氧化苦參堿對局灶性腦缺血大鼠腦組織超微結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減氧化苦參堿對局灶性腦缺血大鼠腦組織超微結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用（作者：單位：郵編：）作者：張鑒清 崔新明 呂文偉 李娜 陳霞【摘要】 目的 觀察氧化苦參堿（Oxymatrine，OMT）對局灶性腦缺 血大鼠腦組織超微結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用。 方法 將健康Wistar大鼠隨機(jī)分 為模型組、假手術(shù)組、路路通組（LLT）及OMT 35、70及105 mg/kg 三個(gè)不同劑量組，每組8只。采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血模型， 測定各組大鼠神經(jīng)學(xué)評分、腦梗死體積及腦組織超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果與模型組相比，OMT各劑量組均能降低局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)學(xué) 評分（P0.05）及縮小腦梗死體積（P0

2、.01）。電鏡觀察發(fā)現(xiàn) OMT 70及 105 mg/kg劑量組能夠改善腦組織神經(jīng)元及神經(jīng)氈的空化現(xiàn)象，對線粒體的結(jié)構(gòu)也起到了一定的保護(hù)作用。結(jié)論 氧化苦參堿能夠減輕局灶性腦缺血大鼠腦組織超微結(jié)構(gòu)的損傷， 對缺血腦組織具有一定的保 護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】氧化苦參堿;腦缺血;超微結(jié)構(gòu)氧化苦參堿（Oxymatrine，OMT）是槐屬植物苦豆子、苦參等所含生物堿的主要成分1。研究表明OMT具有多種藥理作用，主要表現(xiàn) 在抗炎、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、強(qiáng)心、降壓、抗心律失常對心肌缺血和梗死的 保護(hù)作用等方面26。李娜等7的研究證明OMT對于大鼠腦 缺血損傷也具有一定的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)旨在從腦組織超微結(jié)構(gòu)的改 變探討OM

3、T對于大鼠局灶性腦缺血性損傷的保護(hù)作用。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動物分組及給藥 健康雄性 Wistar大鼠，體重280 320 g ,由長春高新醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗(yàn)研究中心提供，合格證號 SCXK（吉）20032004。將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、路 路通組（LLT組）及OMT 35、70及105 mg/kg劑量組。模型組和假手 術(shù)組腹腔注射等容量的生理鹽水，LLT組腹腔注射路路通31.25mg/kg。各組動物于制備模型后連續(xù)給藥 5 d，末次給藥30 min后處 死動物。1.2實(shí)驗(yàn)儀器與藥品LLT注射液為吉林東北虎藥業(yè)股份有限 公司生產(chǎn),批號030501;OMT（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99%）由中國藥品生物

4、制品檢 定所提供。三苯基氯化四氮唑（triphenyl tetrazolium chloride,TTC） 由上?；瘜W(xué)試劑公司提供。JEM1200EX型透射電子顯微鏡（日本電 子公司）。1.3大鼠局灶性腦缺血模型的制備采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血模型，即應(yīng)用水合氯醛0.3 g/kg腹腔注射麻醉大鼠，分離并 結(jié)扎頸外動脈，從右側(cè)頸總動脈剪口將 3 cm的尼龍線插入，至其進(jìn) 入頸內(nèi)動脈約18 mm處止，固定尼龍線并縫合皮膚。術(shù)后37 C保溫， 待動物蘇醒后通過神經(jīng)學(xué)評分判定模型是否制備成功。1.4神經(jīng)學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)0分：無神經(jīng)功能缺失癥狀；1分：梗死對 側(cè)前爪內(nèi)收、不能伸直；2分：前肢屈曲對側(cè)抵抗推

5、力下降，向?qū)?cè)轉(zhuǎn) 圈;3分：行走時(shí)身體向偏癱側(cè)傾倒；4分：意識障礙，完全不能行走； 評分在2分以上為模型制備成功。1.5腦梗死體積測定 大鼠麻醉后斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和 低位腦干，從額板開始間隔1 mm做冠狀切片，將切片置于1%TTC 溶液中，37 C避光孵育30 min后取出，置于10%中性甲醛中固定， 正常組織染成紅色，梗死區(qū)呈現(xiàn)白色。數(shù)碼相機(jī)攝像，利用LEICAQWIN圖像分析儀測定腦梗死體積，計(jì)算腦梗死體積占全腦體積的百 分比。1.6透射電鏡樣品制備 將大腦組織放入4%戊二醛中進(jìn)行前固 定4 h , PBS沖洗，再用1%鋨酸后固定1.5 h，用蒸餾水沖洗，乙醇、 丙酮梯度系列脫水，

6、環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，電子染色后在 JEM1200EX透射電子顯微鏡下觀察。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用xis表示，通過GraphPad統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn) 行多組間單因素方差分析。2結(jié)果2.1各組大鼠神經(jīng)學(xué)評分比較采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血模型，模型制備后各組大鼠均呈現(xiàn)出不同程度的腦缺血性損傷表 現(xiàn)，說明大鼠局灶性腦缺血模型制備成功。OMT中高劑量組的神經(jīng)學(xué)評分（2.5也.5、2.4如.5）和LLT組（2.5 0.8）明顯低于模型組（3.6 士 0.7)(P0.05)。而OMT低劑量組的神經(jīng)學(xué)評分(3.0 ).9)與模型線無顯 著差異(P0.05)。表明OMT中高劑量能夠緩解動物身體傾斜或一側(cè)肢 體

7、癱瘓的缺血損傷癥狀。2.2腦梗死體積測定 與模型組腦梗死體積(0.54 ).06)%比 較，OMT 70 及 105 mg/kg 組(0.41 ).03)%、(0.26 ).05)% 丨可縮 小腦梗死體積(P0.01) ,OMT 35 mg/kg組腦梗死體積(0.48 0.04)% 與模型組比較無顯著差異。LLT組腦梗死體積(0.35 0.14)%丨與模 型組比較有顯著差異(P0.01)。其中OMT 105 mg/kg組可明顯縮小腦 梗死面積，減輕局灶性腦缺血對腦組織造成的損傷。2.3腦組織超微結(jié)構(gòu)改變假手術(shù)組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)基本正常，神經(jīng) 元細(xì)胞核呈略橢圓形，核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻，胞質(zhì)內(nèi)可見線粒體、

8、粗 面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基體等細(xì)胞器。神經(jīng)氈結(jié)構(gòu)正常。模型組神經(jīng)元呈空 化改變，細(xì)胞核呈不規(guī)則性，核基質(zhì)空化；胞質(zhì)內(nèi)線粒體空化腫脹、嵴斷裂，胞質(zhì)基質(zhì)空化。神經(jīng)氈呈空化改變，軸突內(nèi)神經(jīng)絲斷裂溶解 明顯。LLT組神經(jīng)元核呈橢圓形或略不規(guī)則性，可見核切跡，核內(nèi)染 色質(zhì)分布均勻，胞質(zhì)內(nèi)可見較多線粒體，仍可見少部分呈線粒體空化， 嵴斷裂的改變，還可見到較多的脂褐素顆粒沉積。 局部神經(jīng)氈可見空 化改變。OMT 35 mg/kg組神經(jīng)元核形狀略不規(guī)則，個(gè)別細(xì)胞核核基 質(zhì)輕度空化，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，嵴輕度斷裂，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少，神 經(jīng)氈空化改善不明顯。OMT 70 mg/kg組神經(jīng)元核形狀規(guī)則，僅可見 少數(shù)線粒體呈輕

9、度空化改變，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，排列整齊。神經(jīng)氈輕 度空化改變。OMT 105 mg/kg組神經(jīng)元核呈橢圓形，偶見核切跡， 核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻，偶見線粒體呈空化，嵴斷裂的改變，粗面內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)豐富，排列整齊。神經(jīng)氈輕度空化改變（圖1）。圖1各組大鼠腦組織的超微結(jié)構(gòu)3討論近幾年，隨著OMT在臨床上的廣泛應(yīng)用，其藥理作用及作用機(jī)制 的研究也越來越受關(guān)注，研究表明6，OMT具有抗病毒、強(qiáng)心降 壓、抗心律失常、對心肌缺血和梗死的保護(hù)作用、抗炎、殺菌、抗腫 瘤作用及鎮(zhèn)靜催眠、解熱鎮(zhèn)痛等中樞神經(jīng)的抑制作用，但是關(guān)于OMT 對腦缺血保護(hù)作用的研究卻很少。本實(shí)驗(yàn)采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血模型，用于模擬臨床 上常見

10、的局灶性腦缺血的發(fā)病過程。 結(jié)果顯示，線栓法可以成功制備 大鼠局灶性腦缺血模型。當(dāng)腹腔注射不同劑量的 OMT處理后，發(fā)現(xiàn) OMT 70及105 mg/kg兩個(gè)劑量組能夠明顯緩解動物身體傾斜或一側(cè) 肢體癱瘓的缺血性神經(jīng)損傷癥狀，降低了局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)學(xué)評 分，而且相應(yīng)的大鼠腦組織的梗死體積也明顯縮小，說明OMT對損傷的腦組織具有一定的保護(hù)作用。腦組織超微結(jié)構(gòu)改變顯示，OMT 70 及105 mg/kg兩個(gè)劑量組能夠明顯改善神經(jīng)元的空化現(xiàn)象，尤其對 線粒體結(jié)構(gòu)的保護(hù)，減少了線粒體空化、嵴斷裂的改變。線粒體是細(xì) 胞呼吸作用和能量轉(zhuǎn)換的重要場所， 在缺血缺氧時(shí)，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變 中以線粒體最為敏感8

11、，因此說明OMT對腦組織超微結(jié)構(gòu)的具有 一定的保護(hù)作用。但是關(guān)于其保護(hù)局灶性腦缺血損傷的作用機(jī)制尚有 待于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。【參考文獻(xiàn)】1李燕，何立人.苦參堿類生物堿的心血管系統(tǒng)藥理研究J.中草藥,2000;31 (3) : 227 30.2陳霞，李英驥，葛敬巖，等.氧化苦參堿對正常及烏頭堿誘發(fā)心律失常大鼠動作電位的影響J吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2004;30(5) : 70463劉芬，劉 潔，陳 霞.氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制J.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2005;31(6) : 8835.4黃秀梅，李 波.氧化苦參堿對TNF a、L6和IL8的影響J.中成藥，2003;25(11) :90365邱耕,涂植光，李曉文.苦參堿對內(nèi)毒素致炎大鼠PLA2 活性影響及其抗炎機(jī)制研究J沖