新鄉(xiāng)市眾富生物飼料有限公司受控文件化驗指導(dǎo)書

1、化 驗作業(yè)指導(dǎo)書新鄉(xiāng)市眾富生物飼料有限公司受控文件編制人：李倩審核人：尚同軍批準(zhǔn)人：王善智生效日期：2015年1月1日49粗蛋白測定作業(yè)指導(dǎo)書1. 測定方法凱式定氮法2. 原理凱式法測定試樣中氮的含量，即在催化劑的作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物為硫酸銨，加入強堿進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，計算出粗蛋白含量。3. 試劑(1) 硫酸 化學(xué)純 含量為98%，無氮（2）混合催化劑 0.4g硫酸銅，6g硫酸鉀或硫酸鈉，均為化學(xué)純，磨碎混勻。1:15（3）氫氧化鈉 化學(xué)純 40%水溶液 （m/v）（4）硼酸 化學(xué)純 2%水溶液（m/v）（5）混合

2、指示劑：0.1%甲基紅乙醇溶液，0.5%溴甲酚綠乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期不得超過三個月。（6）鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 基準(zhǔn)無水碳酸鈉法標(biāo)定 0.1mol/l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：8.3ml鹽酸注入1000l蒸餾水中 0.02 mol/l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：1.67 ml鹽酸注入1000l蒸餾水中 0.2n鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：16.8ml鹽酸注入1000l蒸餾水中（7） 蔗糖 分析純（8） 硫酸銨 分析純 干燥4.儀器設(shè)備（1）實驗室用樣品粉碎機或研體（2）分樣篩 孔徑0.45mm（40目）（3）分析天平 感量（4）消煮爐或電爐（5）滴定管 酸式，10，25ml（6）凱式燒瓶 250 ml（7）凱式蒸餾轉(zhuǎn)置

3、 半微量水蒸汽蒸餾式（8）錐形瓶 150 250 ml（9）容量瓶 100 ml（10）消煮管 250 ml（11）定氮儀 以凱式原理制造的各類型半自動，全自動蛋白測定儀。5.試樣的選取和制備 選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過40目篩，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化。6. 操作步驟 （1）試樣消煮稱取試樣0.5000-1.0000g，精確至0.0002，放入消化管中，加入6.4g混合催化劑，再加入12-15 ml濃硫酸，將消化管置于消化爐上消化，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強火力（360度-450度）。然后繼續(xù)加熱至少45min（消化時間視消化率而定，消

4、化過程至少2h）（2） 試樣制備 將試樣消煮液冷卻，冷卻后用約50m水稀釋搖勻 ，做為試樣分解液（3）試樣蒸餾 采用半自動定氮儀時，將帶消化液的管子固定在蒸餾托盤上，以25ml硼酸為吸收液，加入2滴混合指示劑，蒸餾裝置的冷凝管末要浸入裝有吸收液的錐形瓶內(nèi)，然后向消煮管中加入50ml 40%氫氧化鈉進行蒸餾，蒸餾時間以吸收液體積達(dá)到100ml-150 ml時，降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)。（4）半微量蒸餾法 將試樣消煮液冷卻，加入20 ml蒸餾水，裝入100ml容量瓶中，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，作為試樣分解液，將半微量的裝置的冷凝管末端侵入裝有20ml硼酸吸收液和

5、2滴混合指示劑的錐形瓶內(nèi)，蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液10ml注入蒸餾轉(zhuǎn)置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口處加水密封，再加10ml氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，在蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾。（5） 滴定 蒸餾后的吸收液立即用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色極為終點，同時按上述步驟做空白滴定。（6）空白測定 稱取蔗糖0.5g，代替試樣，進行

6、空白測定，消耗0.1mol/l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過0.2ml，消耗0.02mol/l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過0.3ml，7.分析結(jié)果的計算和表述（v2-v1）c*0.0140*6.25粗蛋白=-*100m式中：v2-滴定試樣時所需標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液體積，mlv1-滴定空白所需標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液體積，mlc-鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/lm-試樣質(zhì)量，g0.0140-每毫克當(dāng)量氮的克數(shù)6.25-氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)0.02 mol/l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定方法 稱取0.020.03g（視標(biāo)液的濃度而定）于270-300度灼燒至恒重的基準(zhǔn)無水碳酸鈉，稱準(zhǔn)至0.0001g溶于50 ml蒸餾水中，加混合指示

7、劑3滴，用配置好的鹽酸溶液滴定至溶液由綠色變成暗紅色，煮沸，冷卻后繼續(xù)滴定至在呈暗紅色，反復(fù)幾次，同時作空白實驗，計算公式:mc=- （v1-v0）*0.05299式中;c-鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/lm- 無水碳酸鈉質(zhì)量，gv1-滴定試樣時所需標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液體積，mlv0-滴定空白所需標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液體積，ml注意事項:鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)每月標(biāo)定粗蛋白含量大于30%時，稱取0.50.7g，小于30%時，稱取0.91.1g，保證滴定體積在12-17 ml之間。液體做粗蛋白時，稱量時先固定消化管，稱2.000g左右，加硫酸時需緩慢加入，以防止液體噴出，剛開始消化時保持溫度在120-130度，趕走水分，防止

8、噴射以及對下一步去蒸餾的影響。水分測定作業(yè)指導(dǎo)書1.原理 試樣在1052烘箱內(nèi)，在大氣壓下烘干，直到恒重，遺失的重量為水分。2.儀器設(shè)備 (1) 電子天平 ：0.0001g(2) 電熱恒溫烘箱： 可控溫度為1052(3) 稱樣皿： 玻璃或鋁質(zhì)，直徑40mm以上，高25mm以下 (4) 干燥器：用氯化鈣 （干燥試劑）或變色硅膠做干燥劑3.測定步驟(1)潔凈稱樣皿，在1052烘箱中烘1h取出，在干燥器中冷卻30min，稱準(zhǔn)至0.0002g(2)用稱樣皿稱取兩份平行試樣，每份2g左右（預(yù)混料1-2g），準(zhǔn)確至0.0002g，不蓋稱樣皿蓋，在1052烘箱中烘3h，取出，蓋好稱樣皿蓋，在干燥器中冷卻30

9、min，稱重。 (3)在同樣烘干1h，冷卻，稱重，直至兩次稱重量差小于0.0002g。4. 結(jié)果計算（w1-w2）100水分（%）=- w1-w0 式中：w1-105烘干前試樣及稱樣皿重，g w2-105烘干后試樣及稱樣皿重，gw0-已恒重的稱樣皿重，g5 注意事項 （1）水分放在托盤上烘干，烘干后取出要蓋上蓋子。（2） 放入水分時，應(yīng)使烘箱達(dá)到105時再放入，以保證升溫到105的時間最短，減少影響。（3）稱重時應(yīng)注意按順序保證先取出先稱量，105烘干時間在5min。130烘干時間在1min之內(nèi)。粗灰分測定作業(yè)指導(dǎo)書1. 原理試樣在550灼燒后所得殘渣，用質(zhì)量百分率表示。殘渣中主要是氧化物，鹽

10、類等礦物質(zhì)，也包括混入飼料中有沙石，土等，故稱粗灰分。2儀器與設(shè)備（1） 樣品粉碎機（2） 電子天平：0.0001g（3） 高溫爐：55020（4） 坩堝 ：25ml或50ml（5） 干燥器3.測定步驟（1）坩堝的恒重：將干凈坩堝放入高溫爐，在55020下，灼燒30min，等溫度降至300以下時，取出在空氣中冷卻約1min，放入干燥器冷卻30min后稱其重量。（2）樣品的炭化：在已恒重的坩堝中稱取2.000-5.000g（預(yù)混料稱量0.7g左右）試樣，準(zhǔn)確至0.0002g，在電爐上小心炭化，在碳化過程中，應(yīng)將試樣在較低溫度下（600w）加熱至無煙(0.5h-1h)，才升溫灼燒至樣品無炭顆粒。（

11、3）樣品的灰化：把炭化好的樣品放入高溫爐中，于55020下灼燒4h以上，等溫度降至300以下時，取出在空氣中冷卻約1min，放入干燥器冷卻30min后稱其重量。4.結(jié)果計算 m2-m0粗灰分（%）=- m1-m0式中：m0-為恒重坩堝的質(zhì)量，gm1-為坩堝加試樣的質(zhì)量，gm2-為灰化后坩堝加灰分的質(zhì)量，g所得結(jié)果應(yīng)表示為0.01%5.允許差 應(yīng)同時做至少兩個平行樣，算其平均值為分析結(jié)果。 粗灰分含量在5%以上的允許相對偏差為1%，粗灰分含量在5%以下的允許相對偏差為5%。6. 注意事項要保證先取出的坩堝先稱重； 炭化時最好不要開排風(fēng)扇，以防止炭化過快，試料飛濺； 灼燒殘渣顏色與試樣中各元素含量

12、有關(guān)，含鐵高時為紅棕色，含錳高時為淡藍(lán)色，但有明顯黑色炭粒時，為碳化不完全，應(yīng)延長灼燒時間。水溶性氯化物測定作業(yè)指導(dǎo)書1.測定方法 本方法規(guī)定用硝酸銀直接滴定測定飼料中可溶性氯化物的方法。2.原理 溶液澄清，以10%的鉻酸鉀為指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)硝酸銀溶液滴定，使樣品中的氯化物形成氯化銀沉淀，呈現(xiàn)磚紅色為滴定終點，根據(jù)消耗硝酸銀的用量，計算出氯化物的含量。3.試劑（1）10%鉻酸鉀指示劑：稱量10g鉻酸鉀溶解于100ml水中；（2）硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.02moll：稱取3.4g硝酸銀溶于1000ml水中，存于棕色瓶中。4. 測定步驟 稱取5-10g樣品，準(zhǔn)確至0.0001g，準(zhǔn)確加蒸餾水200ml，

13、攪拌15min，放置15min，準(zhǔn)確移取上清液20ml，加蒸餾水50ml，10%鉻酸鉀指示劑1ml，用硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，呈現(xiàn)磚紅色，且1min不褪色為終點（每換一次硝酸銀溶液測一次空白）。5. 結(jié)果計算 v2*c*200*0.05845*100 nacl(%)=- m *20式中： m-樣品質(zhì)量 g v2-滴定消耗硝酸銀溶液的體積 ml c- 硝酸銀的摩爾濃度，moll 0.05845-與1.00ml硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液c(agno3)=1.000 moll相當(dāng)?shù)囊钥藬?shù)表示的氯化物的質(zhì)量。硝酸銀的標(biāo)定：取基準(zhǔn)試劑氯錄化鈉少許，在105-110烘干2小時，取出冷卻。準(zhǔn)確稱取0.02g，加蒸餾水25m

14、l，加入10%鉻酸鉀0.25ml，用配好的標(biāo)準(zhǔn)硝酸銀溶液滴定，溶液由淺黃色稍稍變?yōu)榧t褐色既為滴定終點，每次至少標(biāo)定3個，使之滴定結(jié)果更加平均，準(zhǔn)確。 nacl重量*1000agno3溶液濃度=- 58.44* agno3（滴定ml數(shù)）6.允許差每個樣品應(yīng)取兩份平行樣進行測定，以算術(shù)平均值分析結(jié)果；氯化鈉含量在3%以下（含3%），允許絕對差0.05，氯化鈉含量在3%之上，允許相對偏差3%。鈣測定作業(yè)指導(dǎo)1.測定方法乙二胺四乙酸二鈉絡(luò)合滴定法2.原理 將試樣中有機物破壞，使鈣溶液解制備成溶液，用三乙醇胺，乙二胺，鹽酸羥胺和淀粉溶液消除干擾離子的影響，在堿性溶液中以鈣黃綠素為指示劑，用edta標(biāo)準(zhǔn)溶

15、液絡(luò)合滴定鈣，可快速測定鈣的含量。3 .儀器設(shè)備（1）電子天平：0.0001g（2）高溫爐：電加熱，可控溫在55020（3）坩堝：瓷質(zhì)（4）容量瓶：100ml（5）滴定管：酸式，25ml（6）玻璃漏斗（7）定量濾紙：中速，7-9cm（8） 移液管：10ml（9） 燒杯：200ml4 .試劑（1） 鹽酸水溶液： 1+3 （v1+v2）（2） 氫氧化鉀：200g/l（3） 三乙醇胺水溶液：1+1（v1+v2）（4） 乙二胺水溶液：1+1（v1+v2）（5） 淀粉溶液：10g/l，稱取1g可溶性淀粉入200ml燒瓶中，加5ml水潤濕，再加入95ml沸水?dāng)嚢杈鶆?，煮沸，冷卻備用（現(xiàn)配現(xiàn)用）（6）孔雀石

16、綠水溶液：1g/l（7）鈣黃綠素甲基百里香酚藍(lán)指示劑：0.1g鈣黃綠素與0.13甲基百里香酚藍(lán)，5g錄化鉀研細(xì)混勻，儲存于磨口瓶中備用。（8）鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.0010g/ml 稱取2.497g與105110干燥3h至恒重的基準(zhǔn)碳酸鈣，溶于40ml（1：3）鹽酸中，加熱趕除二氧化碳冷卻，用水轉(zhuǎn)移至1000ml容量瓶中，用水稀釋到刻度。（ca離子的含量=g/ml）（9）edta標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制稱取3.8gedta入200ml燒瓶中，加200ml水，加熱溶解冷卻后轉(zhuǎn)至1000ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋到刻度。（即為0.004g/ml=1mol/l）（10）edta的標(biāo)定準(zhǔn)確吸取鈣標(biāo)液10ml，按試樣測

17、定進行滴定。 滴定度的計算： *vt=- v0式中： t -edta標(biāo)準(zhǔn)溶液對鈣的滴定度，g/ml-鈣標(biāo)液的濃度，g/mlv-所取鈣標(biāo)液的體積 ，mlv0-edta標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量，ml5. 測定步驟 試樣的分解 取測定粗灰分后盛灰坩堝，加入 鹽酸10ml和濃硝酸數(shù)滴（或1ml），小心煮沸，保持微沸約1min，冷卻，轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，為試樣分解液。試樣的測定 準(zhǔn)確移取試樣分解液10ml于錐形瓶中，加水50m，加淀粉溶液10ml，三乙醇胺2ml，乙二胺1ml，1滴孔雀石綠，再加氫氧化鉀10ml(氫氧化鉀過量)，每加一種試劑都須搖勻，加鈣黃綠素少許，在黑色背景下立即用edt

18、a標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至綠色熒光消失呈現(xiàn)紫紅色為滴定終點，同時做空白。6. 結(jié)果計算 t*（v2-v3）*v0*100ca=- m*v1式中： t-edta標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定對鈣的滴定數(shù)，g/ml v0-試樣分解液的總體積，mlv1-移取試樣分解液的體積，mlv2-實際消耗edta標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mlv3-空白消耗edta標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mlm -試樣的質(zhì)量，g總磷量測定作業(yè)指導(dǎo)書1.測定方法釩鉬黃顯色光度法2.適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料，濃縮飼料，預(yù)混合飼料和單一飼料，測定飼料范圍磷含量0-20ug/ml。3.方法原理 將試樣中的有機物破壞，使磷游離出來，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的（nh

19、4）3po4nh4vo3.16moo3,在波長400mm下進行比色測定。4.試劑（1）鹽酸 ：（1+3水溶液）（2）硝酸：濃硝酸（3）釩鉬酸銨顯色劑：稱取偏釩酸胺1.25g，加水200ml加熱溶解，冷卻后再加入250ml硝酸，另稱取鉬酸胺25g，加水400ml加熱溶解，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容1000ml，避光保存，若生成沉淀，則不能繼續(xù)使用。（4）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：將磷酸二氫鉀在105干燥1h，在干燥器中冷卻后稱取0.2195g溶解于水，定量轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用水稀釋到刻度，搖勻，既為50ug/ml的磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（此溶液不能超過一個月）。5. 儀器與設(shè)備（1）樣

20、品粉碎機（2）分析天平：0.0001g（3）高溫爐：電加熱，可控溫在55020（4）坩堝：瓷質(zhì)（5）分光光度計：可在420mm波長下測定吸光度（6）比色皿：10mm（7）容量瓶：50, 00, 1000ml（8）移液管： 0.5 1.0 2.0 3.0 5.0 10.0ml（9）凱氏燒餅：125 250ml（10 可調(diào)溫電爐：1000w6.測定步驟（1）試樣的分解 干法：(適用于配合，濃縮，單一飼料) 稱取試樣2-5g(精確至0.0002g)于坩堝中，在電爐上小心碳化，在移入高溫爐，在550灼燒3h，（或粗灰分后繼續(xù)進行），取出冷卻，加入10ml鹽酸溶液和硝酸數(shù)滴，小心煮沸10min，轉(zhuǎn)入10

21、0ml容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，為試樣分解液。 鹽酸溶解法：(適用于微量元素預(yù)混料) 稱取試樣0.21g(一般稱量0.7g左右）精確至0.0002g于100ml燒杯中，緩緩加入鹽酸10ml，使其全部溶解，冷卻后轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，并稀釋到刻度，搖勻，為試樣分解液。（2）工作曲線的繪制 準(zhǔn)確移取磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，0.0 1.0 2.0 4.0 8.0 16.0ml于50ml容量瓶中，各加釩鉬酸銨顯色劑10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，常溫下放置10min以上，以0.0ml溶液為參比，在400ml波長下，用分光光度計測定各溶液的吸光度。以磷含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（3）試樣的測定

22、準(zhǔn)確移取試樣分解液1.010.0ml（含磷量50-750ug）于50ml容量瓶中，加入釩鉬酸銨顯色劑10ml，用水稀釋到刻度，搖勻，常溫下放置10min以上，用10mm比色皿在400mm波長下測定試樣分解液的吸光度，在工作曲線上查的試樣的磷含量。7. 測定結(jié)果的計算及表述 m1*v x=- m *v1*104式中： x-以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示的磷含量，% m-試樣的質(zhì)量，g m1-由標(biāo)準(zhǔn)曲線查的試樣分解液磷含量，ug v-試樣分解液的總體積，mlv1-試樣測定時移取分解液的體積。ml 所得到的結(jié)果應(yīng)表示至小數(shù)點后兩位。 8. 允許差：含磷量0.5%以下，允許相對差10%，含磷量0.5%以上，允許相對差

23、3%9.注意事項： 比色皿應(yīng)用軟紙或用擦鏡紙擦拭，以免劃傷比色皿。稱重要適量，始終要控制磷的含量在26ppm之間。酸價檢測作業(yè)指導(dǎo)書1. 原理 酸價（酸值）是指中和1g油脂所含游離脂肪酸所需氫氧化鉀的毫克數(shù)。酸價高，說明油脂因水解而產(chǎn)生的游離脂肪酸多。酸價可直接說明油脂的新鮮程度和質(zhì)量的優(yōu)劣。2. 試劑（1）酚酞乙醇指示劑：1%（2）乙醇-乙醚混合液： 取化學(xué)純95%乙醇和無水乙醚按2:1體積混合，然后加入酚酞乙醇指示劑3滴，用0.1mol/lkoh溶液中和至微紅色。（3）0.1mol/lkoh標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取5.8gkoh溶于1000ml水中。3. 測定步驟 準(zhǔn)確稱取5g待檢油脂置于錐形瓶中，

24、加入乙醇-乙醚混合液50ml，振搖均勻后加入1%酚酞乙醇指示劑3滴，用0.1mol/lkoh標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡紅色且在1min內(nèi)不褪色為終點。4. 結(jié)果計算 c*v*56.11 酸價=- m式中：c-koh標(biāo)準(zhǔn)溶液之物質(zhì)的量濃度。mol/lv-消耗koh標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mlm-試樣的質(zhì)量，g 56.11-與1ml，1mol/lkoh標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)?shù)膋oh的質(zhì)量。mg 0.1mol/lkoh標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定： 稱取笨二鉀酸氫鉀0.2g左右，放入錐形瓶中，加50ml蒸餾水，加1%酚酞乙醇指示劑2-3滴，用用0.1mol/lkoh標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡紅色，在半分鐘內(nèi)不褪色為終點。 w笨二鉀酸氫鉀n氫氧化鉀=-

25、*1000 204.23* v氫氧化鉀6. 注意事項 若koh溶液由沉淀時，不能繼續(xù)使用國家標(biāo)準(zhǔn)混合油酸價不超過4%，豆油酸價不超過2%。5g試樣加醇謎混合液50ml，10g試樣加醇謎混合液100ml。粗脂肪測定作業(yè)指導(dǎo)書1. 原理 索氏脂肪提取器中用石油謎提取試樣，稱提取物的重量，除脂肪外還有有機酸，磷脂，脂溶性維生素，葉綠素等，因而測定結(jié)果稱為粗脂肪。2.儀器設(shè)備： （1）電熱恒溫水浴鍋（2）恒溫烘箱（3）脂肪提取器（4）中速脫脂慮紙（5）干燥器3. 試劑（1） 石油醚：分析純（石油醚沸程3060）4. 測定步驟 準(zhǔn)確稱取樣品約2g（脂肪含量小于5%時，稱2g。脂肪含量大于5%時，稱1.5

26、g）,用濾紙包好，置于105-110的烘箱中烘干2h，置干燥器中冷卻后稱重，然后放入提取器中。用石油醚提取57個小時，從冷凝管中的下流速度為56滴/秒，抽提器內(nèi)的溫度不超過70，抽提后，取出濾紙包，將其在105的烘箱中烘干2h，取出于干燥器中冷卻至室溫，稱重，同時將瓶中的石油醚回收再提取管中，在回收于石油醚瓶中。5.結(jié)果的計算 w1-w2粗脂肪=-*100% w式中： w-樣品重量，g w1-烘干后的濾紙包重量，g w2-提取物提取后濾紙包的重量，g6. 注意事項 每次稱脂肪包時要保持雙手的潔凈； 脂肪包從提取器取出后，要先放通風(fēng)櫥內(nèi)，待石油醚揮發(fā)后在放入烘箱中。揮發(fā)性鹽基氮測定作業(yè)指導(dǎo)書1.

27、 范圍 適用于魚粉及魚罐頭副產(chǎn)品（魚頭粉）2. 原理 根據(jù)蛋白質(zhì)在腐敗過程中，分解產(chǎn)生的氨和胺類物質(zhì)具有揮發(fā)性，可在弱堿劑氧化鎂的作用下，游離出并蒸餾出來，被硼酸溶液吸收，用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定，計算出含量。3. 試劑（同粗蛋白） 0.1mol/l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：移取8.3ml鹽酸溶于1000ml蒸餾水中。4. 測定步驟 稱取魚粉或魚頭粉（樣品不粉碎）于消化管中，加氧化鎂0.5g，加熱水70ml，將此消化管蒸餾（不加氫氧化鈉），蒸餾的溶液用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至紫紅色為終點。5. 結(jié)果計算 （v-v0）*n*14.008 mg/100gtvbn=-*100 w式中： v-測定樣液消耗鹽酸溶液的體積，ml v

28、0-空白消耗鹽酸溶液的體積，ml n-鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度，mol/l w-樣品重量，g 14.008-1n鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml相當(dāng)于氮的毫克數(shù)。6.結(jié)果判定： 此法正確度80% mg/100g小于90%新鮮 90-120%中等新鮮120-150%不新鮮（臭味）大于150%腐臭味水洗蛋白測定作業(yè)指導(dǎo)書1. 測定步驟（1）準(zhǔn)確稱取0.5-1.0g(視樣品含蛋白量而定)于50ml燒瓶中，加入50ml 蒸餾水，在磁力攪拌器上攪拌20min；（2） 中速定量濾紙過濾攪拌液，將轉(zhuǎn)移用的玻璃棒及燒餅用蒸餾水沖洗干凈，并反復(fù)沖洗濾渣，直到水溶性含氮物質(zhì)沖洗干凈為止。（3）將濾紙連同濾渣全部轉(zhuǎn)至消化管中，消化

29、，蒸餾步驟同粗蛋白測定方法一樣，同時做空白。（4）水洗蛋白結(jié)果計算：同粗蛋白的計算一樣。（5）水洗蛋白與粗蛋白含量之差若小于3%時，視為正常。反之則視為不正常。備注： 芝麻粕的水洗蛋白與粗蛋白含量相差為67%。真蛋白測定作業(yè)指導(dǎo)書本方法適用于飼料級魚粉中真蛋白質(zhì)與粗蛋白質(zhì)的檢測。1.原理 蛋白質(zhì)在一定堿性條件下，能與重金屬鹽類發(fā)生鹽析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于熱水，而非蛋白氮則易溶于水。用熱水洗沉淀，將水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用凱氏定氮法測定，得出真蛋白的含量，再用真蛋白質(zhì)與粗蛋白質(zhì)含量之比，可判斷魚粉是否摻入水溶性非蛋白含氮物質(zhì)。魚粉真蛋白質(zhì)比率與指標(biāo)，魚粉蛋白質(zhì)的比率以測得真蛋

30、白質(zhì)含量與粗蛋白質(zhì)含量之比來表示，粗蛋白質(zhì)含量應(yīng)符合產(chǎn)品規(guī)定，真蛋白質(zhì)比率應(yīng)符合于：進口魚粉中真蛋白質(zhì)比率不得小于80%，國產(chǎn)魚粉中真蛋白質(zhì)比率不得小于75%。魚粉中真蛋白質(zhì)比率小于上述值時，則判定為該魚粉中摻有水溶性非蛋白含氮物質(zhì)。2試劑10%硫酸銅溶液：稱取10g硫酸銅溶于100ml容量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻，備用。2.5%氫氧化鈉溶液：稱取2.5g氫氧化鈉溶于100ml容量瓶中，用水稀釋到刻度，備用。3. 真蛋白的測試步驟（1）試樣的處理： 準(zhǔn)確稱取試樣12g于200ml燒瓶中，加蒸餾水50ml煮沸，加入10%的硫酸銅溶液20ml和2.5%的氫氧化鈉溶液20ml，邊加邊攪拌，加完后繼

31、續(xù)攪拌1min，放置1h以上或靜置過夜，沉淀物以中速定性濾紙過濾，用70以上熱水反復(fù)沖洗殘渣，直至濾液無硫酸根離子為止（取5%氯化鋇試液5滴于表面皿中，加2mol/l鹽酸一滴，在黑色背景處觀察應(yīng)無白色沉淀），將濾紙于殘渣包好，放入烘箱，在 65-75干燥2h。（2）試樣的消化 將烘干的試樣連同濾紙一起放入消化管中，其他操作步驟同粗蛋白一樣。（3） 空白測定 除不加試樣外，其余操作步驟同真蛋白的測定。4. 計算公式 真蛋白質(zhì)含量 真蛋白質(zhì)比率=-*100 粗蛋白質(zhì)含量 5.允許差 蛋白質(zhì)含量在40%以上時允許偏差2%； 蛋白質(zhì)含量在40%以下時允許偏差2.5%；消化爐回收率測定作業(yè)指導(dǎo)書 1.

32、方法步驟（1）分別準(zhǔn)確稱取色氨酸0.18g，蔗糖0.67g放入同一個消化管中。（2）消化，蒸餾滴定步驟同粗蛋白。（3）同時做空白。2.結(jié)果計算：色氨酸中氮的實際含量(v1v0) *m n1=-*1.4007*100 m其中：v1-滴定消化蒸餾后色氨酸所消耗鹽酸的體積ml v0-滴定空白所耗鹽酸的體積 mlm-鹽酸的摩爾濃度mol/lm-色氨酸的質(zhì)量g n12.2色氨酸中氮的回收率=-*100n2n2=色氨酸中氮的理論含量（13，72）備注：色氨酸回收率應(yīng)在97.5%以上，如達(dá)不到，可采用升高消化爐溫度和增加消化時間兩種方法。大豆制品中尿素酶活性測定方法1 適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于由大豆制得的產(chǎn)品和

33、副產(chǎn)品中尿素酶活性的測定。本法可確認(rèn)大豆制品的濕熱處理程度。 2 定義本標(biāo)準(zhǔn)所指尿素酶活性定義如下:在300.5和ph7的條件下,每分鐘每克大豆制品分解尿素所釋放的氨態(tài)氮的毫克數(shù)。3 原理將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合,在30保持30min,尿素酶催化尿素水解產(chǎn)生氨的反應(yīng)。用過量鹽酸中和所產(chǎn)生的氨,再用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液回滴。4 儀器設(shè)備（1）樣品篩:孔徑200m;（2）酸度計:精度0.02ph,附有磁力攪拌器和滴定裝置; (3)恒溫水浴:可控溫300.5; (4)試管:直徑18mm,長150mm,有磨口塞子; (5)精密計時器; (6)粉碎機:粉碎時應(yīng)不生強熱(例如球磨機);（7）分析

34、天平:感量0.1mg;（8）移液管:10ml。5試劑和溶液（1）尿素:分析純;（2）磷酸氫二鈉:分析純;(3) 磷酸二氫鉀:分析純;(4)尿素緩沖溶液(ph6.9至7.0): 4.45g磷酸氫二鈉和3.40g磷酸二氫鉀溶于水并稀釋至1000ml,再將30g尿素溶在此緩沖溶液中,可保存1個月。(5)鹽酸 :分析純,0.1mol/l溶液;移取8.3ml鹽酸，用水稀釋至1000ml；(6) 氫氧化鈉（分析純）0.1mol/l標(biāo)準(zhǔn)溶液 :稱取4g氫氧化鈉溶于水并稀釋至1000ml。6 試樣的制備用粉碎機將10g試樣粉碎,使之全部通過樣品篩。對特殊試樣(水分或揮發(fā)物含量較高而無法粉碎的產(chǎn)品)應(yīng)先在實驗室

35、溫度下進行預(yù)干燥,再進行粉碎,當(dāng)計算結(jié)果時應(yīng)將干燥失重計算在內(nèi)。7測定步驟稱取約0.2g已粉碎的試樣,稱準(zhǔn)至0.1mg,轉(zhuǎn)入試管中(如活性很高只稱0.05g試樣),移入10ml尿素緩沖溶液,立即蓋好試管并劇烈搖動,馬上置于300.5恒溫水浴中,準(zhǔn)確計時保持30min。即刻移入10ml鹽酸溶液,迅速冷卻到20。將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入燒杯,用5ml水沖洗試管兩次,立即用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至ph4.70。另取試管作空白試驗，移入10ml尿素緩沖液， 10ml鹽酸溶液。稱取與上述試樣量相當(dāng)?shù)脑嚇?，也稱準(zhǔn)至0.1mg，迅速加入此試管中。立即蓋好試管并劇烈搖動。將試管置于300.5恒溫水浴,同樣準(zhǔn)確保持3

36、0min，冷卻至20，將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入燒杯，用5ml水沖洗試管兩次，并用氫氧化鈉標(biāo) 準(zhǔn)溶液滴定至ph4.70。 8測定結(jié)果的計算(1)計算方法：以每分鐘每克大豆制品釋放氮的毫克量表示的尿素酶活性u,按下式： 14c（v0v） u- 30m 式中:c-氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液摩爾濃度,mol/l;v0-空白試驗消耗氫氧化鈉溶液體積,ml;v-測定試樣消耗氫氧化鈉溶液的體積,ml;m-試樣質(zhì)量,g。注:若試樣經(jīng)粉碎前的預(yù)干燥處理時,則 14c（v0v）u-（1s） 30m式中:s-預(yù)干燥時試樣失重的百分率。重復(fù)性:同一分析人員用相同方法,同時或連續(xù)兩次測定結(jié)果之差不超過平均值的10，以其算術(shù)平均值報告

37、結(jié)果。油脂過氧化值檢測方法1.原理 油脂氧化過程中產(chǎn)生過氧化物，與碘化鉀作用，生成游離碘，以硫代硫酸鈉溶液滴定，計算過氧化值。 2.試劑和溶液（1）飽和碘化鉀溶液：稱取14g碘化鉀，加10ml水溶解，必要時微熱使其溶解， 冷卻后貯于棕色瓶中；(2)、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混勻； (3)、0.01mol/l硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液； (4)、1%淀粉試劑：將淀粉0.5g用少許冷水調(diào)成糊狀，倒入50ml沸水中調(diào)勻，煮沸， 臨時用現(xiàn)配；3.測定方法 稱取23g油樣（稱準(zhǔn)至0.0002g）于碘量瓶中（對于固態(tài)樣品應(yīng)先用索氏提取器將樣品中油脂提取出來），加30ml三氯甲

38、烷冰乙酸混合液，使樣品完全溶解。加入1ml飽和碘化鉀溶液，緊密塞好瓶蓋，并輕輕振搖0.5min，然后在暗處放置3min，取出加100ml水，搖勻，立即以淀粉試液為指示劑，用0.01mol/l硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至藍(lán)色消失為終點。同時做空白試驗。4.結(jié)果計算 過氧化值（%）=0.1269*c*(v-v0)*100/m式中： 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/l； 試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之體積，ml； 0空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之體積，ml； m 樣品質(zhì)量，g； 0.1269換算系數(shù)；硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和標(biāo)定： c（na2s2o3）=0.01 mol/l1.配制：稱取2.6g 硫代硫

39、酸鈉（na2s2o35h2o）或16 g無水硫代硫酸鈉，及0.2 g無水碳酸鈉，加入適量新煮沸過的冷水使之溶解，并稀釋至1000ml，混勻，放置一個月后過濾備用。 2.標(biāo)定：準(zhǔn)確稱取0.015g在120。c干燥至恒量的基準(zhǔn)重鉻酸鉀，置于碘量瓶中，加入50）ml水使之溶解。加入2g碘化鉀及20ml硫酸溶液（1+8），密塞，搖勻，放置暗處10 min后用250ml水稀釋。用硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液呈淺黃綠色，再加3ml淀粉指示劑（稱取0.5g可溶性淀粉，加入約5ml水，攪勻后緩緩傾入100ml沸水中，隨加隨攪拌，煮沸2min，放冷，備用。此指示液應(yīng)臨用時配制。），繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色消失而顯亮綠色

40、。反應(yīng)液及稀釋用水的溫度不應(yīng)超過20。同時做空白試驗。3.計算：硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度按下式計算： m c（na2s2o3）= - （v1- v0）0.04903式中： c（na2s2o3）硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)的濃度，mol/l； m重鉻酸鉀的質(zhì)量，g； v1硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之用量，ml；v 0空白試驗用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之用量，ml；0.04903重鉻酸鉀的摩爾質(zhì)量，kg/mol。1/6粗纖維測定方法1.原理 用濃度準(zhǔn)確的酸和堿，在特定條件下消煮樣品，再用乙醇除去可溶物，經(jīng)高溫灼燒扣除礦物質(zhì)的量，所余量為粗纖維。2試劑本方法試劑使用分析純，水為蒸餾水。(1)1.25%硫酸溶液，取濃硫

41、酸7.05ml溶于1000ml蒸餾水中，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定。(2)1.25%氫氧化鈉溶液：取12.5g氫氧化鈉溶于1000ml蒸餾水中，用鄰苯二甲酸氫鉀法標(biāo)定。(3)酸洗石棉：分析純 (4)95%乙醇：分析純 (5)乙醚：分析純 （6）正辛醇（防泡劑）。3.儀器設(shè)備(1)實驗室用樣品粉碎機。(2)分樣篩：孔徑1mm，（18目）。(3)分析天平：感量0.0001g。(4)電加熱器（電爐），可調(diào)節(jié)溫度。(5)電熱恒溫箱（烘箱）：可控制溫度在130。(6)高溫爐：有高溫計可控制溫度在500600。(7)消煮器：有冷凝球的600ml高型燒杯或有冷凝管的錐形瓶。(8)抽濾裝置：抽真空裝置，吸濾瓶和漏

42、斗。（濾器使用200目不銹鋼網(wǎng)或尼龍濾布）。(9)古氏坩堝：30ml，預(yù)先加入酸洗石棉懸浮液30ml（內(nèi)含酸洗石棉0.2g0.3g） 再抽干，以石棉厚度均勻，不透光為宜。上下鋪兩層玻璃纖維有助于過濾。干燥器：(10以氯化鈣或變色硅膠為干燥劑。(11)粗纖維測定儀器4試樣制備將樣品用四分法縮減至200g，粉碎，全部通過1mm篩，放入密封容器。5 分析步驟仲裁法稱取1g2g試樣（準(zhǔn)確至0.0002g），用乙醚脫脂，（含脂肪大于10%必須脫脂，含脂肪不大于10%，可不脫脂），放入消煮器，加濃度準(zhǔn)確且已沸騰的硫酸溶液200ml和1滴正辛醇，立即加熱，應(yīng)使其在2min內(nèi)沸騰，調(diào)整加熱器，使溶液保持微沸，

43、且連續(xù)微沸30min，注意保持硫酸濃度不變。試樣不應(yīng)離開溶液沾到瓶壁上。隨后抽濾，殘渣用沸蒸餾水洗至中性后抽干。用濃度準(zhǔn)確且已沸騰的氫氧化鈉溶液將殘渣轉(zhuǎn)移至原容器中并加至200ml，同樣準(zhǔn)確微沸30min，立即在鋪有石棉的古氏坩堝上過濾，先用25ml硫酸溶液洗滌，殘渣無損失地轉(zhuǎn)移至坩堝中，用沸蒸餾水洗至中性，再用15ml乙醇洗滌，抽干。將坩堝放入烘箱，于（1302）下烘干2h，取出后在干燥器中冷卻至室溫，稱重，再于（55025）高溫爐中灼燒30min，取出后于干燥器中冷卻至室溫后稱重。推薦法稱取1g2g試樣（脫脂步驟同手工方法）于g2玻璃沙漏斗中，用坩堝夾將漏斗插入熱萃取器，從頂部加入預(yù)先煮沸

44、的硫酸溶液200ml和2滴正辛醇，將加熱旋鈕開到最大位置，待溶液沸騰后將旋鈕調(diào)到合適位置，使溶液保持微沸30min，抽濾，用沸蒸餾水洗至中性，加入預(yù)先煮沸的氫氧化鈉溶液200ml,同樣準(zhǔn)確微沸30min，抽濾，用沸蒸餾水洗至中性，將坩堝轉(zhuǎn)移至冷萃取器，加入25ml95%乙醇，抽干，將漏斗轉(zhuǎn)移到烘箱，于1302度下烘干2h,取出后在干燥器中冷卻至室溫，稱重。再放入50025度高溫爐中灼燒1小時，干燥器中冷卻至室溫后稱重。6測定結(jié)果的計算 粗纖維（%）=（m1-m2)m100% m1130烘干后坩堝及試樣殘渣重，g； m2550（或500）灼燒后坩堝及試樣殘渣重，g； m試樣（未脫脂）質(zhì)量，g。重

45、復(fù)性每個試樣取兩平行樣進行測定，以算術(shù)平均值為結(jié)果。粗纖維含量在10%以下，絕對值相差0.4.粗纖維含量在10%以上，相對偏差為4%。飼料中鐵、銅、錳、鋅、鎂的測定方法原子吸收光譜法gb/t 138851992本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了火焰原子吸收光譜法測定鐵、銅、錳、鋅、鎂的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料原料、配合飼料、濃縮飼料、預(yù)混合飼料中的鐵、銅、錳、鋅、鎂的測定。試樣測定液的濃度范圍鐵為1g/ml16g/ml，銅、錳為0.5g/ml5g/ml，鋅、鎂為0.1g/ml2g/ml。引用標(biāo)準(zhǔn)gb1.4標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則化學(xué)分析方法標(biāo)準(zhǔn)gb4470火焰發(fā)射、原子和原子熒光光譜分析法術(shù)語gb6819溶解乙炔gb6682實

46、驗室用水規(guī)格方法原理用干法灰化飼料原料、配合飼料、濃縮飼料樣品，在酸性條件下溶解殘渣，定容制成試樣溶液；用酸浸提法處理預(yù)混合飼料樣品，定容制成試樣溶液；將試樣溶液導(dǎo)入原子吸收分光光度計中，分別測定各元素的吸光度。試劑和溶液實驗用水應(yīng)符合gb 6682中二級用水的規(guī)格（高純水或哇哈哈純凈水）；使用試劑除特殊規(guī)定處均為分析純。鹽酸（1+3）：吸取1體積的優(yōu)級純（1.18g/ml）鹽酸溶解于3體積的高純水中。鹽酸10%：吸取1體積的優(yōu)級純鹽酸溶解于9體積的高純水中。鹽酸1.5%：吸取1.5ml的優(yōu)級純鹽酸溶解于50ml高純水中，轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中用高純水定容至100ml。硝酸1mol/l：吸取

47、66.67ml優(yōu)級純（1.42g/ml）硝酸溶解于200ml高純水中，轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中用高純水定容。硫酸：優(yōu)級純（1.84g/ml）。乙酸：優(yōu)級純（1.049g/ml）。乙醇：優(yōu)級純（0.798g/ml）。丙酮：優(yōu)級純（0.788g/ml）。乙炔：符合gb6819規(guī)定。干擾抑制劑溶液：稱取氯化鍶152.1g，溶于420ml鹽酸，加水至1000ml搖勻，備用。鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：準(zhǔn)確稱取1.0000g0.0001g鐵（光譜純）于高型燒杯中，加20ml鹽酸（4.1）及50ml水，加熱煮沸，放冷后移入1000ml容量瓶中，用水定容，搖勻，此液1ml含1.00mg的鐵。鐵標(biāo)準(zhǔn)中間工作溶

48、液：取鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液2.00ml于100ml容量瓶中，用鹽酸（1100）稀釋定容，搖勻，此液1ml含20. 0g的鐵。鐵標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：稱取鐵標(biāo)準(zhǔn)中間工作溶液0.00、4.00、6.00、8.00、10.0、15.0ml分別置于100ml容量瓶中，用鹽酸（1100）稀釋定容，配制成0.00、4.00、6.00、8.00、10.0、15.0g/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列。銅標(biāo)準(zhǔn)溶液銅標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：準(zhǔn)確稱取按順序用乙酸（149）、水、乙醇洗凈的銅（光譜純）1.0000g0.0001g于高型燒杯中，加硝酸5ml，并于水浴上加熱，蒸干后加鹽酸（11）溶解，移入1000ml容量瓶中，用水定容，搖勻，此液1ml含1.00mg的銅。銅標(biāo)準(zhǔn)中間工作溶液：取銅標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液