常用試劑的配制

1、- - - 常用溶液的配制信息來(lái)源：生物谷 更新時(shí)間：2004-12-21 1:33:00一、常規(guī)溶液（一）1/15mol/L PBS（磷酸緩沖液 Phosphate Buffer Solution, PBS）甲液：1/15mol/L Na2HPO4 溶液Na2HPO49.465g蒸餾水加至1000ml乙液：l/15mol/L KH 2PO4 溶液KH 2P049.07g蒸餾水加至1000m1分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于4C冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見(jiàn)下表:pH甲液ml乙液mlpH甲液ml乙液mI5.292.597.56.8150.050.05.595.095.

2、06.9860.040.05.9110.090.07.1770.030.06.2420.080.07.3880.020.06.4730.070.07.7390.010.06.6440.060.08.0495.05.0（二）0.3%臺(tái)盼蘭染液稱(chēng)取臺(tái)盼蘭（Trypan blue）粉0.3克，溶于100ml生理鹽水中，加熱 使之完全溶解，用濾紙過(guò)濾除渣，裝入瓶?jī)?nèi)室溫保存。（三）0.5%酚紅指示劑酚紅0.5g0.1N(0.4% )NaOH15ml將0.5克酚紅置研缽中，緩漫滴加O.INNaOH溶液邊加邊磨，并不 斷吸出已溶解的酚紅液，直至全部溶解，然后加入 85ml雙蒸水，顏 色為深紅，經(jīng)粗濾紙過(guò)濾后

3、使用，室溫保存。（四）5.6% NaHCO3 溶液稱(chēng)NaHCO35.6克，溶于100ml蒸餾水中，室溫保存即可（如需要也 可10磅15分鐘高壓滅菌，4C冰箱保存）（五）10 a/ml秋水仙素秋水仙素Qmg生理鹽水100ml裝入茶色瓶中，為貯備液，4C冰箱中保存。甩時(shí)取貯備液1ml加生 理鹽水9ml即可。（六）0.4% KCl-0.4 %檸檬酸鈉低滲液將0.4% KCl和0.4%檸檬酸鈉兩液等量混合即可，室溫保存。（七）2%檸檬酸鈉稱(chēng)取檸檬酸鈉2克，加100ml雙蒸水即可，室溫保存。（八）0.2%次甲基蘭染液稱(chēng)次甲基蘭（Methylene blue）0.2克，加蒸餾水100ml，室溫保存。（九）

4、0.5%醋酸洋紅（Aceio Carmine）染液洋紅lg110ml醋酸90ml蒸餾水將90ml醋酸加入110ml蒸餾水煮沸，然后將火焰移去，立即加入1克洋紅，使之迅速冷卻過(guò)濾，加飽和氫氧化鐵（媒染劑）水溶液數(shù)滴, 直到呈葡萄酒色。室溫保存。加鐵使洋紅沉淀于組織而著色。此染液 室溫存放時(shí)間越長(zhǎng)效果越好，室溫保存。（十）1% 甲苯胺蘭（Toluidine blue）稱(chēng)取甲苯胺蘭1克，加蒸餾水100ml。（十一 ）1/3000中性紅染液取中性紅（Neutral red）0.1克，加蒸餾水300ml。室溫保存。（十二）Giemsa染液1. 貯備液Giemsa 粉1g純甘油66ml甲醇66ml先將Gi

5、emsa粉置于研缽中加少量甘油，充分研磨，呈無(wú)顆粒的糊狀。再將全部甘油加入，放入 56C溫箱中2小時(shí)，然后加入甲醇， 保存于茶色瓶中。一般兩周后使用為好。2. 工作液臨用時(shí)將貯備液與PH6.8的磷酸緩沖液按照1:20混合。（十三）埃利希（Ehrlich）蘇木精染液蘇木精1.0g5ml乙醇50ml醋酸甘油50ml5g50ml硫酸鋁鉀蒸餾水將蘇木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并攪拌，以加速其溶解。 當(dāng)蘇木精溶解后將甘油加入并搖動(dòng)容器， 同時(shí)加入其余的乙醇；硫酸 鋁鉀需研磨并加熱，然后溶解于蒸餾水中，將其一滴滴地加入上邊的 溶液，并不斷搖動(dòng)，此液配好后，將瓶口用紗布蓋好，置通風(fēng)處，經(jīng) 常搖動(dòng)以加速其成

6、熟，成熟約需 4周左右，成熟的染液為深紅色。二、細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞組分分離溶液（一）M 一緩沖液瞇唑（Imidazole）KCIMgCl2 6H2OECTAEDTA巰基乙醇甘油蒸餾水3.404g3.7g101.65mg380.35mg29.224mg0.07ml297ml加至1000ml用lNHCl調(diào)pH至7.2室溫保存。（二）2% Triton X 一 100 溶液量取2mlTriton X 一 100（聚乙二醇辛基苯基醚）液，加M緩沖液98ml即可。（三）0.2%考馬斯亮蘭R-250染液甲醇46.5ml醋酸7.0ml考馬斯亮蘭0.2g蒸餾水加至100ml（四）A . 0.1%堿性固綠染液（pH

7、8.08.5）1. 0.1%固綠水溶液固綠（Fast gree n）0.1g蒸餾水100ml2. 0.05% Na2C03溶液Na2C0350mg蒸餾水100ml用時(shí)按1:1體積混合即可。B. 0.1%酸性固綠染液（pH2.2）1. 0.1%固綠水溶液。2. mol/LX75鹽酸液鹽酸（比重1.19）0.109ml加蒸餾水至100ml用時(shí)按l:1混合。（五）甲基綠一哌咯寧染液1.1mol/L 醋酸緩沖液（pH4.8）:加至200ml（1）醋酸17ml蒸餾水蒸餾水加至100ml用時(shí)分別取兩液40ml、60ml混勻即可2. 甲基綠一哌咯寧(methyl green Pyrenln)5%哌咯寧水溶液

8、6ml2%甲基綠水溶液6ml蒸餾水16mllmol/L醋酸緩沖液16mllmol/L醋酸緩沖液臨用時(shí)才可加入染液中。（六）Schiff試劑將堿性品紅0.5克加入lOOml沸水，持續(xù)煮沸5分鐘，并隨時(shí)攪 拌，待冷卻到50C時(shí)過(guò)濾到棕色瓶中，力口 1N HC11O毫升，冷卻至 25C時(shí)加入1克NaHSOs，此時(shí)需很好的振蕩，避光過(guò)夜。次日取出 （呈淡黃色）加0.25克活性炭劇烈振蕩1分鐘。過(guò)濾后即得Sehiff試劑 避光低溫保存。（七）聯(lián)苯胺混合液聯(lián)苯胺（4.4 Diami no ben zidi ne）0.2g95% 乙醇lOOml3%過(guò)氧化氫2滴此液臨用時(shí)配制。（八）l %番紅水溶液番紅（Sa

9、fra nin）1.0g100ml蒸餾水（九）1 % SDS（十二烷基硫酸鈉 Sodium dodecyl sulfate,SDS）SDS10g45% 乙醇100ml（十）1mol/LTris（三羥甲基氨基甲烷/鹽酸緩沖液Trihydroxymethylam ino metha ne Tris/HCL）pH7.8Tris12.114g蒸餾水100ml先將Tris溶于少量蒸餾水，用HCI調(diào)pH至7.8,然后加水至100ml（十一 ）Rin ger Soluti on氯化鈉（冷血?jiǎng)游镉?. 65克）0.9克氯化鉀0.042克氯化鈣0.025克蒸餾水100ml（十二）淀粉肉湯培養(yǎng)基蛋白2g淀粉6g牛

10、肉湯100ml用 10% NaHCO3 調(diào) pH 至 7.07.2（十三）0.25mol/ L蔗糖一 0.003mol/ L氯化鈣溶液蔗糖85.5g氯化鈣0.33g蒸餾水1000ml（十四）1%詹納斯綠B染液取詹納斯綠（Janus green B）1.0g Ringe氏液 100ml（十五）1%剛果紅染液剛果紅1g蒸餾水100ml（十六）Gomori硝酸鉛作用液0.05mol/ L 醋酸緩沖液（pH5）lOOml0.6醋酸加蒸餾水200ml、取其42ml醋酸鈉1.36g加蒸餾水200ml，取其158ml共200mlB-甘油磷酸鈉2g醋酸鉛2g5%氯化鎂5ml以上作用液在臨用時(shí)配制，最終在 pH

11、55.2,過(guò)濾使用。（王世藩匯編）三、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合溶液（一）0.01mol/LPBS（磷酸鹽緩沖液 Phosphate Buffer SalinePBS）pH7.2。0.2mol/L磷酸氫二鈉液（甲液）:NaH2PO4 12H2O35.814g雙蒸水加至500ml0.2mol/L磷酸二氫鈉液（乙液）:NaH2PO4 12H2O15.601g雙蒸水加至500ml取甲液36ml，乙液14ml和NaCI8.2克，加雙蒸水至1000ml?；靹虼耆芙夥盅b，經(jīng)高壓滅菌后保存于4C冰箱備用。（二）50% PEG（聚乙二醇 Polyethyleneglycol mwl500）稱(chēng)取0.5克PEG,用前

12、放入試管中在酒精燈火焰上熔化，加入等量 37C予熱的MEM培養(yǎng)液，混勻，保溫在37 C水浴中待用。（三）MEM培養(yǎng)液（含10%小牛血清）MEM培養(yǎng)液（日本制藥株式會(huì)社）9.4g雙蒸水1000mlNaHCO31.5g谷氨酰胺（L-glutamin）0.292g56 C滅活30分鐘的小牛血清110mlMEM粉末加水溶解后，用NaHCO3調(diào)pH到7.1（因在抽濾過(guò)程中 pH升高0.20.3），然后加滅活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解 后，立即用G6抽濾除菌，分裝，置4C冰箱保存?zhèn)溆?。（四?.25%胰蛋白酶一 0.02% EDTA混合消化液胰蛋白酶（Trypsin）粉0.25gEDTA 粉20.0

13、mg0.01mol/ L PBS100ml先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后將EDTA粉末和剩下的液體加入混合，置37C水浴中1小時(shí)左右（待徹底溶解，液體呈透明為止）, 用G5抽濾，分裝置4C冰箱中保存（五）Ha nks 液1.原液甲NaCI160gKCI8gMgSO4 7H2O2gMgCI 2 6H2O2g溶于800ml餾水中。CaCb（無(wú)水）2.8g溶于100ml蒸餾水中將兩種液體混合后，加水至1000ml用濾紙濾過(guò)，再加2ml氯仿防 腐，置4C冰箱備用。原液乙Na2HPO4 12H2O3.04gKH2PO41.2g葡萄糖20.0g溶于800ml蒸餾水中，用濾紙過(guò)濾，然后加0.5%酚紅80m

14、l,再加水至1000ml,最后加入2ml氯仿防腐，置4 C冰箱備用O2.使用液甲乙兩液各1份，雙蒸水18份，混勻分裝包扎好瓶口，經(jīng)10磅 15分鐘高壓滅菌后置4C冰箱中保存。使用時(shí)用5.6%NaHC03調(diào)pH 值到所需要求。（六）1640培養(yǎng)液（含10 %小牛血清）RPMI-1640 粉10.39g雙蒸水加至1000ml通入適量的C02氣體，邊通入CO2邊慢慢攪拌，使其（呈透明）完全 溶解。用NaHCO31.5克調(diào)pH值至U 7.2。雙抗1萬(wàn)u/ml10ml滅活小牛血清110ml混勻上述液體，立即用G6抽濾除菌分裝，置4C冰箱備用。（七）青、鏈霉素溶液青霉素鈉鹽（40萬(wàn)u/瓶）5瓶鏈霉素（10

15、0萬(wàn)u/瓶）2瓶將兩者溶于200ml0.9%的無(wú)菌生理鹽水，分裝小瓶，-30C保存。雙 抗在培養(yǎng)基中的終濃度為各lOOu為宜。（八）二甲基亞砜誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化使用的終濃度為1。4%。（九）BrdU 溶液（200ug/m1）用無(wú)菌青霉素瓶，在室溫下稱(chēng)取1.0mg,在無(wú)菌條件下加入滅菌生 理鹽水9.0ml，溶解，混勻，用黑紙包嚴(yán)，避光置冰箱冰格中保存。 最好用時(shí)現(xiàn)配。（十）2拓SC溶液用分析天平稱(chēng)取氯化鈉17.53克，檸檬酸鈉8.82克溶于蒸餾水中，加 蒸餾水至1000毫升。（十一）3%瓊脂：取瓊脂粉3克，加入雙蒸水到100毫升，攪勻，高壓消毒后（15磅20 分鐘），冷藏備用，使用前重新加熱

16、煮沸（貯存時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)）。四、制備電鏡標(biāo)本的溶液（一 ）2.5%戊二醛溶液25%戊二醛10ml0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液裝入茶色瓶中，保存于4 C冰箱備用。（二）0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液二甲砷酸鈉10.70g蒸餾水500ml將二甲砷酸鈉置于500ml容量瓶中，先加水約400ml，震蕩使其溶解，用HCI調(diào)pH到7.4,加入剩余蒸餾水，4C冰箱保存。（三）包埋劑環(huán)氧樹(shù)脂 Epon81256.30gDDSA（十二烷基琥珀酸酐 Dodecenyl succinican hydride, DDSA）14.60gMNA（甲基內(nèi)次甲基鄰苯二甲酸酐 Methyl Nadic）an hydride

17、, MNA29.00g混合上述三種包埋劑成分，攪拌 30分鐘使其充分混勻。再加加速劑2,4,6 三（二甲氨基甲基）苯酚（2, 4, 6-tridimethylaminomethylphenol，DMP-30）1.5ml，繼續(xù)攪拌 30 分鐘，置于干燥罐 中（室溫）備用。（四）2%單寧酸單寧酸2g雙蒸水100ml溶解后過(guò)濾裝茶色瓶中，4 C冰箱保存。（五）高錳酸鉀固定劑檸檬酸三鈉60mmol/L氯化鉀25mmol/L氯化鎂35mmol/L高錳酸鉀125mmol/LpH為747.8,裝茶色瓶中，4C冰箱中保存，有效期2個(gè)月左右。（六）1% 0s04溶液OsC40.5g0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖

18、液。50mlOsC4 一般為0.5或1克安瓶中圭寸閉包裝，配制時(shí)剝?nèi)ド虡?biāo)，用自 來(lái)水洗凈，放洗滌液中泡4 12小時(shí)后用水沖洗，在安瓶上劃痕，用 蒸餾水洗凈，投入茶色瓶中，加緩沖液，用玻璃棒在瓶中搗碎，輕輕 搖動(dòng)放冰箱中，48小時(shí)后完全溶解。此藥蒸氣對(duì)人眼、角膜、鼻腔 和口腔粘膜有固定作用，用時(shí)特別小心，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。五、顯影、定影溶液（一）D-72顯影液溫水(52 C)750ml米吐?tīng)?g無(wú)水亞硫酸鈉45g對(duì)苯二酚12g無(wú)水碳酸鈉67.5g溴化鉀19g水加至1000mlD-72顯影液為通用顯影液，既能顯影膠片又能用于相紙顯影。使用原液，20C顯影時(shí)間12分鐘可得高反差。加水1:2稀釋后使用可得較低反差。1:1稀釋使用。20C時(shí)顯影時(shí) 間34分鐘可得正常反差。（二）SB-1停顯液配方