基因工程名詞解釋

1、基因工程名詞解釋1、基因工程：對不同的遺傳物質(zhì)在體外進(jìn)行剪切、組合和拼接，使遺傳物質(zhì)重新組合， 然后通過載體轉(zhuǎn)入微生物、植物和動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)行無性繁殖，并使所需的基 因在細(xì)胞中表達(dá)，產(chǎn)生人類所需的產(chǎn)物或新生物類型。2、重組 DNA 技術(shù)： 是指將一種生物體（供體）的基因與載體在體外進(jìn)行拼接重組，然后再轉(zhuǎn) 入另一個(gè)生物體（受體）內(nèi)，按照人們的意愿穩(wěn)定遺傳并表達(dá)新產(chǎn)物或新性狀 的 DNA 體外操作程序，也稱為分子克隆技術(shù)。3、基因 xx： 經(jīng)無性繁殖獲得基因許多相同拷貝的過程。通常是將單個(gè)基因?qū)胨拗骷?xì) 胞中復(fù)制而成。（包括把來自不同生物的基因同有自主復(fù)制能力的載體DNA 在體外人工連接，構(gòu)建成新

2、的重組的 DNA，然后送入受體生物中去表達(dá)。從而產(chǎn) 生遺傳物質(zhì)和狀態(tài)的轉(zhuǎn)移和重新組合。）4、限制性內(nèi)切核酸酶：一類能夠識別雙鏈 DNA 分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割 DNA 雙 鏈結(jié)構(gòu)的核酸水解酶。5、修飾酶： 體內(nèi)有些酶可在其他酶的作用下，將酶的結(jié)構(gòu)進(jìn)行共價(jià)修飾，使該酶活性 發(fā)生改變，這種調(diào)節(jié)稱為共價(jià)修飾調(diào)節(jié) （covalentmodificationregulation） ，這類酶 稱為修飾酶 （prosessing enzyme。）6、同裂酶： 識別相同序列的限制酶稱同裂酶，但它們的切割位點(diǎn)可能不同。（同序同 切酶、同序異切酶、 “同功多位 ”等）1/ 97、同尾酶：切割不同的

3、 DNA 片段但產(chǎn)生相同的粘性末端的一類限制性內(nèi)切酶。8、位點(diǎn)偏愛：某些限制酶對同一底物中的有些位點(diǎn)表現(xiàn)出偏愛性切割，即對不同位置的 同一個(gè)識別序列表現(xiàn)出不同切割效率。9、星星活性：極端非標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下，限制酶能夠切割與識別序列相似的序列，這個(gè)改 變的特殊性稱星星活性。10、甲基化酶： 原核生物甲基化酶是作為限制與修飾系統(tǒng)中的一員，用于保護(hù)宿主DNA 不被相應(yīng)的限制酶所切割。11、DNA聚合酶：以 DNA為復(fù)制模板，從將 DNA由 5端點(diǎn)開始復(fù)制到 3端的酶。DNA 聚合酶的主要活性是催化 DNA的合成（在具備模板、引物、 dNTP等 的情況下）及其相輔的活性。12、反轉(zhuǎn)錄酶：是以 RNA為模

4、板指導(dǎo)三磷酸脫氧核苷酸合成互補(bǔ) DNA（ cDNA）的酶。13、末端轉(zhuǎn)移酶：是一種無需模板的 DNA 聚合酶，催化脫氧核苷酸結(jié)合到 DNA 分子的 3羥基 端。14、連接酶：催化雙鏈 DNA 切口處的 5磷酸根或 3羥基生成磷酸二酯鍵。2/ 915、T4多核苷酸激酶：是一種磷酸化酶，可將 ATP的 磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移至 DNA或 RNA的 5端。16、堿性磷酸酶 （Alkaline phosphatase）：能去除 DNA/RNA 5端的磷酸根的一種酶。制備載體時(shí)，用堿性磷酸酶處理 后，可防止載體自身連接，提高重組效率。17、溶菌酶：一類水解細(xì)菌細(xì)胞壁中肽聚糖的酶。18、載體：將外源 DNA 或基因

5、攜帶進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增或表達(dá)的工具。19、質(zhì)粒：是細(xì)胞染色體外能夠自主復(fù)制的很小的環(huán)狀 DNA 分子。20、質(zhì)粒的不相容性：兩種質(zhì)粒在同一宿主細(xì)胞中不能共存的現(xiàn)象。21、琥珀突變： 在基因編碼區(qū)中，若某個(gè)密碼子發(fā)生突變后變成終止密碼子，也稱這樣的 突變?yōu)轸魇蛔儯?UAA），或琥珀突變（ UAG），或乳白突變（ UGA）。22、互補(bǔ)：是指 lacZ 基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū) 段的 -半乳糖苷酶（ -galactosidase，由 1024 個(gè)氨基酸組成）陰性的突變體之 間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)。 -互補(bǔ)是基于在兩個(gè)不同的缺陷 -半乳糖苷酶之間可實(shí)現(xiàn)功能互 補(bǔ)而建立的。23、

6、藍(lán)白斑篩選（ Blue/White Cloning）：3/ 9當(dāng)宿主菌受到噬菌體的感染后，兩者通過 -互補(bǔ)作用，可以產(chǎn)生有活性的 -半乳糖苷酶，在誘導(dǎo)劑 IPTG和人工底物 X-gal存在時(shí)，產(chǎn)生藍(lán)色噬菌斑。如果 噬菌體載體上插入了外源 DNA片段，破壞了 lac 基因的結(jié)構(gòu)，不能與宿主菌中 的 -半乳糖苷酶互補(bǔ)，在 IPTG和 X-gal 存在時(shí)，則產(chǎn)生白色菌落。由于這種顏 色標(biāo)志，重組克隆和非重組克隆的區(qū)分一目了然，這種篩選方法稱為藍(lán)白斑篩 選。24、Spi篩選：野生型 噬菌體在帶有 P2 原噬菌體的溶原性E.coli 中的生長會(huì)受到限制的表型，稱作 Spi+，即對 P2噬菌體的干擾敏感

7、(sensitive to P2interference)。如果 A噬菌體缺少兩個(gè)參與重組的基因 red 和 gam，同時(shí)帶有 chi 位點(diǎn)，并且宿主菌為 rec+，則可以在 P2溶原性E.coli 中生長良好，人噬菌體的這種表型稱作 Spi。因此，通過人噬菌體 載體 DNA上的 red 和/或 gam 基因的缺失或替換，可在 P2噬菌體溶原性細(xì)菌中 鑒別重組和非重組人噬菌體。25、噬菌粒： 噬菌粒實(shí)際上是帶有絲狀噬菌體大間隔區(qū)的質(zhì)粒載體，是集質(zhì)粒和絲狀噬 菌體的有利特征于一身的載體，具有 CoIE1復(fù)制起點(diǎn)及抗生素抗性選擇標(biāo)記， 以及絲狀體噬菌體的間隔區(qū)。此間隔區(qū)含噬菌體 DNA 合成的起始

8、與終止及噬菌 體顆粒形態(tài)發(fā)生所必需的全部順式作用元件。含噬菌粒的細(xì)菌被噬菌體感染 后，基因 蛋白可作習(xí)習(xí)于噬菌粒的間隔區(qū)，啟動(dòng)滾環(huán)復(fù)制產(chǎn)生單鏈 DNA(ssDNA并) 進(jìn)行包裝。26、人工染色體載體：利用染色體的復(fù)制元件來驅(qū)動(dòng)外源 DNA 片段復(fù)制的載體稱為人工染色體載 體。27、黏粒載體：4/ 9黏粒 (cosmid)實(shí)際是質(zhì)粒的衍生物，是帶有 cos 序列(也稱 cos 位點(diǎn))的質(zhì)粒。 cos序列是 噬菌體 DNA中將 DNA 包裝到噬菌體顆粒中所需的 DNA 序列。黏粒 的組成包括質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn) (Co1E1)、抗性標(biāo)記 (ampr)、cos 位點(diǎn)，因而能像質(zhì)粒一 樣轉(zhuǎn)化和增殖。它的大小一

9、般 57kb 左右，用來克隆大片段 DNA,克隆的最大 DNA片段可達(dá) 45kb。有的黏粒載體含有兩個(gè) cos 位點(diǎn)，在某種程度上可提高使 用效率。28、酵母人工染色體載體：酵母人工染色體載體是利用釀酒酵母染色體的復(fù)制元件構(gòu)建的載體，其工 作環(huán)境也是在釀酒酵母中。釀酒酵母細(xì)胞形態(tài)為扁圓形和卵形，生長代時(shí)為 90min；含 16條染色體，其大小為 2251 900 kb，總計(jì)有1.4 107b；p具真核 mRNA的加工活性。29、表達(dá)載體：表達(dá)載體( Expressionvectors)就是在克隆載體基本骨架的基礎(chǔ)上增加表達(dá) 元件(如啟動(dòng)子、 RBS、終止子等)，使目的基因能夠表達(dá)的載體。如表達(dá)

10、載體 pKK223-3是一個(gè)具有典型表達(dá)結(jié)構(gòu)的大腸桿菌表達(dá)載體。其基 本骨架為來自 pBR322和 pUC 的質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)和氨芐青霉素抗性基因。(表達(dá) 載體四部分：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因)30、融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時(shí)表達(dá)翻譯出的原基因蛋白與外源蛋 白結(jié)合在一起所組成的蛋白質(zhì)。31、穿梭載體：簡單來說，穿梭載體能夠在兩類不同宿主中復(fù)制、增值和選擇的載體，如 有些載體既能夠在原核細(xì)胞中復(fù)制又能在真核細(xì)胞中復(fù)制，或能在大腸桿菌中 復(fù)制又能在革蘭氏陽性細(xì)菌中復(fù)制。5/ 931、整合載體：在生物學(xué)研究和基因工程應(yīng)用中，會(huì)涉及將某個(gè)基因或某些基因插入到染 色體中去的工作，

11、承擔(dān)這部分工作的載體，可稱為整合載體 (integrationvector) 。 根據(jù)整合方式的不同可分為定點(diǎn)整合和隨機(jī)整合，按其作用來分可歸為目標(biāo)基 因的插入或敲除以及隨機(jī)突變體庫的構(gòu)建。32、電轉(zhuǎn)化法：亦稱電穿孔法或電激法，是一種將極性分子穿過細(xì)胞膜導(dǎo)入細(xì)胞的一種物 理方法，在這個(gè)過程中一個(gè)較大的電脈沖短暫破壞細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層從而 允許 DNA 等分子進(jìn)入細(xì)胞。33、耐熱 DNA 聚合酶：耐熱 DNA聚合酶是一種可抗高溫的蛋白質(zhì)， 5-3聚合酶活性，有 Taq DNA 聚合酶、 .Tth DNA聚合酶、 Bca Best DNA聚合酶、 Sac DNA聚合酶幾種類型。34、多重 PCR

12、：在一個(gè)反應(yīng)體系中使用一對以上引物的 PCR就稱為多重 PCR，其結(jié)果產(chǎn)生 多個(gè) PCR產(chǎn)物。35、隨即擴(kuò)增多態(tài)性 DNA( RAPD)：是通過分析 DNA的 PCR產(chǎn)物的多態(tài)性來推測生物體內(nèi)基因排布與外在性狀 表現(xiàn)的規(guī)律的技術(shù)。 RAPD技術(shù)是以 8-lObp 的隨機(jī)寡核苷酸片段作為引物，對基 因組進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳或 PAGE電泳檢測，研究 DNA的多態(tài)性。36、擴(kuò)增片段 xx多態(tài)性( AFLP)：擴(kuò)增片段長度多態(tài)性 (amplified fragmentlength polymorphism,AFLP)分析是針 對基因組 D対 A的限制性酶切片段進(jìn)行選擇性 pc

13、R擴(kuò)增而建立 DNA指紋的技 術(shù)。首先將基因組 DNA 以兩種限制性內(nèi)切酶完全切割，之后再將合成的并與這 兩個(gè)限制酶產(chǎn)生的末端相對應(yīng)的接頭 (adapter)與酶切 DNA 片段的兩端連接。然6/ 9 后以含有接頭序列和酶切位點(diǎn)序列的引物對連接產(chǎn)物作 PCR擴(kuò)增。最后利用聚 丙烯胺凝膠電泳對 PCR產(chǎn)物進(jìn)行分離，從而 DNA 指紋。37、反義 RNA：反義 RNA是指與 mRNA互補(bǔ)的 RNA分子，也包括與其它 RNA 互補(bǔ)的 RNA 分子。由于核糖體不能翻譯雙鏈的 RNA，所以反義 RNA與 mRNA特異性的互補(bǔ) 結(jié)合 ,即抑制了該 mRNA的翻譯。38、閾值和 Ct 值：在 PCR擴(kuò)增的前

14、期循環(huán)中，熒光信號的強(qiáng)度呈現(xiàn)平緩的波動(dòng)狀態(tài)，經(jīng)過一 定數(shù)量的擴(kuò)增循環(huán)后熒光信號的強(qiáng)度由本底進(jìn)入指數(shù)增長階段。將熒光信號由 本底進(jìn)入指數(shù)增長階段的拐點(diǎn)所對應(yīng)的熒光強(qiáng)度設(shè)定為閾值，熒光信號達(dá)到閾 值所對應(yīng)的循環(huán)次數(shù)稱為 Ct 值。39、基線范圍：基線范圍是指從第三個(gè)循環(huán)起到 Ct 值前三個(gè)循環(huán)止，其終點(diǎn)要根據(jù)每次實(shí) 驗(yàn)的具體數(shù)據(jù)調(diào)整，一般取第三到第十五個(gè)循環(huán)之間。40、引物步移：一種長鏈 DNA 測序的策略。根據(jù)已測出的序列結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)測序引物，按第一 輪測序得出的新序列，再設(shè)計(jì)引物進(jìn)行第二輪測序，如此重復(fù)，直至獲得全序 列。41、體外隨機(jī)誘變：是指隨機(jī)地在克隆化 DNA 中引入堿基置換突變，特點(diǎn)是不

15、需要有序列針對性的合理設(shè)計(jì)，引入突變的位置及其性質(zhì)是隨機(jī)的；結(jié)果是在目的DNA 片段中引入大量的序列多樣性，得到的具體突變體可以是單點(diǎn)突變也可能是多點(diǎn)突 變。42、錯(cuò)誤摻入誘變：7/ 9錯(cuò)誤摻入誘變指在體外 DNA 擴(kuò)增中，使用具有錯(cuò)配傾向的 DNA 聚合酶以及 反應(yīng)條件，使堿基錯(cuò)誤摻入到新合成的基因中。43、DNA洗牌法：DNA 洗牌是一種通過將 DNA隨機(jī)打碎和 PCR重新組裝( reassembly)，使 一組突變基因進(jìn)行體外同源重組的方法。44、定點(diǎn)突變：使已知克隆基因或 DNA 片段中的任何一個(gè)特定堿基發(fā)生取代、插入或缺失 突變的過程稱為基因的定點(diǎn)突變。45、基因組 DNA文庫( c

16、DNA文庫)：基因組 DNA 文庫是指將生物體的全部基因組 DNA 用限制性內(nèi)切酶或機(jī)械力 量切割成一定長度范圍的 DNA 片段，再與合適載體在體外重組并轉(zhuǎn)化相應(yīng)的宿 主細(xì)胞獲得的所有陽性菌落。46、cDNA文庫：cDNA是由生物的某一特定器官或特定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的 mRNA 經(jīng)體外反轉(zhuǎn) 錄后形成的。也就是說， cDNA文庫代表生物的某一特定器官或特定發(fā)育時(shí)期細(xì) 胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄水平上的基因群體。47、文庫的代表性和隨機(jī)性：代表性是指文庫中所有克隆所攜帶的 DNA 片段可以覆蓋整個(gè)基因組，也就 是說，可以從該文庫中分離任何一段基因組 DNA。隨機(jī)性是指染色體 DNA 采用 部分酶切或隨機(jī)切割的方法來打斷。48、均一化 cDNA 文庫：將構(gòu)建好的獨(dú)立 cDNA文庫進(jìn)行均一化處理，可將其中表達(dá)豐富高或較高