瑞氏染色[專業(yè)知識(shí)]

1、瑞氏染色瑞氏染色是目前最常用而又最簡(jiǎn)單的染色方法。1原理：瑞氏試劑中之酸性伊紅和堿性美籃混合經(jīng)化學(xué)作用后，變成中性之 伊紅化美藍(lán)，久置后，經(jīng)氧化而含有天青。此三種染料分別和細(xì)胞核及漿中的NH3+和COO-等結(jié)合，使細(xì)胞核及胞漿著色。由于系中性染料，又有緩沖液調(diào)節(jié)酸堿度，所以細(xì)胞受染后，藍(lán)紅等顏色都較適中，核染質(zhì)、胞漿及其中之顆粒顯色較為清楚。2 試劑配制： 1、瑞氏試劑 瑞氏染料（粉）1克，加不含醋酮之甲醇600毫升溶解過(guò)濾后即成。混合方式可將瑞氏染料置于研缽內(nèi)，加適量甲醇混合研磨，使染料溶解，將已溶解的液體倒入清潔玻瓶，再放入甲醇繼續(xù)溶解剩下染料，直至染料及甲醇均用完為止，然后過(guò)濾，以深色中

2、性之玻璃瓶?jī)?chǔ)備待用。亦可將1克染料一次加入600毫升甲醇中，盛深色玻璃瓶?jī)?nèi)，塞好瓶口，置于溫暖而黑暗之處或37度溫箱內(nèi)，每日振蕩5min，連續(xù)7天以上，然后過(guò)濾儲(chǔ)備用。染液宜久置后使用，通常存放愈久，染色效果愈好。2、緩沖液 由1%的磷酸氫二鈉和1%的磷酸二氫鉀各30毫升加蒸餾水1000毫升配成，或以上兩藥各1克加2500毫升左右蒸餾水制成。以石蕊試紙檢驗(yàn)、調(diào)整酸堿度，使PH在6.5-7之間即可。緩沖液亦可永新鮮蒸餾水或煮沸后密閉保存的蒸餾水。如蒸餾水與空氣過(guò)多接觸，則可因吸收空氣中之二氧化碳而使PH值變低，影響染色，故不宜使用。3、染色步驟1 將已編號(hào)之涂片水平置于染色板或者染色架上，涂片兩

3、端各劃一道蠟筆線，主要防止染液外溢。2 滴加瑞氏染色液。 其多少依標(biāo)本所占面積大小而定，一般為4-8滴，至染液將標(biāo)本完全蓋住為止。染液不宜過(guò)少，否則，甲醛揮發(fā)后，易產(chǎn)生沉淀；不可過(guò)多，以免因過(guò)盛而流失，影響染色。3 1-2分鐘后，滴入緩沖液（染液與緩沖液的比例約為1：1.5，冬季1：1，夏季1：2）。以氣囊向玻璃片上輕輕打氣，使染液和緩沖液混合均勻，一般不宜口吹起，以免呼出二氧化碳改變緩沖液酸堿度而影響染色。4 自緩沖液滴入10-15分鐘后，用自來(lái)水沖洗。沖洗時(shí)應(yīng)將玻片持平，以流水滴入使染液及緩沖液自玻片邊緣溢出，染料沉淀即隨水浮去。沖洗時(shí)，切忌水力過(guò)大，以免將標(biāo)本并染液同時(shí)沖走；沖洗前切不可

4、先將染液傾去，否則沉淀將附于標(biāo)本上不能除去，染色時(shí)間與染液的性質(zhì)、酸堿度、氣溫等關(guān)系甚大，因此應(yīng)靈活掌握。最好先沖洗一張，于低倍鏡下初步檢查，如細(xì)胞核漿分明，顆粒清楚，表示染色滿意，此時(shí)，始可將其余涂片全部沖洗。如染色過(guò)淺，則需延長(zhǎng)染色時(shí)間。5 沖洗、待干、鏡檢 。如天冷或空氣濕度大，可用吸水紙吸水加快干燥速度。但切忌用力重壓或擦拭，以免將標(biāo)本中的細(xì)胞成分擦去或破壞。4優(yōu)缺點(diǎn) 其主要優(yōu)點(diǎn)是染色方法簡(jiǎn)單、省時(shí)、易于推廣，且染色較清晰，特別是胞漿及其中顆粒受染良好。根據(jù)我們的體會(huì)，在細(xì)胞學(xué)檢查中，除個(gè)別情況外，瑞氏染色基本上可以解決絕大部分常見(jiàn)病的診斷問(wèn)題。其不足之處是核染質(zhì)及核膜的結(jié)構(gòu)往往不如巴

5、氏染色清楚。5 染色不佳的原因及糾正方法1 染色過(guò)深 A 表現(xiàn) 鏡下細(xì)胞變小，核與漿均呈深藍(lán)或藍(lán)黑色、結(jié)構(gòu)不清，紅細(xì)胞呈堿性色。B 原因 染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；染液過(guò)多或緩沖液過(guò)少；染液或緩沖液偏堿；夏季染色過(guò)程中甲醇揮發(fā)。 C 糾正 用甲醇脫色后重復(fù)染色。亦可用甲醇或瑞氏染液脫色數(shù)秒后沖洗，再行鏡檢，脫色時(shí)間根據(jù)具體情況決定。2 染色過(guò)淺 A表現(xiàn) 胞漿、漿內(nèi)顆粒及核均不著色或著色過(guò)淺，紅細(xì)胞亦不著色。B 原因 染色時(shí)間過(guò)短；染色液過(guò)少或緩沖液過(guò)多；染液或緩沖液偏酸C 糾正 按原染色步驟重復(fù)染色。3 染色偏堿 較常見(jiàn)A 表現(xiàn) 紅細(xì)胞呈藍(lán)色或綠色，細(xì)胞核、細(xì)胞漿及顆粒染色深，結(jié)構(gòu)不清。酸性顆粒亦藍(lán)染，淋巴細(xì)胞呈灰色。B 原因 基本與染色過(guò)深之原理相同，玻璃片偏堿、沖洗時(shí)間不足亦為可能之原因。C 糾正 如染色過(guò)堿，可于其中加1%醋酸少許，或?qū)⑼科?5%酒精數(shù)秒中，然后沖洗。4 染色偏酸 較少見(jiàn) A 表現(xiàn) 鏡下一片紅色，胞核及嗜堿性顆粒亦紅染或不著色。B 原因 染料放置過(guò)久或與空氣接觸后甲醛氧化而成甲酸；玻片或緩沖液偏酸。C 糾正 新舊染液混合使用，借以調(diào)整其PH值，或于染液中加1%碳酸鈉適量。5 沉渣過(guò)多；主要表現(xiàn)為涂片是那