節(jié)內(nèi)容小結(jié)本節(jié)內(nèi)容小結(jié) 熒光光譜的

23、特征熒光光譜的特征 斯托克斯位移斯托克斯位移(Stokes shift) 熒光發(fā)射波長(zhǎng)總是大于激發(fā)光熒光發(fā)射波長(zhǎng)總是大于激發(fā)光 波長(zhǎng)。波長(zhǎng)。 熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān)熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān) 熒光光譜與激發(fā)光譜呈鏡像關(guān)系熒光光譜與激發(fā)光譜呈鏡像關(guān)系 物質(zhì)分子能發(fā)射熒光的兩個(gè)必要條件物質(zhì)分子能發(fā)射熒光的兩個(gè)必要條件 f f） 有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)與熒光的關(guān)系有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)與熒光的關(guān)系 長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu)長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu) 共軛系統(tǒng)共軛系統(tǒng) f f l lex ex、 、 l lem em 分子的剛性和共平面性分子的剛性和共平面性 共軛系統(tǒng)的剛性和共平面性共軛系統(tǒng)的剛性和共平面性 f f 聯(lián)苯f=0.2

24、 芴f=1.0 O COO- -O 酚酞 OO COO - -O 熒光素鈉 N OH N O Mg1/2 8-羥基喹啉 8-羥基喹啉鎂 SO3Na N CH3 CH3 N NaO3S H3C CH3 1-二甲氨基萘-7-磺酸鹽 1-二甲氨基萘-8-磺酸鹽 f=0.75 f=0.03 位阻效應(yīng)位阻效應(yīng) 取代基取代基 供電子基：供電子基： NH2、-OH、-NHR、-NR2、-CN f ，F(xiàn) 吸電子基吸電子基： -NO2、-COOH、-NHCOCH3、 -C=O、-NO、-SH、-X f ，F(xiàn)，甚至熒光熄滅，甚至熒光熄滅 -R、-SO3H、-NH3+對(duì)對(duì) f 無影響無影響 一、熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的

25、關(guān)系一、熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的關(guān)系 前提：前提：ECL0.05 稀溶液分析法稀溶液分析法 高靈敏度高靈敏度 比例常數(shù)比例常數(shù) 熒光效率熒光效率激發(fā)光強(qiáng)度激發(fā)光強(qiáng)度 第二節(jié)第二節(jié) 熒光定量分析方法熒光定量分析方法 溶液中熒光物質(zhì)被激發(fā)后，溶液中熒光物質(zhì)被激發(fā)后，向各個(gè)方向發(fā)射向各個(gè)方向發(fā)射 熒光熒光，為避免干擾應(yīng)該在垂直于激發(fā)光源的方，為避免干擾應(yīng)該在垂直于激發(fā)光源的方 向檢測(cè)熒光強(qiáng)度向檢測(cè)熒光強(qiáng)度 二、定量分析方法二、定量分析方法 1標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 配成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定這些溶液的熒光強(qiáng)度，配成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定這些溶液的熒光強(qiáng)度， 以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)繪以熒光強(qiáng)

26、度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)繪 制標(biāo)準(zhǔn)曲線。制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 繪制時(shí)，常采用系列中某一標(biāo)準(zhǔn)溶液作為基準(zhǔn)，繪制時(shí)，常采用系列中某一標(biāo)準(zhǔn)溶液作為基準(zhǔn)， 將空白溶液的熒光強(qiáng)度讀數(shù)調(diào)至將空白溶液的熒光強(qiáng)度讀數(shù)調(diào)至0，將該標(biāo)準(zhǔn)溶液，將該標(biāo)準(zhǔn)溶液 的熒光強(qiáng)度讀數(shù)調(diào)至的熒光強(qiáng)度讀數(shù)調(diào)至100或或50，然后測(cè)定系列中，然后測(cè)定系列中 其它各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度。其它各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度。 x s x s C C FF FF 0 0 s s x x C FF FF C 0 0 第三節(jié)第三節(jié) 熒光分光光度計(jì)和其他熒光分光光度計(jì)和其他 熒光分析技術(shù)熒光分析技術(shù) 一、熒光分光光度計(jì)一、熒光分光光度計(jì) 光源 激發(fā)光

27、 單色器 熒光 單色器 檢測(cè)器樣品池 放大器 顯示器 I0 I If 光光 源源 第一第一 單色器單色器 第二第二 單色器單色器 激發(fā)激發(fā) 熒光熒光 樣品池樣品池 檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng) 熒光光度計(jì)示意圖熒光光度計(jì)示意圖 熒光熒光 檢測(cè)器檢測(cè)器 光源與檢測(cè)器呈光源與檢測(cè)器呈90度角，以避開激發(fā)光、度角，以避開激發(fā)光、 雜散光的干擾，增加檢測(cè)靈敏度。雜散光的干擾，增加檢測(cè)靈敏度。 I0 If It 紫外可見紫外可見 檢測(cè)器檢測(cè)器 分光系統(tǒng)分光系統(tǒng)(雙單色器雙單色器) 第一單色器作用：選擇激發(fā)波長(zhǎng)第一單色器作用：選擇激發(fā)波長(zhǎng) 第二單色器作用：分離出熒光發(fā)射波長(zhǎng)第二單色器作用：分離出熒光發(fā)射波長(zhǎng) 樣品池樣

28、品池 四面透光四面透光 熒光分光光度計(jì)與紫外分光光度計(jì)的區(qū)別熒光分光光度計(jì)與紫外分光光度計(jì)的區(qū)別 紫外紫外-可見分光光度計(jì)可見分光光度計(jì)熒光分光光度計(jì)熒光分光光度計(jì) 光路光路 光源光源 儀器儀器 校正校正 吸收池吸收池 入射光與吸收光入射光與吸收光 同方向同方向 入射光與熒光垂入射光與熒光垂 直方向直方向 兩種光源兩種光源(紫外紫外+可見可見) 一種光源一種光源(紫外紫外) 空白溶液空白溶液(F=0) 熒光對(duì)照品溶液熒光對(duì)照品溶液 (F=100%或或50%) 空白溶液空白溶液 (T=100%) 紫外無吸收紫外無吸收 兩面透光兩面透光 低熒光材料低熒光材料 四面透光四面透光 （一）光源（一）光源

29、 常見的光源有常見的光源有氙燈氙燈和高壓和高壓汞燈汞燈。其功率。其功率 為為100-500w之間。之間。 （二）單色器（二）單色器 激發(fā)單色器激發(fā)單色器用于熒光激發(fā)光譜的掃描和用于熒光激發(fā)光譜的掃描和 選擇激發(fā)波長(zhǎng)選擇激發(fā)波長(zhǎng)；發(fā)射單色器；發(fā)射單色器用于掃描熒光用于掃描熒光 發(fā)射光譜及分離熒光發(fā)射波長(zhǎng)。發(fā)射光譜及分離熒光發(fā)射波長(zhǎng)。 （三）樣品池（三）樣品池 熒光測(cè)量用的樣品池通常用熒光測(cè)量用的樣品池通常用四面透光四面透光 的正方形石英池的正方形石英池。 （四）檢測(cè)器（四）檢測(cè)器 普遍使用的是普遍使用的是光電倍增管光電倍增管做檢測(cè)器，做檢測(cè)器， 新一代的儀器用電荷耦合元件檢測(cè)器，新一代的儀器用電

30、荷耦合元件檢測(cè)器， 可一次獲得熒光二維光譜?？梢淮潍@得熒光二維光譜。 其他熒光分析技術(shù)其他熒光分析技術(shù) 激光熒光分析激光熒光分析 時(shí)間分辨熒光分析時(shí)間分辨熒光分析 (time-resolved fluorometry) 同步熒光分析同步熒光分析 膠束增敏熒光分析膠束增敏熒光分析 激光熒光分析激光熒光分析 時(shí)間分辨熒光分析時(shí)間分辨熒光分析(time-resolved fluorometry) 原理：原理：激發(fā)和檢測(cè)之間延緩一段時(shí)間，具有不同熒光激發(fā)和檢測(cè)之間延緩一段時(shí)間，具有不同熒光 壽命的物質(zhì)分別檢測(cè)壽命的物質(zhì)分別檢測(cè) 激發(fā)光源：脈沖激光激發(fā)光源：脈沖激光 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：檢測(cè)時(shí)排除干擾，無需化學(xué)

31、預(yù)處理檢測(cè)時(shí)排除干擾，無需化學(xué)預(yù)處理 激發(fā)光源：波長(zhǎng)更短、強(qiáng)度更大的激光激發(fā)光源：波長(zhǎng)更短、強(qiáng)度更大的激光 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：提高靈敏度提高靈敏度(樣品量樣品量臨界膠束濃臨界膠束濃 度度CMC)的表面活性劑溶液的表面活性劑溶液 親水基親水基疏水疏水基基 本章小結(jié)本章小結(jié) 1基本概念：基本概念： 熒光：熒光：物質(zhì)分子接受光子能量而被激發(fā)，物質(zhì)分子接受光子能量而被激發(fā)， 然后從激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)返回基態(tài)時(shí)發(fā)然后從激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)返回基態(tài)時(shí)發(fā) 射出的光稱為熒光。射出的光稱為熒光。 振動(dòng)弛豫：振動(dòng)弛豫：物質(zhì)分子吸收能量后，躍遷到物質(zhì)分子吸收能量后，躍遷到 電子激發(fā)態(tài)的幾個(gè)振動(dòng)能級(jí)上。激發(fā)態(tài)分子電子激發(fā)

32、態(tài)的幾個(gè)振動(dòng)能級(jí)上。激發(fā)態(tài)分子 通過與溶劑分子的碰撞而將部分振動(dòng)能量傳通過與溶劑分子的碰撞而將部分振動(dòng)能量傳 遞給溶劑分子，其電子則返回到同一電子激遞給溶劑分子，其電子則返回到同一電子激 發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)的過程。發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)的過程。 內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換（簡(jiǎn)稱內(nèi)轉(zhuǎn)換）：內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換（簡(jiǎn)稱內(nèi)轉(zhuǎn)換）：當(dāng)兩個(gè)電子激當(dāng)兩個(gè)電子激 發(fā)態(tài)之間的能量相差較小以致其振動(dòng)能級(jí)有重疊時(shí)，發(fā)態(tài)之間的能量相差較小以致其振動(dòng)能級(jí)有重疊時(shí)， 受激分子常由高電子能級(jí)以無輻射方式轉(zhuǎn)移至低電子受激分子常由高電子能級(jí)以無輻射方式轉(zhuǎn)移至低電子 能級(jí)的過程。能級(jí)的過程。 熒光發(fā)射：熒光發(fā)射：處于激發(fā)單重態(tài)的分子，通過內(nèi)轉(zhuǎn)換及處于激發(fā)

33、單重態(tài)的分子，通過內(nèi)轉(zhuǎn)換及 振動(dòng)弛豫，返回到第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，振動(dòng)弛豫，返回到第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)， 然后再以輻射形式發(fā)射光量子而返回至基態(tài)的任一振然后再以輻射形式發(fā)射光量子而返回至基態(tài)的任一振 動(dòng)能級(jí)上，這時(shí)發(fā)射的光量子稱為熒光。動(dòng)能級(jí)上，這時(shí)發(fā)射的光量子稱為熒光。 外部能量轉(zhuǎn)換（簡(jiǎn)稱外轉(zhuǎn)換）：外部能量轉(zhuǎn)換（簡(jiǎn)稱外轉(zhuǎn)換）：在溶液中激在溶液中激 發(fā)態(tài)分子與溶劑分子及其他溶質(zhì)分子之間相互發(fā)態(tài)分子與溶劑分子及其他溶質(zhì)分子之間相互 碰撞而以熱能的形式放出能量的過程。碰撞而以熱能的形式放出能量的過程。 體系間跨越：體系間跨越：在某些情況下處于激發(fā)態(tài)分子在某些情況下處于激發(fā)態(tài)分子 的

34、電子發(fā)生自旋反轉(zhuǎn)而使分子的多重性發(fā)生變的電子發(fā)生自旋反轉(zhuǎn)而使分子的多重性發(fā)生變 化，分子由激發(fā)單重態(tài)跨越到激發(fā)三重態(tài)的過化，分子由激發(fā)單重態(tài)跨越到激發(fā)三重態(tài)的過 程。程。 磷光發(fā)射：磷光發(fā)射：經(jīng)過體系間跨越的分子再通過振動(dòng)經(jīng)過體系間跨越的分子再通過振動(dòng) 弛豫降至激發(fā)三重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，分子在此弛豫降至激發(fā)三重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，分子在此 三重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)存活一段時(shí)間后返回至基三重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)存活一段時(shí)間后返回至基 態(tài)的各個(gè)振動(dòng)能級(jí)而發(fā)出的光輻射。態(tài)的各個(gè)振動(dòng)能級(jí)而發(fā)出的光輻射。 激發(fā)光譜：激發(fā)光譜：是熒光強(qiáng)度（是熒光強(qiáng)度（F）對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)（）對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)（ex） 的關(guān)系曲線，它表示不同激發(fā)

35、波長(zhǎng)的輻射引起物的關(guān)系曲線，它表示不同激發(fā)波長(zhǎng)的輻射引起物 質(zhì)發(fā)射某一波長(zhǎng)熒光的相對(duì)效率。質(zhì)發(fā)射某一波長(zhǎng)熒光的相對(duì)效率。 發(fā)射光譜（稱熒光光譜）：發(fā)射光譜（稱熒光光譜）：是熒光強(qiáng)度（是熒光強(qiáng)度（F） 對(duì)發(fā)射波長(zhǎng)（對(duì)發(fā)射波長(zhǎng)（em）的關(guān)系曲線，它表示當(dāng)激發(fā)）的關(guān)系曲線，它表示當(dāng)激發(fā) 光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度保持不變時(shí)，在所發(fā)射的熒光中光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度保持不變時(shí)，在所發(fā)射的熒光中 各種波長(zhǎng)組分的相對(duì)強(qiáng)度。各種波長(zhǎng)組分的相對(duì)強(qiáng)度。 2基本原理基本原理 （1）熒光是物質(zhì)分子接受光子能量被激熒光是物質(zhì)分子接受光子能量被激 發(fā)后，從激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)返回基態(tài)發(fā)后，從激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)返回基態(tài) 時(shí)發(fā)射出的光。熒光分

36、析法具有靈敏度高、時(shí)發(fā)射出的光。熒光分析法具有靈敏度高、 選擇性好的優(yōu)點(diǎn)。選擇性好的優(yōu)點(diǎn)。 （2）熒光光譜具有如下特征：熒光波長(zhǎng)熒光光譜具有如下特征：熒光波長(zhǎng) 總是大于激發(fā)光波長(zhǎng)、熒光光譜的形狀與總是大于激發(fā)光波長(zhǎng)、熒光光譜的形狀與 激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān)、熒光光譜與激發(fā)光譜存在激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān)、熒光光譜與激發(fā)光譜存在 “鏡像對(duì)稱鏡像對(duì)稱”關(guān)系。關(guān)系。 （3）能夠發(fā)射熒光的物質(zhì)應(yīng)同時(shí)具備的兩個(gè)條件：能夠發(fā)射熒光的物質(zhì)應(yīng)同時(shí)具備的兩個(gè)條件： 物質(zhì)分子必須有強(qiáng)的紫外物質(zhì)分子必須有強(qiáng)的紫外-可見吸收可見吸收；物質(zhì)分子必物質(zhì)分子必 須有一定的熒光效率須有一定的熒光效率。 （4）在熒光法測(cè)定時(shí)常有散射光存在，主要有瑞

37、在熒光法測(cè)定時(shí)常有散射光存在，主要有瑞 利散射和拉曼散射。利散射和拉曼散射。瑞利散射：瑞利散射：光子和物質(zhì)分子發(fā)光子和物質(zhì)分子發(fā) 生彈性碰撞，不發(fā)生能量的交換，僅僅是生彈性碰撞，不發(fā)生能量的交換，僅僅是光子運(yùn)動(dòng)光子運(yùn)動(dòng) 方向發(fā)生改變方向發(fā)生改變，其波長(zhǎng)與入射光波長(zhǎng)相同。，其波長(zhǎng)與入射光波長(zhǎng)相同。拉曼散拉曼散 射：射：光子和物質(zhì)分子發(fā)生非彈性碰撞時(shí)，在光子運(yùn)光子和物質(zhì)分子發(fā)生非彈性碰撞時(shí)，在光子運(yùn) 動(dòng)方向發(fā)生改變的同時(shí)，光子與物質(zhì)分子發(fā)生能量動(dòng)方向發(fā)生改變的同時(shí)，光子與物質(zhì)分子發(fā)生能量 的交換，發(fā)射出比入射光稍長(zhǎng)或稍短的光。波長(zhǎng)比的交換，發(fā)射出比入射光稍長(zhǎng)或稍短的光。波長(zhǎng)比 入射光更長(zhǎng)的拉曼散射

38、光對(duì)熒光測(cè)定有干擾。采取入射光更長(zhǎng)的拉曼散射光對(duì)熒光測(cè)定有干擾。采取 一定的措施（如選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)或溶劑）可消除拉一定的措施（如選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)或溶劑）可消除拉 曼光的干擾。曼光的干擾。 （5）熒光法常被用于熒光法常被用于定性和定量分析定性和定量分析，但其定量，但其定量 應(yīng)用更為廣泛。應(yīng)用更為廣泛。熒光分析法定量的依據(jù)是熒光分析法定量的依據(jù)是：當(dāng)：當(dāng) ECL0.05時(shí)，時(shí)，F(xiàn)=2.3KI0ECl=KC?？刹捎玫亩??？刹捎玫亩?分析方法有：標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比例法、聯(lián)立方程式分析方法有：標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比例法、聯(lián)立方程式 法。法。 （6）用于熒光法測(cè)定的儀器是熒光分光光度計(jì)，用于熒光法測(cè)定的儀器是熒光分

39、光光度計(jì)， 其主要部件包括：其主要部件包括：激發(fā)光源激發(fā)光源、激發(fā)單色器激發(fā)單色器（置于（置于 樣品池前）和樣品池前）和發(fā)射單色器發(fā)射單色器（置于樣品池后）、（置于樣品池后）、樣樣 品池品池及及檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)。 （7）為進(jìn)一步提高熒光分析法靈敏度和選擇性，為進(jìn)一步提高熒光分析法靈敏度和選擇性， 發(fā)展了其他的熒光分析技術(shù)，主要有激光熒光分發(fā)展了其他的熒光分析技術(shù)，主要有激光熒光分 析、時(shí)間分辨熒光和同步熒光分析等。析、時(shí)間分辨熒光和同步熒光分析等。 1、永停滴定法的檢測(cè)信號(hào)是：、永停滴定法的檢測(cè)信號(hào)是： A、電動(dòng)勢(shì)、電動(dòng)勢(shì)B、電解電流、電解電流 C、電壓、電壓D、電導(dǎo)、電導(dǎo)E、電量、電量 （B

40、） 2、下列關(guān)于、下列關(guān)于躍遷吸收的特征說法躍遷吸收的特征說法 正確的是：正確的是： A、吸收波長(zhǎng)小于、吸收波長(zhǎng)小于200nm B、吸收波長(zhǎng)小于、吸收波長(zhǎng)小于100nm C、摩爾吸光系數(shù)非常小、摩爾吸光系數(shù)非常小 D、比吸光系數(shù)很小、比吸光系數(shù)很小 E、共軛鍵越長(zhǎng)，吸收所需能量越小、共軛鍵越長(zhǎng)，吸收所需能量越小 （E） 3、下列哪種檢測(cè)器不能用于紫外、下列哪種檢測(cè)器不能用于紫外 可見分光光度計(jì)可見分光光度計(jì) A、光電池、光電池B、光電管、光電管 C、光電倍增管、光電倍增管 D、光二極管陣列檢測(cè)器、光二極管陣列檢測(cè)器 E、真空熱電偶、真空熱電偶 （E） 4、氘燈的發(fā)射波長(zhǎng)為、氘燈的發(fā)射波長(zhǎng)為 A

41、、100-200nmB、200-300nm C、200-400nm D、400-500nm E、400-800nm （C） 5、紫外區(qū)定量分析時(shí)，應(yīng)選用下列哪種材料、紫外區(qū)定量分析時(shí)，應(yīng)選用下列哪種材料 的樣品池的樣品池 A、石英、石英B、水晶、水晶C、玻璃、玻璃 D、瑪瑙、瑪瑙E、塑料、塑料 （A） 6、由于化合物改變或其它原因，使吸光度減、由于化合物改變或其它原因，使吸光度減 小的現(xiàn)象為小的現(xiàn)象為 A、增色效應(yīng)、增色效應(yīng)B、減色效應(yīng)、減色效應(yīng)C、酸效應(yīng)、酸效應(yīng) D、鹽效應(yīng)、鹽效應(yīng)E、同離子效應(yīng)、同離子效應(yīng) （B） 7 7、芳香族化合物的特征吸收帶是、芳香族化合物的特征吸收帶是 A A、R

42、R帶帶B B、K K帶帶C C、B B帶帶D D、E E帶帶 E E、B B帶和帶和E E帶帶 （E E） 8 8、分子從（）的最低振動(dòng)能級(jí)以、分子從（）的最低振動(dòng)能級(jí)以 發(fā)光的形式回到基態(tài)所發(fā)的光稱為熒光發(fā)光的形式回到基態(tài)所發(fā)的光稱為熒光 A A、第一激發(fā)單重態(tài)、第一激發(fā)單重態(tài)B B、第二激發(fā)單重態(tài)、第二激發(fā)單重態(tài) C C、第三激發(fā)單重態(tài)、第三激發(fā)單重態(tài) D D、第一激發(fā)三重態(tài)、第一激發(fā)三重態(tài) E E、第二激發(fā)三重態(tài)、第二激發(fā)三重態(tài) （A A） 9 9、分別在、分別在320nm320nm、360nm360nm光照下記錄硫酸奎寧的熒光光譜，下列說法光照下記錄硫酸奎寧的熒光光譜，下列說法 正確的是正確的是 A A、兩熒光光譜形狀不同，發(fā)光強(qiáng)度也不同、兩熒光光譜形狀不同，發(fā)光強(qiáng)度也不同 B B、兩熒光光譜形狀不、兩熒光光譜形狀不 同，發(fā)光強(qiáng)度相同同，發(fā)光強(qiáng)度相同 C C、兩熒光光譜形狀相同，發(fā)光強(qiáng)度也相同、兩熒光光譜形狀相同，發(fā)光強(qiáng)度也相同 D D、兩熒光光譜形狀相同，發(fā)光強(qiáng)度不同、兩熒光光譜形狀相同，發(fā)光強(qiáng)度不同 E E、兩熒光光譜的強(qiáng)度大小與激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān)、兩熒光光