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1、-作者xxxx-日期xxxx全血RNA提取步驟【精品文檔】Trizol法提取全血總RNA實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：Trizol，氯仿，異丙醇，75%乙醇（用RNase-Free水配制），RNase-Free水，檸檬酸鈉抗凝管。1ml注射器，、3 ml EP管（DEPC處理過(guò)），大、中、小號(hào)槍頭（DEPC處理）150250 ul全血加入10倍體積TRIzol（主要是異硫氰酸胍）（ ml），充分吹打混勻，室溫靜置5min（使核酸蛋白復(fù)合物完全分離）。每1毫升的TRIzol試劑加入200 ul的氯仿（300 ul500 ul），靜置3min，離心12000g，4，15min。將上層水相轉(zhuǎn)移到 ml EP管中，加5

2、00 ul的異丙醇，上下顛倒混勻10 s，室溫靜置10min，離心12000 g，4，10 min，棄上清。加入1 ml的75%乙醇，上下顛倒混勻10 s，離心7500 g，4，10 min，棄上清。室溫下干燥5-10 min（充分干燥不好溶解），加入50 ul的RNase-free-water充分溶解RNA。分光光度計(jì)測(cè)OD值。（取2l進(jìn)行電泳，其余-80保存？）#加入TRIzol后可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-810000g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。分光光度計(jì)檢測(cè)質(zhì)量 取出2 ul定量，測(cè)量buffer: 10mM TrisCl(pH7.8)。，說(shuō)明RNA質(zhì)量可靠；，說(shuō)明有蛋白污染；，說(shuō)明RNA存在降解。 電泳檢測(cè)RNA電泳檢測(cè)RNA完整性：配制1%的凝膠，上樣，120V電泳20min，紫外燈下觀察結(jié)果，若能

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