血清堿性磷酸酶活性測(cè)定[特制醫(yī)療]

1、血清堿性磷酸酶活性測(cè)定磷酸苯二鈉法主要內(nèi)容： 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)器材與試劑 實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作 計(jì)算計(jì)算 臨床意義臨床意義 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 酶活力酶活力：也稱酶活性，是表示催化某一特定反應(yīng)：也稱酶活性，是表示催化某一特定反應(yīng)的能的能 力?？梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特力?？梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特定化學(xué)速度表示。定化學(xué)速度表示。 酶催化反應(yīng)速度越快，酶活力升高，反之活力愈酶催化反應(yīng)速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。低。 底物減少量或生成物增加量底物減少量或生成物增加量酶促反應(yīng)速度酶促反應(yīng)速度= 單位時(shí)間單位時(shí)間基本概念基本概念掌握酶活力測(cè)定的一般方

2、法掌握酶活力測(cè)定的一般方法掌握血清中掌握血清中ALPALP活力測(cè)定方活力測(cè)定方法與臨床意義法與臨床意義如何測(cè)定酶活力的大小如何測(cè)定酶活力的大??？ 酶活力酶活力：常用單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量來表示堿性磷酸酶堿性磷酸酶（ALP）是一組在是一組在堿性環(huán)境堿性環(huán)境中中水解磷酸酯水解磷酸酯的的酶類。酶類。來源：廣泛分布于人體的骨、腎、肝、腸、血清、膽汁來源：廣泛分布于人體的骨、腎、肝、腸、血清、膽汁等部位，但骨骼、牙齒、腎和肝臟中含量較多。正常人等部位，但骨骼、牙齒、腎和肝臟中含量較多。正常人血清中血清中ALP主要來源于主要來源于肝臟肝臟。是一種能夠?qū)?duì)應(yīng)底物是一種能夠?qū)?duì)應(yīng)底物去磷酸化去磷

3、酸化的酶，即通過水解磷酸的酶，即通過水解磷酸單酯將底物分子上的單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)磷酸基團(tuán)除去，并生成除去，并生成磷酸根離子磷酸根離子和和自由的羥基自由的羥基，這類底物包括核酸、蛋白、生物堿等。，這類底物包括核酸、蛋白、生物堿等。而該脫去磷酸基團(tuán)的過程稱為去磷酸化或脫磷酸化。而該脫去磷酸基團(tuán)的過程稱為去磷酸化或脫磷酸化。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中有最大活力。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中有最大活力。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解生成酚和磷酸。酚在堿性溶液中與水解生成酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4-氨基安替氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成

4、紅色醌類化合物，比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，其顏色深淺與其顏色深淺與ALP活性成正比。活性成正比。磷酸苯二鈉磷酸苯二鈉+H2O 苯酚苯酚+磷酸氫二鈉磷酸氫二鈉苯酚苯酚+4-氨基安替比林氨基安替比林 紅色醌亞胺衍生物紅色醌亞胺衍生物ALPpH=10鐵氰化鉀鐵氰化鉀 器材：器材：5ml移液管，移液管，1ml移液管，移液管，100或或200ul微量可調(diào)式移微量可調(diào)式移液器，液器，721E分光光度計(jì)，分光光度計(jì)，1cm比色皿，比色皿，37 恒溫水恒溫水浴浴 試劑：試劑： 10.1mol/L碳酸鹽緩沖液碳酸鹽緩沖液(pH10.0) 無水碳酸鈉無水碳酸鈉6.36g，碳酸氫鈉，碳酸氫鈉3.3

5、6g，4-氨基安替比林氨基安替比林1.5g，溶于，溶于800mL蒸餾水中，定容蒸餾水中，定容至至1L。置棕色瓶中保存。置棕色瓶中保存。 220mmol/L磷酸苯二鈉溶液磷酸苯二鈉溶液 先將先將500ml蒸餾水煮蒸餾水煮沸，迅速加入沸，迅速加入磷酸苯二鈉磷酸苯二鈉2.18g(磷酸苯二鈉如含磷酸苯二鈉如含2分分子結(jié)晶水，則應(yīng)稱取子結(jié)晶水，則應(yīng)稱取2.54g) ，冷卻后加氯仿，冷卻后加氯仿2ml防腐，防腐，在在4冰箱保存。（用剩的溶液不應(yīng)再倒回瓶中）冰箱保存。（用剩的溶液不應(yīng)再倒回瓶中） 3顯色液（鐵氰化鉀的硼酸溶液）顯色液（鐵氰化鉀的硼酸溶液） 稱取鐵氰化鉀稱取鐵氰化鉀2.5g，硼酸，硼酸17g，

6、各自溶于蒸餾水，各自溶于蒸餾水400ml中，兩液混中，兩液混合后，加蒸餾水至合后，加蒸餾水至1L，置棕色瓶中避光保存，置棕色瓶中避光保存(如出現(xiàn)如出現(xiàn)藍(lán)綠色即棄去藍(lán)綠色即棄去)。 4酚標(biāo)準(zhǔn)工作液（酚標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.05mg/ml） 購買合格的二級(jí)標(biāo)購買合格的二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。準(zhǔn)品。ALP 活力活力=（A測(cè)定測(cè)定A對(duì)照對(duì)照）（A標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)A空白空白）X0.05X 100（kings單位）單位） 酚標(biāo)準(zhǔn)液開后不能久置。酚標(biāo)準(zhǔn)液開后不能久置。 底物液不能含有酚，若含酚則顯底物液不能含有酚，若含酚則顯紅色紅色，說明，說明磷酸苯二鈉已分解，不宜使用。磷酸苯二鈉已分解，不宜使用。 加入鐵氰化鉀后必須加入鐵氰化鉀后必須迅速混勻迅速混勻(為了改變?yōu)榱烁淖働H來終止酶促反應(yīng)），否則有影響，偏大。來終止酶促反應(yīng)），否則有影響，偏大。 鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩(wěn)定最后所顯色鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩(wěn)定最后所顯色的作用。此液應(yīng)避光保存，如出現(xiàn)的作用。此液應(yīng)避光保存，如出現(xiàn)藍(lán)綠色藍(lán)綠色即即作廢作廢。1. 本次實(shí)驗(yàn)是用的什么方法？終止劑是什么？為什么加入鐵氰化本次實(shí)驗(yàn)是用的什么方法？終止劑是什么？為什么加入鐵氰化鉀硼酸液