怎樣正確采集病原微生物標(biāo)本要點(diǎn)教學(xué)課件

1、 解決方案解決方案 1.提高病原微生物的送檢率，強(qiáng)調(diào)在使用抗生素之 前采集標(biāo)本； 2.提高送檢標(biāo)本的質(zhì)量； 3.提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力。 期待明年的耐藥數(shù)據(jù)能真正反映我院病原菌的分 布和耐藥情況，可以用作經(jīng)驗(yàn)選藥的依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響因素 檢驗(yàn)前因素檢驗(yàn)中因素 檢驗(yàn)后因素 常見(jiàn)微生物標(biāo)本的正確采集常見(jiàn)微生物標(biāo)本的正確采集 血液和骨髓的采集; 痰標(biāo)本的采集; 咽拭子標(biāo)本的采集; 尿液標(biāo)本的采集; 膿、創(chuàng)傷感染標(biāo)本的采集; 穿刺液標(biāo)本的采集; 糞便標(biāo)本的采集; 血液和骨髓的采集血液和骨髓的采集 采血的時(shí)機(jī)？ 采血的方法？ 正確的采血量應(yīng)該是多少? 血培養(yǎng)陰/陽(yáng)性有什么臨床意義？

2、什么情況需要做血培養(yǎng)什么情況需要做血培養(yǎng) 有不明原因的發(fā)熱、體溫過(guò)低等癥狀； 懷疑有菌血癥或膿毒癥如休克、寒顫等; 嚴(yán)重的局部感染； 呼吸頻率加快等。 采集血培養(yǎng)標(biāo)本的最佳時(shí)間？采集血培養(yǎng)標(biāo)本的最佳時(shí)間？ 1.有發(fā)熱等癥狀時(shí)； 2.在使用抗生素的情況下； 3.懷疑有亞急性心內(nèi)膜炎時(shí)。 病例:女性患者，懷疑為亞急性心內(nèi)膜炎入院， 入院后當(dāng)天連續(xù)送三次血培養(yǎng)均為陰性，但臨 床上有明顯的膿毒血癥癥狀。微生物室注意到 三次血培養(yǎng)的抽血時(shí)間為4pm,6pm和9pm，與主 管醫(yī)生溝通后，建議兩小時(shí)內(nèi)連續(xù)送三次血培 養(yǎng)。結(jié)果第二批血培養(yǎng)中有二次為陽(yáng)性，均培 養(yǎng)出草綠色鏈球菌。 亞急性心內(nèi)膜炎亞急性心內(nèi)膜炎

3、懷疑有亞急性心內(nèi)膜炎或?qū)Ч芟嚓P(guān)性菌血癥時(shí)： 12小時(shí)內(nèi)采集三份血標(biāo)本 正確的采血方法正確的采血方法 采血時(shí)的皮膚消毒推薦采用三步消毒法： 1.首先用70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30秒鐘以上。 2.然后用一根碘酊或碘伏棉簽消毒皮膚（1%2%碘酊 30秒或10%碘伏消毒60秒），從穿刺點(diǎn)向外以 1.5cm2cm直徑畫(huà)圈進(jìn)行消毒。 3.最后用70%酒精脫碘。 注意對(duì)碘過(guò)敏的患者，只能用70%酒精消毒，消毒60秒 鐘，待穿刺部位酒精揮發(fā)干燥后穿刺采血。 血養(yǎng)瓶消毒程序： 1 用70%酒精或碘溶液(不要使用碘)消毒血培養(yǎng)瓶 橡皮塞子。 2 酒精作用約60秒。 3 在血液注入血培養(yǎng)瓶之前,用無(wú)菌紗布清除橡

4、皮 塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。 正確的采血量應(yīng)該是多少正確的采血量應(yīng)該是多少? ? 血培養(yǎng)應(yīng)采集多少次血培養(yǎng)應(yīng)采集多少次 1.推薦24h內(nèi)連續(xù)采集三次血培養(yǎng)標(biāo)本； 一次血培養(yǎng)約可以檢出72的血流感染，二次約可檢 出約93，三次約可檢出約97； 2.如果培養(yǎng)48h以后為陰性，若臨床懷疑為菌血癥的應(yīng)在 24h內(nèi)再連續(xù)采集三次血培養(yǎng)標(biāo)本； 3.不主張每天采集血培養(yǎng)標(biāo)本。 血培養(yǎng)陽(yáng)血培養(yǎng)陽(yáng)/ /陰性的臨床意義陰性的臨床意義 1.培養(yǎng)出革蘭陰性菌、金黃色葡萄球菌、腸球菌 等時(shí)，多數(shù)可以確認(rèn)為病原菌； 2.培養(yǎng)出凝固酶陰性葡萄球菌、草綠色鏈球菌、 芽胞桿菌等時(shí)，感染？污染？ 解決方案解決方案 需多

5、次多部位/ /天 采血。 24小時(shí)內(nèi)連續(xù)采集三次血培養(yǎng)標(biāo)本。 采集血培養(yǎng)標(biāo)本方面存在的問(wèn)題采集血培養(yǎng)標(biāo)本方面存在的問(wèn)題 1.采血的量不太準(zhǔn)確，很多培養(yǎng)采血量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超量； 2.采血的時(shí)機(jī)不夠準(zhǔn)確，采血時(shí)機(jī)與體溫變化的關(guān)系 不太熟悉； 3.采集標(biāo)本的次數(shù)和頻率不太準(zhǔn)確，很多醫(yī)生喜歡每 天采集一次或僅采集一次； 什么情況需要采集骨髓標(biāo)本什么情況需要采集骨髓標(biāo)本 1.疑為細(xì)菌性或真菌性骨髓炎的患者； 2.疑為傷寒感染的患者； 痰標(biāo)本的采集痰標(biāo)本的采集 要求采集肺深部的痰液，不要唾液。 一般采用自然咳痰法，但以氣管鏡 采集法標(biāo)本質(zhì)量最好。 自然咳痰法 ； 氣管鏡采集法； 小兒取痰法； 導(dǎo)管尖送檢； 下呼吸

6、道標(biāo)本下呼吸道標(biāo)本 所有病人的下呼吸道標(biāo)本應(yīng)在采集后立即送至微 生物室，并于1小時(shí)內(nèi)接種 室溫下放置1h會(huì)降低肺炎鏈球菌、流感嗜血桿 菌的分離率而定植于上呼吸道的非致病菌則會(huì) 過(guò)度生長(zhǎng) 下呼吸道標(biāo)本勿放冰箱或運(yùn)輸時(shí)勿置于冰塊中 痰涂片檢查是否標(biāo)本合格痰涂片檢查是否標(biāo)本合格 痰肉眼觀察: 記錄標(biāo)本外觀 唾液、帶血、粘液樣、水樣、膿性的、粘液 膿性、膿性粘液樣 顯微鏡檢查：取膿性部分涂在玻片上 作革蘭染色. 低倍視野下看涂片，記錄5個(gè)視野下 平均細(xì)胞數(shù)。 痰涂片的判定痰涂片的判定 分類(lèi) WBC 鱗狀上皮細(xì)胞 6 25 25 25 10-25 3 25 25 2 10-25 25 1 25 分類(lèi)中1

7、3類(lèi)不做培養(yǎng)，要求重新留取標(biāo)本； 4、5類(lèi)為合格標(biāo)本；6類(lèi)為氣管穿刺液時(shí)，如未見(jiàn)白細(xì)胞， 而鱗狀上皮細(xì)胞10/低倍，亦應(yīng)重新留取標(biāo)本。 痰標(biāo)本采集存在的問(wèn)題痰標(biāo)本采集存在的問(wèn)題 1.痰標(biāo)本的合格程度偏低，一般痰標(biāo)本的合格率不 到40%； 2.標(biāo)本的轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，很多標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室已經(jīng) 超過(guò)2小時(shí)。 咽拭子標(biāo)本的采集咽拭子標(biāo)本的采集 標(biāo)本采集應(yīng)在用藥前，最好在清晨，囑患者用清 水漱口，由檢查者將舌向外拉，使懸雍垂向外牽 引，將咽拭子超過(guò)舌根到達(dá)咽后壁或懸雍垂的后 側(cè)，在咽部肉眼見(jiàn)明顯發(fā)紅或有假膜處局部反復(fù) 涂抹棉拭(注意不要碰著口腔粘膜)，放入無(wú)菌試 管內(nèi)立即送檢。 尿液標(biāo)本的采集尿液標(biāo)本的采集

8、 中段尿采集法 導(dǎo)尿法 膀胱穿刺取尿法 留尿法 尿液標(biāo)本采集存在的問(wèn)題尿液標(biāo)本采集存在的問(wèn)題 1.隨機(jī)尿代替中段尿送檢，特別是門(mén)診病人； 2.部份標(biāo)本存在污染情況； 3.部份插管患者采集了尿袋中的尿液； 4.標(biāo)本中的轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。 膿、創(chuàng)傷感染標(biāo)本的采集膿、創(chuàng)傷感染標(biāo)本的采集 首先用無(wú)菌生理鹽水拭凈病灶表面的污染雜菌。 對(duì)已破潰的膿腫用無(wú)菌的棉拭子取深部的膿液和 分泌物；未破潰的膿腫消毒皮膚后，用無(wú)菌注射 器抽取膿液及分泌物立即送檢。如深部膿腫在送 需氧培養(yǎng)的同時(shí)應(yīng)考慮送厭氧培養(yǎng)，厭氧培養(yǎng)標(biāo) 本應(yīng)隔絕空氣立即送檢。當(dāng)創(chuàng)傷出血時(shí)，敷用藥 物2h以內(nèi)及燒傷在12h內(nèi)不應(yīng)采集標(biāo)本，此時(shí)獲得 陽(yáng)性結(jié)果

9、的機(jī)會(huì)很少。 穿刺液標(biāo)本的采集穿刺液標(biāo)本的采集 應(yīng)在患者用藥之前或停藥1-2d后進(jìn)行穿刺，標(biāo) 本應(yīng)立即送檢或保存于4冰箱。腦脊液標(biāo)本應(yīng) 保溫（25-37），抽2ml直接注入小兒瓶中,同 時(shí)再另抽1-2ml于無(wú)菌容器同時(shí)送檢并立即送檢。 糞便標(biāo)本的采集糞便標(biāo)本的采集 自然排便采集法自然排便采集法 直腸拭子采集法直腸拭子采集法 有腹瀉的病人，在送培養(yǎng)標(biāo)本的同時(shí)可以送 細(xì)菌涂片檢查?？股叵嚓P(guān)性腹瀉性腹瀉，培養(yǎng) 是陰性，但涂片檢查卻可以看到細(xì)菌比例失調(diào)， 涂片臨床意義大于培養(yǎng)。 生殖道標(biāo)本采集生殖道標(biāo)本采集 （一）送檢指征 1. 男性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn) 尿急、尿頻、尿痛 尿道分泌物增多 會(huì)陰部疼痛及陰囊疼

10、痛 性功能障礙 泌尿生殖器畸形和缺損 女性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)女性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn) 分泌物增多及性狀異常 尿道口搔癢及膿性分泌物流暢 下腹疼痛 月經(jīng)失調(diào) 陰道出血 外陰搔癢 外陰或陰道疼痛 性功能障礙 （二）標(biāo)本采集 生殖器官標(biāo)本包括子宮頸、陰道、前列腺； 男性及女性外生殖器的分泌物及經(jīng)血等。應(yīng)根 據(jù)感染的部位和可能的病原體決定用于病原學(xué) 診斷的標(biāo)本種類(lèi)、采集部位和采集方法等。陰 道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集， 收集于無(wú)菌試管內(nèi)送檢。 尿道分泌物尿道分泌物 1.女性尿道：患者排尿1小時(shí)后采集，首先拭去尿道 口的滲出物；再用拭子通過(guò)陰道，靠著恥骨聯(lián) 合，按摩尿道，采集分泌物；如未獲得分泌物， 清洗

11、外尿道，用滅菌紗布或棉球擦拭，用泌尿 生殖道拭子插入尿道24cm，旋轉(zhuǎn)拭子2秒。 2. 男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm， 旋轉(zhuǎn)拭子，至少停留20秒，而使之容易吸收。 陰道分泌物陰道分泌物 擦除過(guò)多的分泌物和排出液，用無(wú)菌棉拭子采 取陰道口內(nèi)4厘米內(nèi)側(cè)壁或后穹窿處分泌物，如 果需要涂片，需再用一個(gè)拭子。 男性前列腺男性前列腺 用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口， 沖洗尿道膀胱，從肛門(mén)用手指按摩前列腺，使前 列腺液溢出，用無(wú)菌容器收集。無(wú)肉眼可見(jiàn)膿液 時(shí)，可用滅菌拭子輕輕伸入前尿道內(nèi)，旋轉(zhuǎn)拭子 采集標(biāo)本。 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1.生殖器是開(kāi)放性器官，標(biāo)本采集過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵 循無(wú)菌操

12、作規(guī)程以減少雜菌污染。 2.由于陰道正常菌群的存在而使細(xì)菌的分離鑒定 受到干擾，所以在采集女性生殖道標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意盡 量減少或避免正常菌群的污染。 3.疑有宮腔感染，如遇產(chǎn)婦需行剖宮產(chǎn)，待胎兒 娩出后取宮腔分泌物，并同時(shí)取嬰兒耳拭子一同送 檢。 4.沙眼衣原體和病毒均在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，取材 時(shí)拭子應(yīng)在病變部位（移行上皮處稍內(nèi)）停留十幾 秒鐘，并采集盡可能多的上皮細(xì)胞。 5. 生殖道感染厭氧菌也較多見(jiàn)，疑有厭氧菌感染 時(shí)，標(biāo)本采集和運(yùn)送應(yīng)避免與氧氣接觸，最佳方法 是床邊采樣，直接接種至厭氧裝置內(nèi)。 6. 淋病奈瑟菌檢查時(shí)，取材的深度一定要夠，因 為淋球菌好發(fā)于柱狀上皮細(xì)胞而不是復(fù)層鱗狀上皮 細(xì)胞。不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道 及子宮頸3cm深轉(zhuǎn)動(dòng)并停留10-30s取樣送檢。 7. 淋病奈瑟菌抵抗力低，對(duì)外環(huán)境變化頗為敏感， 對(duì)寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有 足夠的成功率，取材后要盡快送檢，立即接種，標(biāo) 本離體時(shí)間越短越好。 微生物培養(yǎng)還應(yīng)注意的問(wèn)題微生物培養(yǎng)還應(yīng)注意的問(wèn)題 1.培養(yǎng)陽(yáng)性的分離菌不一定是真的病原菌，特 別從有菌部位來(lái)的，如痰標(biāo)本； 2.無(wú)菌部位培養(yǎng)出來(lái)的病原菌應(yīng)當(dāng)連續(xù)監(jiān)測(cè)， 若病原菌發(fā)生改變或治療效果不佳時(shí)應(yīng)考慮 更換抗生素； 3.細(xì)菌的耐藥性在治療過(guò)程中可以會(huì)發(fā)生改變， 要注意觀察是否有耐藥性的變遷。 醫(yī)院感