噬菌體及其研究進(jìn)展

1、噬菌體及其應(yīng)用Contents噬菌體簡(jiǎn)介1噬菌體應(yīng)用技術(shù)簡(jiǎn)介2噬菌體在食品產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用3前景及展望41、噬菌體簡(jiǎn)介v 概念：噬菌體是感染細(xì)菌、噬菌體是感染細(xì)菌、真菌、螺旋體、支原體、真菌、螺旋體、支原體、立克次體及放線菌等微生立克次體及放線菌等微生物的病毒物的病毒, ,屬非細(xì)胞微生屬非細(xì)胞微生物。物。v 特性： 個(gè)體微小，需用電鏡觀察，個(gè)體微小，需用電鏡觀察， 可以通過(guò)細(xì)菌濾器；可以通過(guò)細(xì)菌濾器； 沒(méi)有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，由沒(méi)有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，由核酸和蛋白質(zhì)組成；核酸和蛋白質(zhì)組成； 專(zhuān)性活細(xì)胞內(nèi)寄生專(zhuān)性活細(xì)胞內(nèi)寄生, ,具有具有嚴(yán)格的寄生特異性。嚴(yán)格的寄生特異性。形態(tài)與結(jié)構(gòu)v 形態(tài)：蝌蚪形，微球形

2、，細(xì)桿形蝌蚪形，微球形，細(xì)桿形v 噬菌體顆粒在結(jié)構(gòu)上有很噬菌體顆粒在結(jié)構(gòu)上有很大差別，一般可分成三種大差別，一般可分成三種類(lèi)型，即類(lèi)型，即 ，和和，迄今已知的噬菌，迄今已知的噬菌體大多數(shù)是有尾部結(jié)構(gòu)的體大多數(shù)是有尾部結(jié)構(gòu)的二十面體。二十面體。 頭部頭部尾部尾部v 核酸：DNADNA或或RNA,RNA,基因組大小為基因組大小為2-200kb2-200kb，某些噬菌體基因，某些噬菌體基因組中還含有異常堿基。組中還含有異常堿基。 大多數(shù)為線狀雙鏈 DNA噬菌體 少數(shù)為環(huán)狀單鏈 多數(shù)為線狀單鏈 RNA噬菌體 少數(shù)為線狀雙鏈化學(xué)組成v 核酸：DNADNA或或RNA,RNA,基因組大小為基因組大小為2-2

3、00kb2-200kb，某些噬菌體基因，某些噬菌體基因組中還含有異常堿基。組中還含有異常堿基。 大多數(shù)為線狀雙鏈 DNA噬菌體 少數(shù)為環(huán)狀單鏈 多數(shù)為線狀單鏈 RNA噬菌體 少數(shù)為線狀雙鏈v 按與宿主的相互關(guān)系，噬菌體可以分為兩種類(lèi)型：按與宿主的相互關(guān)系，噬菌體可以分為兩種類(lèi)型： 烈性噬菌體 能在宿主菌內(nèi)復(fù)制增殖，產(chǎn)生許多子代噬菌能在宿主菌內(nèi)復(fù)制增殖，產(chǎn)生許多子代噬菌體，并最終裂解細(xì)菌。體，并最終裂解細(xì)菌。 溫和噬菌體（溶原性噬菌體）：噬菌體基因組整合于宿主噬菌體基因組整合于宿主菌染色體中，不產(chǎn)生子代噬菌體，也不引起細(xì)菌裂解，但菌染色體中，不產(chǎn)生子代噬菌體，也不引起細(xì)菌裂解，但噬菌體噬菌體DN

4、ADNA隨細(xì)菌基因組的復(fù)制而復(fù)制，并隨細(xì)菌的分裂隨細(xì)菌基因組的復(fù)制而復(fù)制，并隨細(xì)菌的分裂而分配至子代細(xì)菌的基因組中。而分配至子代細(xì)菌的基因組中。生物合成裝配釋放烈性噬菌體的溶菌周期烈性噬菌體的溶菌周期2、噬菌體的應(yīng)用技術(shù)應(yīng)用鑒定細(xì)菌分型測(cè)定輻射劑量檢測(cè)基因產(chǎn)物的活性篩選目的基因 檢測(cè)病原菌預(yù)防和治療傳染性疾病3、噬菌體在食品產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用v 食源性疾病病原的檢測(cè)技術(shù)v 作為食品添加劑v 噬菌體展示技術(shù)檢測(cè)真菌毒素3.1食源性疾病病原的檢測(cè)技術(shù)食源性疾病病原的檢測(cè)技術(shù)是食源性疾病的預(yù)防與控制的關(guān)食源性疾病病原的檢測(cè)技術(shù)是食源性疾病的預(yù)防與控制的關(guān)健的技術(shù)環(huán)節(jié)。數(shù)據(jù)顯示，每年大約有健的技術(shù)環(huán)節(jié)。數(shù)據(jù)

5、顯示，每年大約有7600 7600 萬(wàn)人因食用了萬(wàn)人因食用了受污染的食物而患病，其中受污染的食物而患病，其中91% 91% 是由于細(xì)菌污染造成。是由于細(xì)菌污染造成。現(xiàn)存的檢測(cè)方法包括傳統(tǒng)的細(xì)菌分離培養(yǎng)法、多聚酶鏈?zhǔn)椒船F(xiàn)存的檢測(cè)方法包括傳統(tǒng)的細(xì)菌分離培養(yǎng)法、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)應(yīng)(PCR)(PCR)法、生物芯片技術(shù)和免疫學(xué)方法等。法、生物芯片技術(shù)和免疫學(xué)方法等。缺點(diǎn)缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)費(fèi)力、價(jià)格昂貴、特異性或靈敏度低、國(guó)內(nèi)試劑：費(fèi)時(shí)費(fèi)力、價(jià)格昂貴、特異性或靈敏度低、國(guó)內(nèi)試劑供應(yīng)不配套等，很難適應(yīng)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處理快速反應(yīng)的供應(yīng)不配套等，很難適應(yīng)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處理快速反應(yīng)的需要。需要。有必要尋找一種簡(jiǎn)捷、快速

6、、靈敏度高的檢測(cè)食源性病原微有必要尋找一種簡(jiǎn)捷、快速、靈敏度高的檢測(cè)食源性病原微生物的方法以及技術(shù)平臺(tái)。生物的方法以及技術(shù)平臺(tái)。報(bào)告基因檢測(cè)報(bào)告基因檢測(cè)熒光染料標(biāo)記染料標(biāo)記噬菌斑檢測(cè)檢測(cè)3.1.1噬菌斑檢測(cè)v 原理：用噬菌體截獲某種：用噬菌體截獲某種病原菌，隨后病原菌被噬病原菌，隨后病原菌被噬菌體感染，用殺毒劑將胞菌體感染，用殺毒劑將胞外的剩余噬菌體殺死，然外的剩余噬菌體殺死，然后將噬菌體與被感染細(xì)胞后將噬菌體與被感染細(xì)胞混合并在裝有軟瓊脂的雙混合并在裝有軟瓊脂的雙層培養(yǎng)基上培養(yǎng)，被感染層培養(yǎng)基上培養(yǎng)，被感染的細(xì)胞破裂釋放出子代噬的細(xì)胞破裂釋放出子代噬菌休，在培養(yǎng)基中就會(huì)形菌休，在培養(yǎng)基中就會(huì)

7、形成空斑。成空斑。實(shí)驗(yàn)方法v 標(biāo)本采集后置于標(biāo)本采集后置于SC SC 增菌管中增菌管中37 37 增菌增菌18 h18 h左右左右, SS , SS 平平板分離培養(yǎng)板分離培養(yǎng)37 37 過(guò)夜過(guò)夜, , 然后挑出具有然后挑出具有沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌特征的單特征的單個(gè)菌落劃線接種于普通瓊脂平皿上個(gè)菌落劃線接種于普通瓊脂平皿上, , 每塊平板劃格后可接每塊平板劃格后可接種種8 8 個(gè)菌落左右。個(gè)菌落左右。v 在每格中央用滅菌的毛細(xì)滴管滴上在每格中央用滅菌的毛細(xì)滴管滴上O-IO-I噬菌體噬菌體, , 待溶液干待溶液干后置后置37 6-8 h 37 6-8 h 培養(yǎng)或過(guò)夜培養(yǎng)或過(guò)夜, , 觀察噬菌體裂解情況

8、。觀察噬菌體裂解情況。v 發(fā)現(xiàn)被發(fā)現(xiàn)被O-I O-I 噬菌體裂解的菌株噬菌體裂解的菌株, , 馬上挑取噬斑周?chē)χ瘪R上挑取噬斑周?chē)χ苯幼錾抽T(mén)氏菌接做沙門(mén)氏菌A- F A- F 多價(jià)血清凝集試驗(yàn)多價(jià)血清凝集試驗(yàn), , 凝集陽(yáng)性者即可凝集陽(yáng)性者即可初步報(bào)告結(jié)果初步報(bào)告結(jié)果, , 然后轉(zhuǎn)種克氏雙糖鐵管作進(jìn)一步鑒定分型。然后轉(zhuǎn)種克氏雙糖鐵管作進(jìn)一步鑒定分型。簡(jiǎn)例v O-IO-I噬菌體是作用于沙門(mén)氏菌屬特異性噬菌體噬菌體是作用于沙門(mén)氏菌屬特異性噬菌體, ,染色體為雙染色體為雙鏈鏈DNA,DNA,受體是宿主細(xì)胞壁上核心多糖的乙酰氨基葡萄糖。受體是宿主細(xì)胞壁上核心多糖的乙酰氨基葡萄糖。應(yīng)用應(yīng)用O-IO

9、-I噬菌體進(jìn)行飲食行業(yè)及公共場(chǎng)所從業(yè)人員帶菌調(diào)噬菌體進(jìn)行飲食行業(yè)及公共場(chǎng)所從業(yè)人員帶菌調(diào)查結(jié)果表明查結(jié)果表明, , 沙門(mén)氏菌檢出率為沙門(mén)氏菌檢出率為0. 131%, 0. 131%, 與廣東省報(bào)道與廣東省報(bào)道的的0. 134%0. 134%檢出率相近檢出率相近, , 說(shuō)明說(shuō)明O- I O- I 噬菌體應(yīng)用對(duì)沙門(mén)氏菌噬菌體應(yīng)用對(duì)沙門(mén)氏菌的診斷具有較高的特異性和敏感性的診斷具有較高的特異性和敏感性, , 不失為大量從業(yè)人員不失為大量從業(yè)人員沙門(mén)氏菌調(diào)查的較為理想快速診斷方法。沙門(mén)氏菌調(diào)查的較為理想快速診斷方法。3.1.2熒光染料標(biāo)記法v 原理：選用一種合適的染色劑，噬菌體的核酸染色標(biāo)記，選用一種合

10、適的染色劑，噬菌體的核酸染色標(biāo)記，然后用標(biāo)記過(guò)的噬菌體侵染相應(yīng)的宿主菌，噬菌體吸附在然后用標(biāo)記過(guò)的噬菌體侵染相應(yīng)的宿主菌，噬菌體吸附在宿主菌表面后，隨即將標(biāo)記過(guò)的核酸注入宿主細(xì)胞，隨著宿主菌表面后，隨即將標(biāo)記過(guò)的核酸注入宿主細(xì)胞，隨著越來(lái)越多的噬菌體核酸的注入，細(xì)胞內(nèi)熒光隨著熒光素的越來(lái)越多的噬菌體核酸的注入，細(xì)胞內(nèi)熒光隨著熒光素的增多而增強(qiáng)，借助熒光顯微鏡便能判定宿主菌的存在，從增多而增強(qiáng)，借助熒光顯微鏡便能判定宿主菌的存在，從而實(shí)現(xiàn)病原菌的檢測(cè)。而實(shí)現(xiàn)病原菌的檢測(cè)。簡(jiǎn)介A圖只有細(xì)菌,熒光視野里不見(jiàn)任何發(fā)光物質(zhì);B圖中只有熒光標(biāo)記O-I噬菌體,視野下偶爾可見(jiàn)少量圓點(diǎn)狀的熒光物質(zhì),不見(jiàn)菌形;C

11、圖是熒光標(biāo)記O-I噬菌體和沙門(mén)氏菌混合,可見(jiàn)大量桿狀物,少量點(diǎn)狀物,極少數(shù)彗星狀桿狀物,將桿狀物質(zhì)與沙門(mén)氏菌的革蘭氏染色形態(tài)進(jìn)行比較,兩者一致。由此可推知,C圖中桿形物是侵有熒光噬菌體的沙門(mén)氏菌,點(diǎn)狀物是標(biāo)記的O-I噬菌體,結(jié)合B圖可知彗星狀桿形物是即將裂解的宿主菌。簡(jiǎn)例v 蔣魯巖等用此方法快速檢測(cè)食品源沙門(mén)氏菌，檢測(cè)靈敏度蔣魯巖等用此方法快速檢測(cè)食品源沙門(mén)氏菌，檢測(cè)靈敏度達(dá)達(dá)10 CFU/100L;12010 CFU/100L;120份食品樣品中沙門(mén)氏菌的份食品樣品中沙門(mén)氏菌的O-IO-I噬菌體噬菌體檢測(cè)與生化鑒定結(jié)果的陽(yáng)性率分別為檢測(cè)與生化鑒定結(jié)果的陽(yáng)性率分別為9.17%9.17%和和10

12、%,10%,符合率符合率為為91.7%91.7%。表明用熒光標(biāo)記的。表明用熒光標(biāo)記的O-IO-I噬菌體可以快速、直觀、噬菌體可以快速、直觀、準(zhǔn)確、大量地檢測(cè)食品中沙門(mén)氏菌。準(zhǔn)確、大量地檢測(cè)食品中沙門(mén)氏菌。3.1.3報(bào)告基因檢測(cè)技術(shù)v 該技術(shù)中，將一個(gè)報(bào)告基因通過(guò)噬菌體插入到目標(biāo)菌體的該技術(shù)中，將一個(gè)報(bào)告基因通過(guò)噬菌體插入到目標(biāo)菌體的D N A D N A 中，隨著報(bào)告基因的表達(dá)，目標(biāo)菌體便可快速得到中，隨著報(bào)告基因的表達(dá)，目標(biāo)菌體便可快速得到檢測(cè)。檢測(cè)。v 應(yīng)用在這一技術(shù)的報(bào)告系統(tǒng)主要有原核生物和真核生物的應(yīng)用在這一技術(shù)的報(bào)告系統(tǒng)主要有原核生物和真核生物的熒光素酶熒光素酶(lux,luc)(l

13、ux,luc)基因，細(xì)菌冰核蛋白基因，細(xì)菌冰核蛋白(inaW)(inaW)基因，基因，E.coli-E.coli- 半乳糖苷酶半乳糖苷酶(lacZ)(lacZ)基因和生物素親和蛋白。報(bào)基因和生物素親和蛋白。報(bào)告 噬 菌 體 已 經(jīng) 能 夠 成 功 檢 測(cè) 許 多 菌 種 ， 如告 噬 菌 體 已 經(jīng) 能 夠 成 功 檢 測(cè) 許 多 菌 種 ， 如E.coli,Salmonella.spp E.coli,Salmonella.spp 等等 。簡(jiǎn)介利用熒光素酶基因作為報(bào)告基因的快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)于細(xì)菌來(lái)說(shuō)，發(fā)光機(jī)理可用下式表述：對(duì)于細(xì)菌來(lái)說(shuō)，發(fā)光機(jī)理可用下式表述：F M N H 2+ R C H O

14、+ O 2 F M N + H 2O + R C O O H + h (490nm)反應(yīng)是在熒光素酶的催化下進(jìn)行的。細(xì)菌的熒光素酶是一個(gè)反應(yīng)是在熒光素酶的催化下進(jìn)行的。細(xì)菌的熒光素酶是一個(gè)7 7 k D 7 7 k D 的的二聚體，其中包含二聚體，其中包含亞基亞基( 4 0 3 7 k D ) ( 4 0 3 7 k D ) 和和亞基亞基(37kD)(37kD)。目前，生物發(fā)光基因目前，生物發(fā)光基因(lux,luc)(lux,luc)在報(bào)告噬菌體檢測(cè)技術(shù)中應(yīng)用最為廣泛。在報(bào)告噬菌體檢測(cè)技術(shù)中應(yīng)用最為廣泛。Waddell Waddell 等利用轉(zhuǎn)座子致突變，將等利用轉(zhuǎn)座子致突變，將lucAluc

15、A和和lucBlucB基因插入到基因插入到E.coli E.coli O157:H7O157:H7的溫和噬菌體的溫和噬菌體 V 1 0 V 1 0 中，構(gòu)建了一個(gè)熒光素酶轉(zhuǎn)座噬菌體，中，構(gòu)建了一個(gè)熒光素酶轉(zhuǎn)座噬菌體，這一噬菌體能夠使這一噬菌體能夠使E.coli O157:H7 E.coli O157:H7 在在1h 1h 內(nèi)被成功檢測(cè)，并報(bào)告出結(jié)果。內(nèi)被成功檢測(cè)，并報(bào)告出結(jié)果。vMasahitoMasahito等將綠熒光蛋白等將綠熒光蛋白(GFP)(GFP)基因分別插入到基因分別插入到T T偶數(shù)型噬菌體偶數(shù)型噬菌體PP01 PP01 的外殼蛋白的外殼蛋白(SOC)(SOC)基因的基因的C C

16、末端和末端和N N 末端，構(gòu)建成噬菌體末端，構(gòu)建成噬菌體PP01-GFP/SOC PP01-GFP/SOC 和和PP01-SOC/GFPPP01-SOC/GFP，這種對(duì)，這種對(duì)E.coli O157:H7E.coli O157:H7特異的噬菌體能夠成功檢測(cè)特異的噬菌體能夠成功檢測(cè)菌體的可培養(yǎng)細(xì)胞，不可培養(yǎng)但可存活細(xì)胞菌體的可培養(yǎng)細(xì)胞，不可培養(yǎng)但可存活細(xì)胞(VBNC)(VBNC)及經(jīng)過(guò)巴氏消毒過(guò)及經(jīng)過(guò)巴氏消毒過(guò)的細(xì)胞，靈敏度高，檢測(cè)時(shí)間僅為的細(xì)胞，靈敏度高，檢測(cè)時(shí)間僅為20min20min。以- 半乳糖苷酶作為報(bào)告基因的快速檢測(cè)技術(shù)-半乳糖苷酶半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23)(EC 3.2.

17、1.23)是一種催化是一種催化-半乳糖苷水解半乳糖苷水解反應(yīng)的糖苷酶。反應(yīng)的糖苷酶。-半乳糖苷酶的作用特性是隨著水解反應(yīng)底物的不同而改半乳糖苷酶的作用特性是隨著水解反應(yīng)底物的不同而改變，鄰硝基苯變，鄰硝基苯-D- -D- 半乳糖苷是檢測(cè)中常用的靈敏基質(zhì)，半乳糖苷是檢測(cè)中常用的靈敏基質(zhì)，它被它被- - 半乳糖苷酶水解后產(chǎn)生半乳糖苷酶水解后產(chǎn)生藍(lán)色沉淀，藍(lán)色沉淀，該技術(shù)可以使該技術(shù)可以使檢測(cè)的靈敏度達(dá)到生物發(fā)光熒光素酶檢測(cè)的水平。檢測(cè)的靈敏度達(dá)到生物發(fā)光熒光素酶檢測(cè)的水平。GoodridgeGoodridge等設(shè)計(jì)了一個(gè)帶有等設(shè)計(jì)了一個(gè)帶有l(wèi)acZlacZ基因的基因的T4T4噬菌體，用這種噬菌體，

18、用這種噬菌體感染待測(cè)樣品，并用化學(xué)發(fā)光基質(zhì)作為檢測(cè)基質(zhì)，噬菌體感染待測(cè)樣品，并用化學(xué)發(fā)光基質(zhì)作為檢測(cè)基質(zhì)，研究人員成功檢測(cè)了肉湯培養(yǎng)基中的研究人員成功檢測(cè)了肉湯培養(yǎng)基中的E.coliE.coli，檢測(cè)限僅為，檢測(cè)限僅為10102 2CFU/mlCFU/ml。然后，研究人員將最大概率數(shù)。然后，研究人員將最大概率數(shù)(most probable (most probable numbernumber，MPN)MPN)法應(yīng)用到食源性病原菌檢測(cè)中，檢測(cè)水平可法應(yīng)用到食源性病原菌檢測(cè)中，檢測(cè)水平可降至降至10CFU/ml10CFU/ml，用時(shí)僅，用時(shí)僅1h1h。3、噬菌體在食品產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用v 食源性疾病病

19、原的檢測(cè)技術(shù)v 作為食品添加劑v 噬菌體展示技術(shù)檢測(cè)真菌毒素3.2作為食品添加劑美國(guó)食品和藥物管理局批準(zhǔn)了一種由噬菌體病毒混合而成的產(chǎn)美國(guó)食品和藥物管理局批準(zhǔn)了一種由噬菌體病毒混合而成的產(chǎn)品，主要用于殺滅肉制品中的李氏桿菌。這是美國(guó)首次批準(zhǔn)將品，主要用于殺滅肉制品中的李氏桿菌。這是美國(guó)首次批準(zhǔn)將病毒用作食品添加劑。病毒用作食品添加劑。美藥管局專(zhuān)家稱，該產(chǎn)品在制備過(guò)程中可能留有殘毒，但試驗(yàn)美藥管局專(zhuān)家稱，該產(chǎn)品在制備過(guò)程中可能留有殘毒，但試驗(yàn)表明，這些微量的殘毒不會(huì)引起任何健康問(wèn)題。該產(chǎn)品包含表明，這些微量的殘毒不會(huì)引起任何健康問(wèn)題。該產(chǎn)品包含6 6種噬菌體病毒，可在熟肉片和香腸等包裝前噴灑在這

20、些肉制品種噬菌體病毒，可在熟肉片和香腸等包裝前噴灑在這些肉制品上，有效殺滅多種李氏桿菌，預(yù)防由這些細(xì)菌引起的食物中毒。上，有效殺滅多種李氏桿菌，預(yù)防由這些細(xì)菌引起的食物中毒。產(chǎn)品中所包含的噬菌體只會(huì)攻擊李氏桿菌，對(duì)人體和植物細(xì)胞產(chǎn)品中所包含的噬菌體只會(huì)攻擊李氏桿菌，對(duì)人體和植物細(xì)胞都不會(huì)產(chǎn)生影響。都不會(huì)產(chǎn)生影響。3、噬菌體在食品產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用v 食源性疾病病原的檢測(cè)技術(shù)v 作為食品添加劑v 噬菌體展示技術(shù)檢測(cè)真菌毒素3.3 噬菌體展示技術(shù)檢測(cè)真菌毒素v 噬菌體展示技術(shù)噬菌體展示技術(shù)(Phage display technology)(Phage display technology)是是20 2

21、0 世紀(jì)世紀(jì)80 80 年代逐步建立并發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)分子生物學(xué)新技術(shù)。年代逐步建立并發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)分子生物學(xué)新技術(shù)。它以噬菌體或噬粒為載體它以噬菌體或噬粒為載體, , 使外源肽或蛋白基因與噬菌體使外源肽或蛋白基因與噬菌體表面特定蛋白基因在其表面進(jìn)行融合表達(dá)表面特定蛋白基因在其表面進(jìn)行融合表達(dá), , 進(jìn)而通過(guò)親和進(jìn)而通過(guò)親和富集法篩選表達(dá)有特異肽或蛋白質(zhì)的噬菌體。富集法篩選表達(dá)有特異肽或蛋白質(zhì)的噬菌體。真菌毒素作為天然毒素廣泛存在于谷物等食品中，世界很多國(guó)家真菌毒素作為天然毒素廣泛存在于谷物等食品中，世界很多國(guó)家均有被污染的報(bào)告，由于真菌毒素屬于痕量污染物，因此檢測(cè)技均有被污染的報(bào)告，由于真菌毒

22、素屬于痕量污染物，因此檢測(cè)技術(shù)主要有各類(lèi)色譜法和利用抗體的免疫學(xué)方法。術(shù)主要有各類(lèi)色譜法和利用抗體的免疫學(xué)方法。其中其中高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLCHPLC）、氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用（）、氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MSGC-MS）優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：靈敏度和可靠性都很高：靈敏度和可靠性都很高缺點(diǎn)缺點(diǎn)：樣品處理繁瑣，儀器昂貴，現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)中難以普及使用：樣品處理繁瑣，儀器昂貴，現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)中難以普及使用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)(ELISA)(ELISA)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：可以同時(shí)大批量檢測(cè)樣品，攜帶方便，操作簡(jiǎn)便和經(jīng)濟(jì)：可以同時(shí)大批量檢測(cè)樣品，攜帶方便，操作簡(jiǎn)便和經(jīng)濟(jì), , 常以試劑盒的形

23、式出現(xiàn)且易商品化常以試劑盒的形式出現(xiàn)且易商品化缺點(diǎn)缺點(diǎn): :目前用于目前用于ELISA ELISA 檢測(cè)試劑盒的各類(lèi)毒素的單克隆抗體檢測(cè)試劑盒的各類(lèi)毒素的單克隆抗體(McAb) (McAb) 主要來(lái)源于小鼠雜交瘤細(xì)胞，在篩選單克隆抗體生產(chǎn)雜交瘤細(xì)胞主要來(lái)源于小鼠雜交瘤細(xì)胞，在篩選單克隆抗體生產(chǎn)雜交瘤細(xì)胞株系上，需要做雜交融合，亞克隆篩選，是一個(gè)長(zhǎng)期復(fù)雜的過(guò)程，株系上，需要做雜交融合，亞克隆篩選，是一個(gè)長(zhǎng)期復(fù)雜的過(guò)程，既耗費(fèi)財(cái)力、物力，又浪費(fèi)時(shí)間，且檢測(cè)所用真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品價(jià)既耗費(fèi)財(cái)力、物力，又浪費(fèi)時(shí)間，且檢測(cè)所用真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品價(jià)格昂貴。格昂貴。v 利用噬菌體展示技術(shù)制備抗體、模擬抗原表位，不僅繞過(guò)利用噬菌體展示技術(shù)制備抗體、模擬抗原表位，不僅繞過(guò)了細(xì)胞融合，而且可以以單克隆抗體（了細(xì)胞融合，而且可以以單克隆抗體（McAbMcAb） 或單鏈抗或單鏈抗體（體（ ScFv ScFv）為靶分子篩選真菌毒素的模擬抗原表位，代）為靶分子篩選真菌毒素的模擬抗原表位，代替真菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)品，建立無(wú)毒替真菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)品，建立無(wú)毒ELISAELISA檢測(cè)方法