第八章 特殊毒性及其試驗(yàn)與評(píng)價(jià)方法(2)

1、No Image No Image 第二節(jié)第二節(jié) 生殖發(fā)育毒性及其試驗(yàn)生殖發(fā)育毒性及其試驗(yàn) 與評(píng)價(jià)方法與評(píng)價(jià)方法 No Image No Image 一、一、 生殖毒性試驗(yàn)與評(píng)定生殖毒性試驗(yàn)與評(píng)定 二、發(fā)育毒性試驗(yàn)與評(píng)定二、發(fā)育毒性試驗(yàn)與評(píng)定 No Image一、生殖毒性試驗(yàn)與評(píng)定 外來(lái)化合物對(duì)生殖過(guò)程的損害作用，即外來(lái)化合物對(duì)生殖過(guò)程的損害作用，即生殖毒性生殖毒性。 生殖毒性可發(fā)生于妊娠期，也可發(fā)生于妊娠前期和生殖毒性可發(fā)生于妊娠期，也可發(fā)生于妊娠前期和 哺乳期。哺乳期。 生殖毒性試驗(yàn)主要研究外來(lái)化合物對(duì)生殖細(xì)胞發(fā)生、生殖毒性試驗(yàn)主要研究外來(lái)化合物對(duì)生殖細(xì)胞發(fā)生、 卵細(xì)胞受精、胚胎形成、妊娠

2、、分娩和哺乳過(guò)程的卵細(xì)胞受精、胚胎形成、妊娠、分娩和哺乳過(guò)程的 損害及其評(píng)定。損害及其評(píng)定。過(guò)去也稱(chēng)為過(guò)去也稱(chēng)為繁殖試驗(yàn)繁殖試驗(yàn)。 No Image No Image 生殖毒性試驗(yàn)的目的在于了解外源化學(xué)物及其代生殖毒性試驗(yàn)的目的在于了解外源化學(xué)物及其代 謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體成年哺乳動(dòng)物的生殖功能和生育力謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體成年哺乳動(dòng)物的生殖功能和生育力 的影響。的影響。 多代繁殖試驗(yàn)在整個(gè)生命期內(nèi)接觸受試化學(xué)物，多代繁殖試驗(yàn)在整個(gè)生命期內(nèi)接觸受試化學(xué)物， 更符合人類(lèi)實(shí)際生活中長(zhǎng)期低劑量接觸食品添加更符合人類(lèi)實(shí)際生活中長(zhǎng)期低劑量接觸食品添加 劑、微量重金屬、農(nóng)藥及環(huán)境污染物的情況。劑、微量重金屬、農(nóng)藥及環(huán)境污染

3、物的情況。 No Image No Image （1）試驗(yàn)方法原則）試驗(yàn)方法原則 生殖毒性試驗(yàn)多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家生殖毒性試驗(yàn)多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家 兔。大鼠自然受孕率較小鼠為高，較為理想。兔。大鼠自然受孕率較小鼠為高，較為理想。 一般設(shè)三個(gè)劑量組，另設(shè)對(duì)照組。一般設(shè)三個(gè)劑量組，另設(shè)對(duì)照組。 No Image No Image 最高劑量組最高劑量組劑量應(yīng)該超過(guò)預(yù)期人類(lèi)實(shí)際接觸水平，劑量應(yīng)該超過(guò)預(yù)期人類(lèi)實(shí)際接觸水平， 希望能使親代動(dòng)物出現(xiàn)輕度中毒，但不出現(xiàn)死亡或希望能使親代動(dòng)物出現(xiàn)輕度中毒，但不出現(xiàn)死亡或 死亡率不超過(guò)死亡率不超過(guò)10%，也不能完全喪失生育能力。，也不能完全喪失

4、生育能力。 低劑量組低劑量組的親代動(dòng)物不應(yīng)觀察到任何中毒癥狀。的親代動(dòng)物不應(yīng)觀察到任何中毒癥狀。 另設(shè)另設(shè)中間劑量組中間劑量組應(yīng)僅能出現(xiàn)極為輕微的中毒癥狀。應(yīng)僅能出現(xiàn)極為輕微的中毒癥狀。 中間劑量與高劑量和低劑量應(yīng)呈等比級(jí)數(shù)。中間劑量與高劑量和低劑量應(yīng)呈等比級(jí)數(shù)。 No Image No Image 動(dòng)物接觸受試物的方式應(yīng)參照人類(lèi)實(shí)際接觸途徑。動(dòng)物接觸受試物的方式應(yīng)參照人類(lèi)實(shí)際接觸途徑。 一般可混入飼料或飲水中，由動(dòng)物攝??；也可采用一般可混入飼料或飲水中，由動(dòng)物攝??；也可采用 灌胃或膠囊法。灌胃或膠囊法。 利用大鼠或小鼠進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，每組雌雄各利用大鼠或小鼠進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，每組雌雄各1620只，只，

5、 或雌性或雌性1620只，雄性只，雄性810只。只。 No Image No Image （2）試驗(yàn)方法）試驗(yàn)方法 三代兩窩生殖試驗(yàn)三代兩窩生殖試驗(yàn) 大鼠斷奶或出生大鼠斷奶或出生8周后，開(kāi)始喂受試物或以其它周后，開(kāi)始喂受試物或以其它 方式與受試物接觸，共進(jìn)行方式與受試物接觸，共進(jìn)行812周，即直到性周，即直到性 發(fā)育成熟，相當(dāng)出生后發(fā)育成熟，相當(dāng)出生后4個(gè)月左右。每周至少稱(chēng)個(gè)月左右。每周至少稱(chēng) 體重一次，記錄進(jìn)食量并觀察有無(wú)中毒癥狀或死體重一次，記錄進(jìn)食量并觀察有無(wú)中毒癥狀或死 亡。亡。 No Image No Image 將雌雄親代動(dòng)物（將雌雄親代動(dòng)物（F0）同籠交配，雌雄比例為）同籠交配，

6、雌雄比例為1 1或或21，直到受孕或進(jìn)行，直到受孕或進(jìn)行3周為止。雌鼠受周為止。雌鼠受 孕后即單籠飼養(yǎng)，繼續(xù)接觸受試物。交配孕后即單籠飼養(yǎng)，繼續(xù)接觸受試物。交配3周周 后，如仍未受孕，則停止交配，并進(jìn)行生殖器后，如仍未受孕，則停止交配，并進(jìn)行生殖器 官病理學(xué)檢查。官病理學(xué)檢查。 No Image No Image 確定是否受孕的方法是每日清晨進(jìn)行雌性動(dòng)物陰道涂片，確定是否受孕的方法是每日清晨進(jìn)行雌性動(dòng)物陰道涂片， 檢查有無(wú)精子；亦可檢查陰道有無(wú)陰栓出現(xiàn)，以確定受精檢查有無(wú)精子；亦可檢查陰道有無(wú)陰栓出現(xiàn)，以確定受精 日期。小鼠陰栓可在陰道口存留較長(zhǎng)時(shí)間，但在大鼠極易日期。小鼠陰栓可在陰道口存留較

7、長(zhǎng)時(shí)間，但在大鼠極易 脫落，次晨檢查時(shí)往往在籠下糞便盤(pán)中檢出。發(fā)現(xiàn)陰栓或脫落，次晨檢查時(shí)往往在籠下糞便盤(pán)中檢出。發(fā)現(xiàn)陰栓或 檢出精子，即為受孕檢出精子，即為受孕0日，也有作為受孕第日，也有作為受孕第1日。日。 No Image 親代動(dòng)物（F0）所生仔鼠為第一代（F1）。出生后應(yīng)檢查每窩幼仔數(shù)、死 亡數(shù)以及肉眼可見(jiàn)幼仔畸形。出生后第4天和第21天逐個(gè)稱(chēng)取重量，仔鼠 斷奶后，母鼠休息10天，再與雄鼠交配一次，并生出第二窩仔鼠，親代共 生出仔鼠兩窩，分別為F1a和F1b。F1b出生后，將雄性親鼠淘汰，雌性親 鼠繼續(xù)喂受試物，直至F1b出生后21天斷奶為止。F1a斷奶后觀察其發(fā)育情 況，不再喂受試物。

8、F1b斷奶后，繼續(xù)接觸受試物8 12周，直到性發(fā)育 成熟，選出雌雄各1620只，按前法進(jìn)行交配。F1b所產(chǎn)第一窩幼仔為F2a， F2a斷奶后，其母鼠F1b休息10天，再次交配，所生幼仔為F2b，F(xiàn)2b斷奶后， 將F1b淘汰。F2b交配處理方法與F1b相同。但F2b也可只交配一次，所產(chǎn)仔 鼠為F3a，不再進(jìn)行第二次交配，試驗(yàn)結(jié)束。 No Image （斷奶或出生周）（斷奶或出生周） 給予受試物給予受試物8到到12周周 第一次交配第一次交配 第二次交配第二次交配 觀察三個(gè)月，喂飼普通飼觀察三個(gè)月，喂飼普通飼 料，觀察其生長(zhǎng)發(fā)育情況料，觀察其生長(zhǎng)發(fā)育情況 斷乳后給予受試斷乳后給予受試 物到周物到周

9、觀察三個(gè)月，喂飼普通飼觀察三個(gè)月，喂飼普通飼 料，觀察其生長(zhǎng)發(fā)育情況料，觀察其生長(zhǎng)發(fā)育情況 斷乳后給予受試斷乳后給予受試 物到周物到周 （斷奶或出生周）（斷奶或出生周） No Image No Image No Image 2兩代一窩和一代一窩生殖試驗(yàn) 近年來(lái)許多國(guó)家與機(jī)構(gòu)多規(guī)定采用兩代一窩或一代一 窩試驗(yàn)法。 兩代一窩生殖試驗(yàn)法基本程序與三代兩窩試驗(yàn)法相同， 但只進(jìn)行到第二代F2，每代只交配一窩。 No Image 兩代一窩生殖試驗(yàn)兩代一窩生殖試驗(yàn) F2斷奶，檢查發(fā)育情況斷奶，檢查發(fā)育情況 F2出生，每窩留只幼仔出生，每窩留只幼仔 F 交配 交配 斷奶，給予受試物斷奶，給予受試物 F1（每窩

10、選留幼仔只，雌雄各半）（每窩選留幼仔只，雌雄各半） 第第1619周周雌雄交配雌雄交配 出生第出生第8周給予受試物（周給予受試物（F0） No Image No Image No Image 在上述各種生殖毒性試驗(yàn)中，根據(jù)哺乳動(dòng)物全部在上述各種生殖毒性試驗(yàn)中，根據(jù)哺乳動(dòng)物全部 生育繁殖過(guò)程，可觀察下列生育繁殖過(guò)程，可觀察下列4個(gè)指標(biāo)：個(gè)指標(biāo)： 1受孕率受孕率反映雌性動(dòng)物生育能力以及雌性動(dòng)物受反映雌性動(dòng)物生育能力以及雌性動(dòng)物受 孕情況。孕情況。 受孕率受孕率= 100% 妊娠雌性動(dòng)物數(shù)妊娠雌性動(dòng)物數(shù) 交配雌性動(dòng)物數(shù)交配雌性動(dòng)物數(shù) （三）觀察指標(biāo)（三）觀察指標(biāo) No Image No Image 2

11、正常分娩率正常分娩率反映雌性動(dòng)物妊娠過(guò)程是否受到影反映雌性動(dòng)物妊娠過(guò)程是否受到影 響。響。 正常分娩率正常分娩率= 100% 正常分娩雌性動(dòng)物數(shù) 妊娠動(dòng)物數(shù) No Image No Image 3幼仔出生存活率幼仔出生存活率反映雌性動(dòng)物分娩過(guò)程是反映雌性動(dòng)物分娩過(guò)程是 否正常，如分娩過(guò)程受到影響，則幼仔往往在否正常，如分娩過(guò)程受到影響，則幼仔往往在 出生出生4天內(nèi)死亡。天內(nèi)死亡。 幼仔出生存活率幼仔出生存活率= 100% 出生后4天存活幼仔數(shù) 分娩時(shí)出生幼仔數(shù) No Image No Image 4幼仔哺乳成活率幼仔哺乳成活率反映雌性動(dòng)物授乳哺育幼反映雌性動(dòng)物授乳哺育幼 仔的能力。仔的能力。

12、幼仔哺乳成活率幼仔哺乳成活率= 21天斷奶幼仔存活數(shù) 出生后4天幼仔存活數(shù) 100% No Image（四）結(jié)果判定（四）結(jié)果判定 將試驗(yàn)組動(dòng)物各項(xiàng)觀察指標(biāo)統(tǒng)計(jì)結(jié)果與對(duì)照組動(dòng)將試驗(yàn)組動(dòng)物各項(xiàng)觀察指標(biāo)統(tǒng)計(jì)結(jié)果與對(duì)照組動(dòng) 物進(jìn)行比較，如試驗(yàn)動(dòng)物在交配、妊娠、幼仔存物進(jìn)行比較，如試驗(yàn)動(dòng)物在交配、妊娠、幼仔存 活、幼仔發(fā)育（哺育）等方面受到影響，則說(shuō)明活、幼仔發(fā)育（哺育）等方面受到影響，則說(shuō)明 受試物對(duì)動(dòng)物繁殖功能有損害作用。受試物對(duì)動(dòng)物繁殖功能有損害作用。 No Image二、發(fā)育毒性試驗(yàn)與評(píng)定 1. 基本概念基本概念 發(fā)育毒性指發(fā)育毒性指出生前出生前經(jīng)父體和（或）母體接觸外源經(jīng)父體和（或）母體接觸

13、外源 理化因素引起的在子代到達(dá)成體之前內(nèi)出現(xiàn)的有理化因素引起的在子代到達(dá)成體之前內(nèi)出現(xiàn)的有 害作用，包括害作用，包括結(jié)構(gòu)畸形、生長(zhǎng)遲緩、功能障礙及結(jié)構(gòu)畸形、生長(zhǎng)遲緩、功能障礙及 死亡。死亡。 能造成發(fā)育毒性的物質(zhì)稱(chēng)為發(fā)育毒物。能造成發(fā)育毒性的物質(zhì)稱(chēng)為發(fā)育毒物。 No Image No Image 畸形：指出生前因素引起發(fā)育生物體的嚴(yán)重的解剖 學(xué)上形態(tài)結(jié)構(gòu)的缺陷。 致畸性和致畸作用：均指在妊娠期（出生前）接觸 外源性理化因素引起后代結(jié)構(gòu)畸形的特性或作用。 變異：是由遺傳和遺傳外因素控制的外觀變化，或 由于分化改變而引起的中途歧異。 No Image 2. 發(fā)育毒性的表現(xiàn)發(fā)育毒性的表現(xiàn) 生長(zhǎng)遲緩生

14、長(zhǎng)遲緩 即胚胎與胎仔的發(fā)育過(guò)程在外來(lái)化合物影響下，較正常的即胚胎與胎仔的發(fā)育過(guò)程在外來(lái)化合物影響下，較正常的 發(fā)育過(guò)程緩慢。發(fā)育過(guò)程緩慢。 致畸作用致畸作用 由于外來(lái)化合物干擾，活產(chǎn)胎仔胎兒出生時(shí)，某種器官表由于外來(lái)化合物干擾，活產(chǎn)胎仔胎兒出生時(shí)，某種器官表 現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)異常。致畸作用所表現(xiàn)的形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，在出現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)異常。致畸作用所表現(xiàn)的形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，在出 生后立即可被發(fā)現(xiàn)。生后立即可被發(fā)現(xiàn)。 No Image No Image 功能不全或異常功能不全或異常 即胎仔的生化、生理、代謝、免疫、神經(jīng)活動(dòng)及即胎仔的生化、生理、代謝、免疫、神經(jīng)活動(dòng)及 行為的缺陷或異常。功能不全或異常往往在出生行為的

15、缺陷或異常。功能不全或異常往往在出生 后一定時(shí)間才被發(fā)現(xiàn)，因?yàn)檎Ｇ闆r下，有些功后一定時(shí)間才被發(fā)現(xiàn)，因?yàn)檎Ｇ闆r下，有些功 能在出生后一定時(shí)間才發(fā)育完全。能在出生后一定時(shí)間才發(fā)育完全。 No Image No Image 胚胎或胎仔致死作用胚胎或胎仔致死作用 某些外來(lái)化合物在一定劑量范圍內(nèi)，可在胚胎或胎仔發(fā)育某些外來(lái)化合物在一定劑量范圍內(nèi)，可在胚胎或胎仔發(fā)育 期間對(duì)胚胎或胎仔具有損害作用，并使其死亡。具體表現(xiàn)期間對(duì)胚胎或胎仔具有損害作用，并使其死亡。具體表現(xiàn) 為天然流產(chǎn)或死產(chǎn)、死胎率增加。為天然流產(chǎn)或死產(chǎn)、死胎率增加。 No Image 發(fā)育毒性研究的目的是通過(guò)計(jì)數(shù)胚胎或胎仔發(fā)育毒性研究的目的

16、是通過(guò)計(jì)數(shù)胚胎或胎仔 吸收或死亡數(shù)，測(cè)量胎仔的重量和性別比，吸收或死亡數(shù)，測(cè)量胎仔的重量和性別比， 檢查外觀、內(nèi)臟和骨骼的形態(tài)，來(lái)識(shí)別受試檢查外觀、內(nèi)臟和骨骼的形態(tài)，來(lái)識(shí)別受試 物有無(wú)對(duì)胚胎或胎仔的致死、致畸或其他毒物有無(wú)對(duì)胚胎或胎仔的致死、致畸或其他毒 性作用。性作用。 No Image 最佳聯(lián)合方案是對(duì)成年動(dòng)物進(jìn)行染毒并包括 子代從受精卵到性成熟所有生長(zhǎng)發(fā)育階段。 觀察期應(yīng)貫穿一個(gè)完整的生命周期，以 檢測(cè)近、遠(yuǎn)期效應(yīng)。 最常選用的方案為三階段試驗(yàn) 。 No Image 三段生殖試驗(yàn)圖解三段生殖試驗(yàn)圖解 生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn) 胚體胚體胎體毒性試驗(yàn)（致畸試驗(yàn)

17、）胎體毒性試驗(yàn)（致畸試驗(yàn)） 出生前后發(fā)育毒性試驗(yàn)出生前后發(fā)育毒性試驗(yàn) No Image I 階段試驗(yàn)階段試驗(yàn) 雌雄交配前雌雄交配前-受孕受孕-雌性受精雌性受精-雌性著床期雌性著床期 間染毒間染毒 研究對(duì)成年雌雄性的生殖功能、配子的研究對(duì)成年雌雄性的生殖功能、配子的 發(fā)生及成熟、交配行為、受精、著床前的發(fā)生及成熟、交配行為、受精、著床前的 發(fā)育和著床的影響發(fā)育和著床的影響 No Image 階段試驗(yàn)階段試驗(yàn) 從著床到硬腭閉合期間染毒從著床到硬腭閉合期間染毒 研究對(duì)成年雌性生殖功能、胚胎研究對(duì)成年雌性生殖功能、胚胎 發(fā)育、器官形成期的發(fā)育毒性發(fā)育、器官形成期的發(fā)育毒性 No Image 階段試驗(yàn)階

18、段試驗(yàn) 從著床到幼仔斷乳期間對(duì)孕（乳）母染毒從著床到幼仔斷乳期間對(duì)孕（乳）母染毒 從著床到子代性成熟的母體生殖毒性（妊娠、從著床到子代性成熟的母體生殖毒性（妊娠、 分娩和哺乳）和子代的發(fā)育毒性（胚胎、胎兒生分娩和哺乳）和子代的發(fā)育毒性（胚胎、胎兒生 長(zhǎng)發(fā)育，新生幼仔宮外生活的適應(yīng)性，斷乳前后長(zhǎng)發(fā)育，新生幼仔宮外生活的適應(yīng)性，斷乳前后 的生長(zhǎng)發(fā)育，獨(dú)立生活能力和性功能成熟）的生長(zhǎng)發(fā)育，獨(dú)立生活能力和性功能成熟） No Image 人、大鼠和家兔的致畸作用關(guān)鍵期的比較，短線表示人、大鼠和家兔的致畸作用關(guān)鍵期的比較，短線表示“靶窗靶窗” No Image No Image 3. 發(fā)育毒性作用評(píng)價(jià)發(fā)育

19、毒性作用評(píng)價(jià) 發(fā)育毒性主要表現(xiàn)為致畸作用，所以發(fā)育毒性主要表現(xiàn)為致畸作用，所以發(fā)育毒性作發(fā)育毒性作 用評(píng)價(jià)主要是評(píng)價(jià)受試物的致畸作用。用評(píng)價(jià)主要是評(píng)價(jià)受試物的致畸作用。 No Image No Image 通過(guò)致畸試驗(yàn)可以確定一種受試物是否具有致畸通過(guò)致畸試驗(yàn)可以確定一種受試物是否具有致畸 作用。作用。致畸試驗(yàn)致畸試驗(yàn)是檢查受試外源化學(xué)物能否通過(guò)是檢查受試外源化學(xué)物能否通過(guò) 妊娠母體引起胚胎毒性或后代畸形的動(dòng)物試驗(yàn)。妊娠母體引起胚胎毒性或后代畸形的動(dòng)物試驗(yàn)。 胚胎在器官形成期，可因受到化學(xué)物或放射性物胚胎在器官形成期，可因受到化學(xué)物或放射性物 質(zhì)的作用，使細(xì)胞分化、器官形成和正常發(fā)育受質(zhì)的作用

20、，使細(xì)胞分化、器官形成和正常發(fā)育受 到阻滯，以致出現(xiàn)胎仔器官的器質(zhì)性缺陷而呈現(xiàn)到阻滯，以致出現(xiàn)胎仔器官的器質(zhì)性缺陷而呈現(xiàn) 畸形?；巍?No Image 1. 母體效應(yīng)母體效應(yīng): 受試物對(duì)母體產(chǎn)生了損害作用，從而影響 了正常妊娠，而不是對(duì)胚胎的直接損害。 2. 胚胎效應(yīng)胚胎效應(yīng): 受試物對(duì)胚胎的直接損害作用。 3. 出生前胎兒效應(yīng)出生前胎兒效應(yīng): 出生胎兒出現(xiàn)外表或內(nèi)臟畸形。 4. 出生后效應(yīng)出生后效應(yīng): 引起子代的生理功能或生理結(jié)構(gòu)的缺陷。 如后天生長(zhǎng)發(fā)育或生殖功能受影響。 致畸作用包括：致畸作用包括： No Image No Image 受試動(dòng)物接觸外源化學(xué)物的方式與途徑應(yīng)與人體實(shí)際接觸情

21、受試動(dòng)物接觸外源化學(xué)物的方式與途徑應(yīng)與人體實(shí)際接觸情 況一致，一般多經(jīng)口給予，況一致，一般多經(jīng)口給予，雌鼠妊娠的第雌鼠妊娠的第715天染毒，常用天染毒，常用 灌胃方式。灌胃方式。 試驗(yàn)期間每試驗(yàn)期間每23天稱(chēng)取孕鼠體重。通過(guò)體重變化可觀察受試天稱(chēng)取孕鼠體重。通過(guò)體重變化可觀察受試 動(dòng)物的妊娠情況和胚胎發(fā)育情況。動(dòng)物的妊娠情況和胚胎發(fā)育情況。 受孕鼠的體重如持續(xù)增長(zhǎng)，則表示妊娠過(guò)程及胚胎發(fā)育正常；受孕鼠的體重如持續(xù)增長(zhǎng)，則表示妊娠過(guò)程及胚胎發(fā)育正常； 如體重停止增長(zhǎng)或下降，可能由于受試物的毒性作用或母體如體重停止增長(zhǎng)或下降，可能由于受試物的毒性作用或母體 的其它原因，引起胚胎死亡或流產(chǎn)。的其它原

22、因，引起胚胎死亡或流產(chǎn)。 No Image No Image傳統(tǒng)常規(guī)致畸試驗(yàn) （1）動(dòng)物選擇）動(dòng)物選擇 （2）劑量分組）劑量分組 （3）動(dòng)物交配處理）動(dòng)物交配處理 （4）胎仔檢查）胎仔檢查 （5）數(shù)據(jù)處理）數(shù)據(jù)處理 （6）結(jié)果評(píng)定）結(jié)果評(píng)定 No Image No Image （1）動(dòng)物選擇）動(dòng)物選擇 致畸試驗(yàn)的動(dòng)物選擇，除參照毒性試驗(yàn)中選致畸試驗(yàn)的動(dòng)物選擇，除參照毒性試驗(yàn)中選 擇動(dòng)物的一般原則（食性和對(duì)受試物代謝過(guò)擇動(dòng)物的一般原則（食性和對(duì)受試物代謝過(guò) 程與人類(lèi)接近，體型小，馴服，容易飼養(yǎng)和程與人類(lèi)接近，體型小，馴服，容易飼養(yǎng)和 繁殖及價(jià)廉）外，還應(yīng)特別注意繁殖及價(jià)廉）外，還應(yīng)特別注意妊娠過(guò)

23、程較妊娠過(guò)程較 短、每窩產(chǎn)仔數(shù)較多和胎盤(pán)構(gòu)造及厚度與人短、每窩產(chǎn)仔數(shù)較多和胎盤(pán)構(gòu)造及厚度與人 類(lèi)接近等特點(diǎn)。類(lèi)接近等特點(diǎn)。 No Image 根據(jù)上述原則綜合考慮，致畸試驗(yàn)可選用二種哺乳動(dòng)根據(jù)上述原則綜合考慮，致畸試驗(yàn)可選用二種哺乳動(dòng) 物，一般首先考慮大鼠，此外可采用小鼠或家免。物，一般首先考慮大鼠，此外可采用小鼠或家免。大大 鼠受孕率高，每窩產(chǎn)仔鼠受孕率高，每窩產(chǎn)仔810只，易于得到足夠標(biāo)本只，易于得到足夠標(biāo)本 數(shù)；而且經(jīng)驗(yàn)證明，大鼠對(duì)大多數(shù)外來(lái)化合物代謝過(guò)數(shù)；而且經(jīng)驗(yàn)證明，大鼠對(duì)大多數(shù)外來(lái)化合物代謝過(guò) 程，基本與人類(lèi)近似，故可首先考慮。程，基本與人類(lèi)近似，故可首先考慮。 小鼠自然畸形發(fā)生率

24、較大鼠高，但低于家兔，對(duì)形成小鼠自然畸形發(fā)生率較大鼠高，但低于家兔，對(duì)形成 腭裂的致畸物更較敏感。腭裂的致畸物更較敏感。 家兔為草食動(dòng)物，與人類(lèi)代謝功能差異較大，妊娠期家兔為草食動(dòng)物，與人類(lèi)代謝功能差異較大，妊娠期 不夠恒定，有時(shí)延長(zhǎng)至不夠恒定，有時(shí)延長(zhǎng)至36天，自然畸形發(fā)生率也較高。天，自然畸形發(fā)生率也較高。 No Image （2）劑量分組）劑量分組 致畸試驗(yàn)中劑量分組的一般原則是一方面要致畸試驗(yàn)中劑量分組的一般原則是一方面要 求出最大無(wú)作用劑量，以及引起致畸的閾劑求出最大無(wú)作用劑量，以及引起致畸的閾劑 量，同時(shí)還要保持母體生育能力，不致母體量，同時(shí)還要保持母體生育能力，不致母體 大批流產(chǎn)

25、和過(guò)多胚胎死亡，也應(yīng)避免較多母大批流產(chǎn)和過(guò)多胚胎死亡，也應(yīng)避免較多母 體死亡。體死亡。 No Image 高劑量組：高劑量組：LD50的的1/5或或1/3。 原則是引起母體輕度中毒，死亡率原則是引起母體輕度中毒，死亡率10%; 低劑量組：低劑量組：LD50的的1/301/100。 原則是不引起母體的任何中毒癥狀。原則是不引起母體的任何中毒癥狀。 中劑量組：中劑量組：在高、低劑量之間成等比關(guān)系。在高、低劑量之間成等比關(guān)系。 原則是只引起母體極輕微毒性反應(yīng)。原則是只引起母體極輕微毒性反應(yīng)。 或者以實(shí)際接觸量為低劑量，以其或者以實(shí)際接觸量為低劑量，以其10倍量為高劑量。倍量為高劑量。 No Imag

26、e （3）動(dòng)物交配處理）動(dòng)物交配處理 將性成熟雌雄動(dòng)物按雌雄將性成熟雌雄動(dòng)物按雌雄l1或或21比例同籠交配。比例同籠交配。 每日將已確定受孕雌鼠隨機(jī)分入各劑量組和對(duì)照組。每日將已確定受孕雌鼠隨機(jī)分入各劑量組和對(duì)照組。 No Image No Image 由于致畸作用有極為明確的敏感期，應(yīng)精確掌由于致畸作用有極為明確的敏感期，應(yīng)精確掌 握動(dòng)物接觸受試物的時(shí)間，必須在握動(dòng)物接觸受試物的時(shí)間，必須在器官發(fā)生期器官發(fā)生期。 如提前在著床前接觸，將影響受精卵的著床。如提前在著床前接觸，將影響受精卵的著床。 如在胚胎發(fā)育的最初階段，例如裂卵期和囊胚如在胚胎發(fā)育的最初階段，例如裂卵期和囊胚 期接觸受試物，往

27、往可使胚胎死亡，不能造成期接觸受試物，往往可使胚胎死亡，不能造成 畸形。如在器官發(fā)生期以后接觸受試物，則各畸形。如在器官發(fā)生期以后接觸受試物，則各 種器官已發(fā)育成熟，致畸作用不易表現(xiàn)。種器官已發(fā)育成熟，致畸作用不易表現(xiàn)。 只有器官發(fā)生期的胚胎，對(duì)致畸物最為敏感，只有器官發(fā)生期的胚胎，對(duì)致畸物最為敏感， 易于出現(xiàn)畸形。易于出現(xiàn)畸形。 No Image No Image 接觸受試物的方式與途徑應(yīng)與人體實(shí)際接觸情況接觸受試物的方式與途徑應(yīng)與人體實(shí)際接觸情況 一致，一般多經(jīng)口給予。一致，一般多經(jīng)口給予。 也可采用灌胃方式，以保證劑量準(zhǔn)確，效果較混也可采用灌胃方式，以保證劑量準(zhǔn)確，效果較混 入飼料喂給為

28、好。在特殊情況下，也可采用腹腔入飼料喂給為好。在特殊情況下，也可采用腹腔 注射法，效果與經(jīng)口近似。注射法，效果與經(jīng)口近似。 No Image No Image 試驗(yàn)期間每試驗(yàn)期間每23天稱(chēng)取母鼠體重。一方面可根據(jù)天稱(chēng)取母鼠體重。一方面可根據(jù) 體重增長(zhǎng)，隨時(shí)調(diào)整給予受試物的劑量，同時(shí)也體重增長(zhǎng)，隨時(shí)調(diào)整給予受試物的劑量，同時(shí)也 可觀察受孕動(dòng)物的妊娠情況和胚胎發(fā)育情況。受可觀察受孕動(dòng)物的妊娠情況和胚胎發(fā)育情況。受 孕動(dòng)物的體重如持續(xù)增長(zhǎng)，則表示妊娠過(guò)程及胚孕動(dòng)物的體重如持續(xù)增長(zhǎng)，則表示妊娠過(guò)程及胚 胎發(fā)育正常；如體重停止增長(zhǎng)或下降，可能由于胎發(fā)育正常；如體重停止增長(zhǎng)或下降，可能由于 受試物的毒性作

29、用或母體的其它原因，引起胚胎受試物的毒性作用或母體的其它原因，引起胚胎 死亡或流產(chǎn)。死亡或流產(chǎn)。 No Image No Image （4）胎仔檢查胎仔檢查 鼠類(lèi)有食畸形胎仔的習(xí)性，應(yīng)在預(yù)期分娩前鼠類(lèi)有食畸形胎仔的習(xí)性，應(yīng)在預(yù)期分娩前1 d2 d處死母鼠進(jìn)行檢查。處死母鼠進(jìn)行檢查。 一般大鼠在受孕后第一般大鼠在受孕后第1920d，小鼠第，小鼠第1819d。 剖檢前稱(chēng)量并記錄母鼠最終體重。剖檢前稱(chēng)量并記錄母鼠最終體重。 常采用頸椎脫臼法或斷頭處死法處死動(dòng)物。常采用頸椎脫臼法或斷頭處死法處死動(dòng)物。 從腹中線剖腹，暴露子宮和卵巢，為胎仔檢查做從腹中線剖腹，暴露子宮和卵巢，為胎仔檢查做 準(zhǔn)備。準(zhǔn)備。

30、No Image No Image 活產(chǎn)胎仔取出后，先檢查性別，逐只稱(chēng)重，并按活產(chǎn)胎仔取出后，先檢查性別，逐只稱(chēng)重，并按 窩計(jì)算平均體重，然后由下列幾方面進(jìn)行畸形檢窩計(jì)算平均體重，然后由下列幾方面進(jìn)行畸形檢 查：查：外觀外觀畸形肉眼檢查，例如露腦；畸形肉眼檢查，例如露腦；肉眼檢肉眼檢 查查內(nèi)臟內(nèi)臟及軟組織畸形，例如腭裂；及軟組織畸形，例如腭裂；骨骼骨骼畸形檢畸形檢 查，例如顱頂骨缺損，分叉肋等?；螜z查只限查，例如顱頂骨缺損，分叉肋等?；螜z查只限 活產(chǎn)胎仔?；町a(chǎn)胎仔。 No Image No Image 以上檢查只能檢出結(jié)構(gòu)與形態(tài)異常的畸形，不能檢以上檢查只能檢出結(jié)構(gòu)與形態(tài)異常的畸形，不能檢

31、 出可能發(fā)生的生化功能或神經(jīng)行為缺陷。因此有人出可能發(fā)生的生化功能或神經(jīng)行為缺陷。因此有人 主張將試驗(yàn)雌鼠保留主張將試驗(yàn)雌鼠保留1/4左右，待其自然分娩，并左右，待其自然分娩，并 將出生幼仔飼養(yǎng)觀察，至少到斷奶，以便檢查可能將出生幼仔飼養(yǎng)觀察，至少到斷奶，以便檢查可能 存在的先天缺陷和生理功能異常。存在的先天缺陷和生理功能異常。 No Image No Image 表表7-3 常見(jiàn)的外觀畸形常見(jiàn)的外觀畸形 頭部頭部 軀干軀干 四肢四肢 頭部頭部 軀干軀干 四肢四肢 無(wú)腦無(wú)腦 腦鼓出腦鼓出 小頭小頭 顏面裂顏面裂 開(kāi)眼開(kāi)眼 脊柱裂脊柱裂 脊髓鼓出脊髓鼓出 胸骨裂胸骨裂 腹裂腹裂 鎖肛鎖肛 前或后

32、肢形成不全前或后肢形成不全 多指多指(趾趾) 少指少指(趾趾) 畸形指畸形指(趾趾) 并指并指(趾趾) 單鼻孔單鼻孔 無(wú)耳無(wú)耳 無(wú)鄂或小鄂無(wú)鄂或小鄂 兔唇兔唇 無(wú)頜或小頜無(wú)頜或小頜 卷尾卷尾 短尾短尾 無(wú)尾無(wú)尾 短指短指(趾趾) No Image No Image 表表7-4 常見(jiàn)的內(nèi)臟畸形常見(jiàn)的內(nèi)臟畸形 頭部頭部 胸部胸部 腹部腹部 嗅球發(fā)育不全嗅球發(fā)育不全 無(wú)腦無(wú)腦 腦室擴(kuò)張腦室擴(kuò)張 腦室積液腦室積液 無(wú)眼球無(wú)眼球 小眼球小眼球 鼻中隔缺損鼻中隔缺損 左心位左心位 右大動(dòng)脈弓右大動(dòng)脈弓 心房心房(室室)中隔中隔 缺陷缺陷 食管閉鎖食管閉鎖 肺發(fā)育不全肺發(fā)育不全 肺葉融合肺葉融合 膈疝膈疝

33、肝分葉異常肝分葉異常 無(wú)腎無(wú)腎 腎積水腎積水 馬蹄腎或不對(duì)稱(chēng)移位馬蹄腎或不對(duì)稱(chēng)移位 輸尿管積水輸尿管積水 無(wú)膀胱無(wú)膀胱 無(wú)睪丸或無(wú)卵巢、子宮，睪丸發(fā)育不無(wú)睪丸或無(wú)卵巢、子宮，睪丸發(fā)育不 全全(單側(cè)或雙側(cè)單側(cè)或雙側(cè)) No Image No Image 表表7-5 常見(jiàn)的骨骼畸形常見(jiàn)的骨骼畸形 部位部位畸形及特征畸形及特征 顱骨顱骨 枕骨枕骨 頸椎骨頸椎骨 胸骨胸骨 肋骨肋骨 腰椎腰椎 四肢骨四肢骨 尾椎骨尾椎骨 盤(pán)骨盤(pán)骨 缺損、骨化遲緩缺損、骨化遲緩(表現(xiàn)為囟門(mén)過(guò)大表現(xiàn)為囟門(mén)過(guò)大) 缺損、缺失缺損、缺失 缺損、椎弓不連續(xù)、骨化遲緩缺損、椎弓不連續(xù)、骨化遲緩 缺損或消失、骨化遲緩、點(diǎn)狀或不到正常

34、的缺損或消失、骨化遲緩、點(diǎn)狀或不到正常的1/2 多肋多肋(正常大、小鼠有正常大、小鼠有13對(duì)肋骨對(duì)肋骨)、少肋、短肋、分叉肋、波、少肋、短肋、分叉肋、波 狀肋狀肋 缺失、分裂變形缺失、分裂變形 多骨、缺失多骨、缺失 缺失缺失 缺失、椎弓不連續(xù)、融合缺失、椎弓不連續(xù)、融合 No Image No Image 表表7-6 致畸試驗(yàn)記錄內(nèi)容致畸試驗(yàn)記錄內(nèi)容 動(dòng)物交配給受試物期動(dòng)物交配給受試物期解剖檢查時(shí)解剖檢查時(shí)胎仔檢查胎仔檢查 動(dòng)物編號(hào)動(dòng)物編號(hào) 動(dòng)物種、品系動(dòng)物種、品系 交配時(shí)周齡交配時(shí)周齡 確認(rèn)受孕確認(rèn)受孕 臨床癥狀臨床癥狀 進(jìn)食進(jìn)水量進(jìn)食進(jìn)水量 受試物及溶劑受試物及溶劑 劑量劑量 給樣途徑給樣

35、途徑 給樣期限給樣期限 母體解剖所見(jiàn)母體解剖所見(jiàn) 卵巢重量卵巢重量 黃體數(shù)黃體數(shù) 著床數(shù)著床數(shù) 胎盤(pán)重量胎盤(pán)重量 胎仔子宮內(nèi)位置胎仔子宮內(nèi)位置 死胎數(shù)死胎數(shù) 活胎數(shù)活胎數(shù) 胎仔重胎仔重 體表檢查體表檢查 骨骼檢查骨骼檢查 內(nèi)臟檢查內(nèi)臟檢查 No Image No Image （5）數(shù)據(jù)處理）數(shù)據(jù)處理 在致畸試驗(yàn)結(jié)果評(píng)定時(shí)，主要計(jì)算畸胎總數(shù)和畸形總數(shù)。計(jì)在致畸試驗(yàn)結(jié)果評(píng)定時(shí)，主要計(jì)算畸胎總數(shù)和畸形總數(shù)。計(jì) 算算畸胎總數(shù)畸胎總數(shù)時(shí)，每一活產(chǎn)幼仔出現(xiàn)一種或一種以上畸形均作時(shí)，每一活產(chǎn)幼仔出現(xiàn)一種或一種以上畸形均作 為一個(gè)畸胎。計(jì)算為一個(gè)畸胎。計(jì)算畸形總數(shù)畸形總數(shù)時(shí)，在同一幼仔每出現(xiàn)一種畸形，時(shí)，在同

36、一幼仔每出現(xiàn)一種畸形， 即作為一個(gè)畸形；如出現(xiàn)二種或二個(gè)畸形，則作為二個(gè)畸形即作為一個(gè)畸形；如出現(xiàn)二種或二個(gè)畸形，則作為二個(gè)畸形 計(jì)，并依此類(lèi)推。計(jì)，并依此類(lèi)推。 計(jì)算時(shí)還要對(duì)劑量效應(yīng)（反應(yīng)）關(guān)系加以分析。更重要的是計(jì)算時(shí)還要對(duì)劑量效應(yīng)（反應(yīng)）關(guān)系加以分析。更重要的是 按下列指標(biāo)將各劑量組與對(duì)照組結(jié)果進(jìn)行比較。按下列指標(biāo)將各劑量組與對(duì)照組結(jié)果進(jìn)行比較。 No Image No Image 活產(chǎn)幼仔平均畸形出現(xiàn)數(shù)活產(chǎn)幼仔平均畸形出現(xiàn)數(shù)：即根據(jù)出現(xiàn)的畸形總數(shù)，：即根據(jù)出現(xiàn)的畸形總數(shù)， 計(jì)算每個(gè)活產(chǎn)幼仔出現(xiàn)的畸形平均數(shù)。對(duì)較為重要的畸形，計(jì)算每個(gè)活產(chǎn)幼仔出現(xiàn)的畸形平均數(shù)。對(duì)較為重要的畸形， 還可分別單獨(dú)進(jìn)行計(jì)數(shù)。還可分別單獨(dú)進(jìn)行計(jì)數(shù)。 活產(chǎn)幼仔平均畸形出現(xiàn)