第二章玻片標(biāo)本制作技術(shù)

1、第一節(jié)第一節(jié) 生物玻片標(biāo)本制作方法生物玻片標(biāo)本制作方法 第二節(jié)第二節(jié) 植物材料玻片標(biāo)本制作技術(shù)植物材料玻片標(biāo)本制作技術(shù) 第三節(jié)第三節(jié) 動(dòng)物材料玻片標(biāo)本制作技術(shù)動(dòng)物材料玻片標(biāo)本制作技術(shù) 從保存時(shí)間長短分，有臨時(shí)玻片標(biāo)本和永久玻片標(biāo)本。從制作的方法從保存時(shí)間長短分，有臨時(shí)玻片標(biāo)本和永久玻片標(biāo)本。從制作的方法 來分，有涂片、壓片、裝片來分，有涂片、壓片、裝片(也叫整裝法也叫整裝法)、磨片和切片等、磨片和切片等 。 一、切片法一、切片法 簡單、省時(shí)、容易掌握，有一定局限性，但至今在生物學(xué)教學(xué)中仍然是觀簡單、省時(shí)、容易掌握，有一定局限性，但至今在生物學(xué)教學(xué)中仍然是觀 察形態(tài)構(gòu)造的一種基本切片方法察形態(tài)構(gòu)

2、造的一種基本切片方法 。 （1 1）材料和夾持物）材料和夾持物 （2 2）材料的持法）材料的持法 （3 3）持刀方法）持刀方法 （4 4）切片）切片 （5 5）取片）取片 （6 6）選片、裝片）選片、裝片 1.1.徒手切片法徒手切片法 切片法即用刀片將材料切成薄片的方法。切片法即用刀片將材料切成薄片的方法。 切取 的標(biāo) 本 材料和夾持物材料和夾持物 v所使用的支持劑是石蠟，優(yōu)點(diǎn)是切下的片子薄而勻，還能作所使用的支持劑是石蠟，優(yōu)點(diǎn)是切下的片子薄而勻，還能作 連續(xù)切片，但制作手續(xù)較復(fù)雜連續(xù)切片，但制作手續(xù)較復(fù)雜 。 v幾個(gè)重要環(huán)節(jié)步驟如下：幾個(gè)重要環(huán)節(jié)步驟如下： (1)固定固定 其目的在于保存組織

3、中各細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生活時(shí)相似；必須其目的在于保存組織中各細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生活時(shí)相似；必須 對固定液的選擇、固定材料的性質(zhì)、大小和固定的時(shí)間以及研究的目的對固定液的選擇、固定材料的性質(zhì)、大小和固定的時(shí)間以及研究的目的 等加以注意。等加以注意。 (2) (2)沖洗沖洗 (3) (3)脫水脫水 酒精是最常用的脫水劑，酒精是最常用的脫水劑，把酒精配成不同梯度的濃度把酒精配成不同梯度的濃度緩慢緩慢進(jìn)行。進(jìn)行。 (4)(4)染色染色 (5)(5)浸蠟浸蠟 將已透明的材料投入熔化的石蠟中，取代透明劑，使組織中空隙將已透明的材料投入熔化的石蠟中，取代透明劑，使組織中空隙 為石蠟透入而填滿；為石蠟透入而填滿；

4、 2.2.石蠟切片法石蠟切片法 (6)(6)切片切片 用石蠟包埋塊包埋的石蠟塊，經(jīng)修整后一般使用旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)進(jìn)行用石蠟包埋塊包埋的石蠟塊，經(jīng)修整后一般使用旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)進(jìn)行 切片；切片； (7)(7)透明透明 透明在兩種情況下進(jìn)行。透明在兩種情況下進(jìn)行。 第一第一，透明是在組織脫水后浸蠟前進(jìn)行，其目的不在于為了顯微鏡，透明是在組織脫水后浸蠟前進(jìn)行，其目的不在于為了顯微鏡 觀察，而是作為從脫水劑進(jìn)入包埋劑的橋梁。因此，透明劑必須既能觀察，而是作為從脫水劑進(jìn)入包埋劑的橋梁。因此，透明劑必須既能 與酒精混合，又能與石蠟融合無間，二甲苯即具此性質(zhì)，故被選為常與酒精混合，又能與石蠟融合無間，二甲苯即具此性

5、質(zhì)，故被選為常 用的透明劑。用的透明劑。 第二第二，透明是在片子脫水與封藏之間進(jìn)行。其目的除了作為從脫水，透明是在片子脫水與封藏之間進(jìn)行。其目的除了作為從脫水 劑進(jìn)入封藏劑的橋梁外，尚有使標(biāo)本透明而便于觀察的作用。劑進(jìn)入封藏劑的橋梁外，尚有使標(biāo)本透明而便于觀察的作用。 (8)(8)封藏封藏 常用的封藏劑有樹膠和甘油等。封藏的目的在于使切片能永久保存便常用的封藏劑有樹膠和甘油等。封藏的目的在于使切片能永久保存便 于鏡檢。于鏡檢。 火棉膠切片法所使用的支持劑是火棉膠。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是包埋過程不火棉膠切片法所使用的支持劑是火棉膠。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是包埋過程不 經(jīng)高溫，可以避免組織收縮及變脆，適用精細(xì)材

6、料經(jīng)高溫，可以避免組織收縮及變脆，適用精細(xì)材料(如腦如腦)的切片，也因的切片，也因 火棉膠有韌性，切片不致有折卷或破裂，適于大塊組織及多空洞的組織火棉膠有韌性，切片不致有折卷或破裂，適于大塊組織及多空洞的組織 (如腦、眼球如腦、眼球)的切片的切片 。 3.3.火棉膠切片法火棉膠切片法 4.4.冰凍切片法冰凍切片法 冰凍切片法是將已固定或新鮮組織塊不經(jīng)脫水和包埋先進(jìn)行冰凍，然冰凍切片法是將已固定或新鮮組織塊不經(jīng)脫水和包埋先進(jìn)行冰凍，然 后在切片機(jī)上切片的一種方法。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是：后在切片機(jī)上切片的一種方法。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是：1.1.制片速度快，制片速度快， 因此常用于臨床上的病理手術(shù)診斷；因此

7、常用于臨床上的病理手術(shù)診斷；2.2.能保存組織內(nèi)某些易被有機(jī)溶能保存組織內(nèi)某些易被有機(jī)溶 劑所溶解的物質(zhì)，例如脂肪和酶等。劑所溶解的物質(zhì)，例如脂肪和酶等。 同時(shí)還可以防止組織塊的收縮保持原形。同時(shí)還可以防止組織塊的收縮保持原形。缺點(diǎn)：所切片子較厚，又不缺點(diǎn)：所切片子較厚，又不 能作連續(xù)切片還有易碎的毛病。能作連續(xù)切片還有易碎的毛病。 是一種將游離的細(xì)胞，動(dòng)、植物中比較疏松的組織均勻地涂布在載玻片上的是一種將游離的細(xì)胞，動(dòng)、植物中比較疏松的組織均勻地涂布在載玻片上的 一種制片方法。涂片材料有單細(xì)胞生物、小形藻類、血液，含有細(xì)菌的一種制片方法。涂片材料有單細(xì)胞生物、小形藻類、血液，含有細(xì)菌的 培養(yǎng)

8、液以及精巢、花藥等培養(yǎng)液以及精巢、花藥等 二、非切片法二、非切片法 1.1.涂片法涂片法 將植物或動(dòng)物比較疏松的材料，如花藥、根尖、水螅，蠕蟲的精巢、果蠅將植物或動(dòng)物比較疏松的材料，如花藥、根尖、水螅，蠕蟲的精巢、果蠅 ( (或其他雙翅目或其他雙翅目) )幼蟲的唾液腺等，用較小的壓力壓碎在載玻片上使成一薄幼蟲的唾液腺等，用較小的壓力壓碎在載玻片上使成一薄 層的一種制片法。層的一種制片法。 2.2.壓片法壓片法 微小的生物如衣藻、水綿、青霉、變形蟲和水螅等可以直接作為裝片的微小的生物如衣藻、水綿、青霉、變形蟲和水螅等可以直接作為裝片的 材料植物的葉表皮、鱗莖表皮等；動(dòng)物中如昆蟲的翅、腿、口器等；

9、人材料植物的葉表皮、鱗莖表皮等；動(dòng)物中如昆蟲的翅、腿、口器等；人 的口腔上皮細(xì)胞等都是從整個(gè)器官上取其一部分作為裝片材料，可制作的口腔上皮細(xì)胞等都是從整個(gè)器官上取其一部分作為裝片材料，可制作 成臨時(shí)或永久裝片，進(jìn)行觀察。成臨時(shí)或永久裝片，進(jìn)行觀察。 3.3.裝片法裝片法 懸滴玻片是將培養(yǎng)在蓋玻片上溶液里的活材料懸滴玻片是將培養(yǎng)在蓋玻片上溶液里的活材料( (如變形蟲的運(yùn)動(dòng)、如變形蟲的運(yùn)動(dòng)、 細(xì)菌的活動(dòng)、花粉的萌發(fā)等細(xì)菌的活動(dòng)、花粉的萌發(fā)等) )封閉在載玻片的小室里，供觀察它封閉在載玻片的小室里，供觀察它 們活動(dòng)的一種玻片標(biāo)本。們活動(dòng)的一種玻片標(biāo)本。 4.4.懸滴法懸滴法 一些含有礦物質(zhì)的比較堅(jiān)硬

10、的動(dòng)物組織要作成玻片標(biāo)本時(shí)，常把材料一些含有礦物質(zhì)的比較堅(jiān)硬的動(dòng)物組織要作成玻片標(biāo)本時(shí)，常把材料 直接放在砂石上磨成薄片，此法即為磨片法。如珊瑚的骨骼、軟體動(dòng)直接放在砂石上磨成薄片，此法即為磨片法。如珊瑚的骨骼、軟體動(dòng) 物的貝殼，脊椎動(dòng)物的硬骨、角以及牙齒等都可以用此法制成玻片標(biāo)物的貝殼，脊椎動(dòng)物的硬骨、角以及牙齒等都可以用此法制成玻片標(biāo) 本。本。 5.5.磨片法磨片法 一、常用實(shí)驗(yàn)種子植物的制片方一、常用實(shí)驗(yàn)種子植物的制片方 法法 (一一)洋蔥表皮裝片洋蔥表皮裝片 (二二)洋蔥根尖縱切片洋蔥根尖縱切片(示細(xì)胞有絲分裂示細(xì)胞有絲分裂) 洋洋 蔥蔥 表表 皮皮 細(xì) 胞 洋蔥根尖洋蔥根尖細(xì)胞 南瓜莖縱切片南瓜莖縱切片 蠶豆蠶豆幼根橫切根橫切 (三三)蠶豆根橫切片蠶豆根橫切片 (四四)南瓜莖縱切片及橫切片南瓜莖縱切片及橫切片 二、常用實(shí)驗(yàn)孢子植物的制片二、常用實(shí)驗(yàn)孢子植物的制片 方法方法 ( (一一) ) 衣藻裝片衣藻裝片 ( (二二) ) 團(tuán)藻裝片團(tuán)藻裝片 衣藻裝衣藻裝 片片 團(tuán)藻裝團(tuán)藻裝 片片 蘚蘚 原原 絲絲 體體 裝裝 片片 （三）細(xì)菌三型涂片（三）細(xì)菌三型涂片 （四）地錢生殖托縱切片（四）地錢生殖托縱切片 （五）蘚原絲體裝片（五）蘚原絲體裝片 細(xì)細(xì) 菌菌 三三 型型 涂涂 片 一、草履蟲裝片一、草履蟲裝片 二、水螅的整體裝片和橫切片二、水螅的整體裝