醫(yī)院輸血實驗室質(zhì)量控制和管理制度 人民醫(yī)院檢驗科 血庫管理人民醫(yī)院質(zhì)量管理體系文件

1、成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫管理文件編號：cdey-lab-xkgl27版本/修訂號：a/0主題內(nèi)容輸血實驗室質(zhì)量控制和管理制度生效日期：20080808 第 1 頁 共2頁laboratory of chengdu no.2 peoples hospital成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫sop文件編號：cdey-lab-xk-cz01版本/修訂號：b/0主題內(nèi)容abo血型鑒定（鹽水法）生效日期：20120101第 7 頁 共48 頁laboratory of chengdu no.2 peoples hospitalabo血型鑒定（鹽水法）1 原理根據(jù)紅細(xì)胞上有或無a抗原或/和b抗原，將血

2、型分為a型、b型、ab型和o型4種。可利用紅細(xì)胞凝集實驗，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定abo血型。所謂正定型，是用已知抗-a和抗-b分型血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的a抗原或/和b抗原；所謂反定型，是用已知a細(xì)胞和b細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗-a或/和抗b。2 標(biāo)本采集：2.1標(biāo)本種類：采集靜脈血3-4ml待凝固后分離血清，將紅細(xì)胞用8.5%生理鹽水配成5%紅細(xì)胞懸液。2.2標(biāo)本要求：抗凝要求edtak2抗凝管或干燥管均可。標(biāo)本應(yīng)無溶血，標(biāo)簽填寫內(nèi)容齊全，無涂改。3標(biāo)本儲存：操作完標(biāo)本4冰箱保存7天。4標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸。5 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染、溶血標(biāo)本標(biāo)簽填寫內(nèi)容不齊全或有涂改、標(biāo)本量太少不能

3、作檢測。6試劑6.1試劑名稱：abo血型定型試劑（人血清）6.2試劑生產(chǎn)廠家：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所、四川協(xié)和生物技術(shù)有限責(zé)任公司6.3試劑組成試劑1.抗-a血清，效價256，2-8避光保存，有效期為一年，在效期內(nèi)使用。試劑2.抗-b血清，效價128，2-8避光保存，有效期為一年，在效期內(nèi)使用.6.4試劑名稱：人abo血型反定型紅細(xì)胞試劑6.5試劑生產(chǎn)廠家：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司6.6試劑組成：a1、b及o型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。7儀器7.1離心機(jī)：80-2上海手術(shù)器械廠7.2電熱恒溫水箱：上海醫(yī)療器械廠7.3顯微鏡：olympus(日本)8操作步驟及結(jié)果判斷：8.1試管法8.1.1 取

4、潔凈小試管（內(nèi)徑10mm*60mm）3支，分別標(biāo)明抗-a、抗-b和抗-a+b，用滴管分別加抗-a、抗-b和抗-a+b。分型血清各1滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混合。8.1.2另取潔凈小試管（內(nèi)徑10mm*60mm）3支，分別標(biāo)明a、b和o細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入a、b和o型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混合。8.1.3立即以1000r/min離心1min。8.1.4將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。8.1.5觀察結(jié)果時既要看有無凝集，更

5、要注意凝集強(qiáng)度，此有助于a、b亞型、類b或cisab的發(fā)現(xiàn)。8.1.6凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)4 + = 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3 + = 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2 + = 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。1 + = 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。+/- = 鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。mf = 混合凝集外觀（mixed field）是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍成分散分布。 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。8.1.7按表1-6-1報告受檢者紅細(xì)胞abo血型8.2玻片法8.2.1取清潔玻片1張（或白瓷板1塊），用蠟

6、筆劃成方格，標(biāo)明抗-a、抗-b和抗-a+b，分別用滴管滴加抗-a、抗-b和抗-a+b分型血清2滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者2%紅細(xì)胞懸液1滴，混合。8.2.2另取潔凈玻片一張（或白瓷板1塊），用蠟筆劃成方格，標(biāo)明a細(xì)胞、b細(xì)胞和o細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清2滴，再分別用滴管滴加a、b和o型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。8.2.3將玻片不斷輕輕轉(zhuǎn)動，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約15min，以肉眼觀察有無凝集（或溶血）反應(yīng)。如以玻片作試驗時，也可用低倍鏡觀察結(jié)果。表1-6-1 abo血型正反定型結(jié)果分型血清+受檢者紅細(xì)胞 受檢者血型 受檢者血清+試劑紅細(xì)胞抗-a 抗-b 抗- a+b a細(xì)胞 b細(xì)胞 o細(xì)

7、胞 + + a + + + b + o + + + + + ab 注：+ = 凝集； = 不凝集9操作性能：快速簡便，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。10超出范圍結(jié)果處理：10.1細(xì)胞自凝：在冬天氣溫較低時，某些病人血清中含有冷凝集素而導(dǎo)致假陽性；若有此懷疑，建議在最后滴入懸浮液時將試管立即置入37水浴中，輕輕轉(zhuǎn)動試管混勻，并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。10.2紅細(xì)胞懸液為5%為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當(dāng)，反應(yīng)不明顯易誤判。10.3各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。10.4正反定型結(jié)果不一致的原因10.4.1有技術(shù)性問題或紅細(xì)胞和血清本身的問題，常見者有

8、以下幾種：分型血清效價太低、親和力不強(qiáng)。如抗-a血清效價不高，可將a亞型誤定為o型，ab型誤定為b型。10.4.2紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。10.4.3受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少（如亞型）或抗原性減弱（見于白血病或惡性腫瘤）以及類b或cisab等。10.4.4受檢者血清中蛋白紊亂（高球蛋白血癥），或?qū)嶒灂r溫度過高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。10.4.5受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-a及/或抗-b抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。10.4.6各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。10.4.7由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多

9、凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。10.4.8血清中有意外抗體，如自身抗-i，常引起干擾。10.4.9老年人血清中抗體水平大幅度下降。10.5正反定型結(jié)果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn)abo正反定型結(jié)果不一致，首先要重復(fù)試驗1次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試驗結(jié)果，就可解決明顯的問題，對一些疑難問題必須進(jìn)一步研究。初步的檢查步驟包括：10.5.1另從受檢者采取1份新鮮血液標(biāo)本，這樣可以糾正因污染或搞錯樣本造成的不符合。10.5.2將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5%鹽水細(xì)胞懸液，用抗-a、抗-b、抗-a1，抗-a+b及抗-h做試驗可以得到其它有用的信息。10.5.3對受檢紅細(xì)胞作

10、直接抗球蛋白試驗，如結(jié)果呈陽性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。10.5.4用a1、a2、b、o紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑時抗-i，用o型（或abo相合的）臍血紅細(xì)胞檢查。10.5.5如果試驗結(jié)果未見凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗至少在室溫和4oc放置30min，用顯微鏡檢查核實。10.5.6如疑為a抗原或b抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗-a或抗-b血清作吸收及放射試驗以及受檢者唾液作a、b、h血型物質(zhì)測定。后者只對80%hab分泌型的人有用。10.5.7如試驗結(jié)果紅細(xì)胞呈緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴，混合，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水1滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作試驗，以免使血清

11、中抗體被稀釋。10.5.8如受檢者為a型血而疑為有類b抗原時，可用下列方法進(jìn)行鑒別：（1） 觀察細(xì)胞與抗-a及抗-b的凝集強(qiáng)度，與抗-a的反應(yīng)要比與抗-b的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗更為明顯。（2） 用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗，血清中的抗-b不凝集自身紅細(xì)胞上的類b抗原。（3） 檢查唾液中是否有a、b物質(zhì)，如果時分泌型，可檢出a物質(zhì)而無b物質(zhì)。（4） 核對患者的診斷，類b抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關(guān)。10.5.9如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，應(yīng)考慮由遺傳產(chǎn)生的cad抗原活性；被細(xì)菌酶激活的t或tk受體；或產(chǎn)生機(jī)制不太明了的tn受體所引起。多凝集紅細(xì)胞具有以下特點(diǎn)：能被人和許多家

12、兔的血清凝集。能與大多數(shù)成年人的血清凝集，不管有無相應(yīng)的同種抗體。不被臍帶血清凝集。通常不與自身的血清凝集。如有條件可用外源凝集素加以鑒別。11注意事項11.1分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。11.2試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。11.3試劑紅細(xì)胞以3個健康者同型新鮮紅細(xì)胞混合，用生理鹽水洗滌1次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。11.4操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。11.5按理igm抗-a和抗-b與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4oc為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍再室溫（2024oc）內(nèi)進(jìn)行試

13、驗，37oc可使反應(yīng)減弱。11.6離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。11.7觀察時應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。11.8判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對、記錄，避免筆誤。12.參考文獻(xiàn)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.南京：東南大學(xué)出版社，1997，p89成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫sop文件編號：cdey-lab-xk -cz02版本/修訂號：b/0主題內(nèi)容rh（d）血型鑒定（鹽水法）生效日期：20120101 第 10 頁 共48 頁laboratory of chengdu no.2 peoples hosp

14、italrh（d）血型鑒定（鹽水法）1 原理： 一般臨床上根據(jù)紅細(xì)胞表面d抗原的有無，將rh血型分為rh陰性和陽性。如果紅細(xì)胞表面有d抗原，與細(xì)胞株bs226細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)，使紅細(xì)胞發(fā)生凝集，為rh陽性，如不發(fā)生凝集，表明紅細(xì)胞表明沒有d抗原，為rh陰性。2 標(biāo)本采集：2.1標(biāo)本種類：采集靜脈血3-4ml待凝固后分離血清，將紅細(xì)胞用8.5%生理鹽水配成5%紅細(xì)胞懸液。2.2標(biāo)本要求：抗凝要求edtak2抗凝管或干燥管均可。標(biāo)本應(yīng)無溶血，標(biāo)簽填寫內(nèi)容齊全，無涂改。3標(biāo)本儲存：操作完標(biāo)本4冰箱保存7天。4標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸。5 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染、溶血標(biāo)本標(biāo)簽填寫內(nèi)容不齊全

15、或有涂改、標(biāo)本量太少不能作檢測。6試劑6.1試劑名稱：rhd(igm)血型定型試劑（單克隆抗體）6.2試劑生產(chǎn)廠家：德國biotest.ag6.3試劑保存;2-8避光保存，有效期為1年，在效期內(nèi)用。7儀器7.1離心機(jī)：80-2上海手術(shù)器械廠7.2電熱恒溫水箱：上海醫(yī)療器械廠7.3顯微鏡：olympus(日本)8操作步驟及結(jié)果判斷8.1玻片法8.1.1在玻片方格中加1滴抗d試劑。8.1.2再加2滴2%-5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液于抗d混合試劑中。8.1.3用干凈玻棒完全攪拌上述紅細(xì)胞與抗d試劑。8.1.4前后左右傾斜玻片且同時觀察凝集現(xiàn)象。8.1.5判斷標(biāo)準(zhǔn)4 + = 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透

16、明。3 + = 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2 + = 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。1 + = 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。+/- = 鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。mf = 混合凝集外觀（mixed field）是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍成分散分布。 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。8.1.5報告;受檢者紅細(xì)胞rh（d）血型：陽性或陰性。出現(xiàn)陰性、弱陽性或結(jié)果不清楚時，進(jìn)行試管法試驗。8.2試管法8.2.1在試管中加1滴抗d試劑。8.2.2再加1滴滴2%-5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液于上述試管中，混勻。8.2.3以320

17、0-3400r/min離心15-30秒。8.2.4輕輕振搖試管使紅細(xì)胞重懸，肉眼或顯微鏡觀察有無凝集現(xiàn)象。8.2.5結(jié)果：凝集這為陽性反應(yīng)，反之為陰性反應(yīng)。報告方式同玻片法。9操作性能快速簡便，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。10超出范圍結(jié)果處理：10.1細(xì)胞自凝：在冬天氣溫較低時，某些病人血清中含有冷凝集素而導(dǎo)致假陽性；若有此懷疑，建議在最后滴入懸浮液時將試管立即置入37水浴中，輕輕轉(zhuǎn)動試管混勻，并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。10.2紅細(xì)胞懸液為5%為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當(dāng)，反應(yīng)不明顯易誤判。10.3各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。11注意事項1

18、1.1rh血型系統(tǒng)的抗體多由免疫產(chǎn)生，血清中有很多天然抗體存在，故不需作反定型試驗。11.2rh血型鑒定要嚴(yán)格控制溫度與時間，因rh抗原抗體凝集反應(yīng)的凝集塊比較脆弱，觀察反應(yīng)結(jié)果，應(yīng)輕輕彈動試管，不可用力搖動。11.3試劑質(zhì)量性能符合要求，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。11.4試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。11.5操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。11.6按理igm抗-d與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4oc為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍再室溫（2024oc）內(nèi)進(jìn)行試驗，37oc可使反應(yīng)減弱。11.7離心時間不宜過長或過短，速度

19、不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。11.8觀察時應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。11.9判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對、記錄，避免筆誤。12.參考文獻(xiàn)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.南京：東南大學(xué)出版社，1997，p89 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫sop文件編號：cdey-lab-xk -cz03版本/修訂號：b/0主題內(nèi)容冰凍血漿解融操作規(guī)程生效日期：20120101 第 12 頁 共48 頁laboratory of chengdu no.2 peoples hospital冰凍血漿解融操作規(guī)程1 目的 融化新鮮冰凍血漿，使冰凍血漿從

20、固態(tài)裝化解為液態(tài)狀，利于臨床輸注。2 范圍 使用于本院輸血科3 職責(zé)發(fā)血、值班崗位完成4 原理khr-1型冰凍血漿解凍箱采用加熱箱、解凍箱、循環(huán)管路、儀器箱等組成的全自動循環(huán)冰凍血漿系統(tǒng)，水在加熱箱內(nèi)被加熱至設(shè)定溫度，然后由循環(huán)泵送入解凍槽，冰凍血漿袋放在專用的不銹鋼解凍架中，水的流體靜壓力包住血漿袋，與冰凍血漿進(jìn)行熱交換后再循環(huán)金加熱箱內(nèi)加熱。循環(huán)的水流既能加快冰凍血漿與水的熱交換，又能使冰凍血漿快速安全的溶解至適合人體輸入的溫度。由于加熱箱與解凍槽的分離，加熱管與周圍高溫不會破壞血漿的有效成分。5 操作5.1使用：按khr-1型冰凍血漿融化箱使用說明書進(jìn)行安裝5.1.1按照解凍箱使用說明，

21、連接進(jìn)水管、排水管5.1.2電源的連接5.2.操作5.2.1缺水顯示 若顯示屏顯示“缺水”時，請采用人工加水，當(dāng)水位達(dá)到時，儀器會自動進(jìn)入預(yù)溫狀態(tài)。5.2.2在解凍模式顯示狀態(tài)下：5.2.2.1時間設(shè)定，一般設(shè)定18分鐘，通過按“+”或“-”來調(diào)整設(shè)定時間，在解凍中可調(diào)整。5.2.2.2開始解凍：將冰凍血漿裝入袋內(nèi)，再掛在解凍架上放妥當(dāng)，并用架上壓桿壓住，按確定。6保養(yǎng)6.1 清洗：使用自來水自動進(jìn)水的用戶，應(yīng)經(jīng)常清洗解凍箱，以確保箱體內(nèi)部清潔。具體方法：在圖2狀態(tài)下，按動“左右”鍵使“清洗”反顯，再按“確定”，及其進(jìn)入清洗狀態(tài)。此時應(yīng)接好進(jìn)水管和出水管，儀器清洗過程如下，先排空加熱箱中的水，

22、再注入清水，開始循環(huán)，然后排空水，清洗完成時，儀器自動返回到初始狀態(tài)，可根據(jù)用戶水質(zhì)的好壞，一般每周清洗1至2次。使用蒸餾水的用戶也必須每周清洗換水。6.2 溫度效正：定時對水箱溫度進(jìn)行檢測，如發(fā)現(xiàn)實測溫度與顯示溫度相差0.5度以上，應(yīng)對解凍箱進(jìn)行校正。具體方法如下：在關(guān)機(jī)狀態(tài)下，按住面板上的“上下”檔開機(jī)，循環(huán)泵隨即打開，加熱箱內(nèi)的水上升至解凍槽內(nèi)，溫度窗口顯示即時水溫。用量程準(zhǔn)確的0-50度分辨率為0.1度的水銀溫度計測量解凍槽內(nèi)水溫，經(jīng)觀察若顯示溫度與測量溫度不一致，可按溫度“+，-”鍵若干次直至兩者溫度相同。最后按一次“確定”鍵確認(rèn)即完成效正。7 注意事項7.1清洗：注意經(jīng)常清洗解凍箱

23、，以確保箱體內(nèi)部到清潔，采用自動進(jìn)水清洗。7.2溫度校正，沒半年對水溫測試是否與版面溫度顯示相同。7.3嚴(yán)格執(zhí)行操作有關(guān)程序，保證水溫正確。8.參考文獻(xiàn)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.南京：東南大學(xué)出版社，1997， 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫sop文件編號：cdey-lab-xk -cz04版本/修訂號：b/0主題內(nèi)容 交叉配血（凝聚胺法）生效日期：20120101 第 15 頁 共48 頁laboratory of chengdu no.2 peoples hospital交叉配血（凝聚胺法）1.目的： 在臨床用血前將患者血清和血細(xì)胞分別與獻(xiàn)血員血細(xì)胞和血

24、清進(jìn)行交叉配血試驗，以排除各種因素引起的輸血反應(yīng)（如凝集或溶血），保證用血安全。2.適用范圍：2.1 所有申請輸用全血及紅細(xì)胞懸液的標(biāo)本。2.2 申請輸用手工血小板的標(biāo)本。3.職責(zé)：輸血科主任負(fù)責(zé)對該標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。4.操作4.1 原理 凝聚胺是帶有高價陽離子的多聚季銨鹽,溶解后能產(chǎn)生大量正電荷，可以大量中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減弱紅細(xì)胞之間的排斥力，使紅細(xì)胞彼此之間的距離縮小，出現(xiàn)正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝集：低離子強(qiáng)度溶液降低了紅細(xì)胞的zeta電位，進(jìn)一步增強(qiáng)抗原抗體間的引力，增強(qiáng)了血型抗體凝集紅細(xì)胞的能力。當(dāng)血清中存在igm或igg類血型抗體時，在上述條件下，與紅細(xì)胞緊密結(jié)合，

25、出現(xiàn)特異性的凝集，此時加入枸櫞酸鹽解聚液（懸浮液）以消除凝聚胺的正電荷，由igm或igg類血型抗體與紅細(xì)胞產(chǎn)生的凝集不會散開，如血清中不存在igm或igg類血型抗體，加入解聚液可使非特異性凝集解散。4.2. 標(biāo)本采集4.2.1 標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血4.2.2 標(biāo)本要求：4.2.2.1 抗凝劑：edta（濃度15g/l）或枸櫞酸鈉（濃度32g/l）抗凝4.2.2.2 采血量：至少不低于2ml的靜脈血（加入試管后注意與抗凝劑混勻）4.2.3 標(biāo)本采集要求4.2.3.1 采血時，一定要認(rèn)真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。4.2.3.2 血標(biāo)本容器要清潔干燥并事先貼好標(biāo)簽，加血標(biāo)本前要認(rèn)真

26、核對、無誤后再將血液注入。4.2.3.3 血標(biāo)本標(biāo)簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。4.2.3.4 采血者要在申請單和標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。4.2.3.5 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強(qiáng)抽血時）在病人輸液時采集標(biāo)本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。4.2.3.6非急診病人輸血前，應(yīng)事先采取血標(biāo)本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核對。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標(biāo)簽、采取血標(biāo)本送檢。4.3. 標(biāo)本儲存 待測標(biāo)本在2-8下的保存時間為72小時，已檢測標(biāo)本2-

27、8冰箱保存7天。4.4. 標(biāo)本運(yùn)輸 室溫運(yùn)輸4.5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)4.5.1嚴(yán)重溶血、受污染，或者含有凝塊的樣品。4.5.2標(biāo)本床號姓名等與檢驗單不符。4.5.2標(biāo)本上未注明采血者姓名4.6. 試劑4.6.1 試劑名稱：凝聚胺介質(zhì)試劑 4.6.2 試劑生產(chǎn)廠家：珠海貝索生物技術(shù)有限公司4.6.3 試劑組成：低離子溶液，凝聚胺溶液，懸浮液5.儀器 5.1離心機(jī)： 80-2上海手術(shù)器械廠6.操作步驟及結(jié)果判斷6.1取受血者和供血者的血液標(biāo)本，以3000r/min離心3分鐘，分離上層受、供著血清或血漿，并在壓積紅細(xì)胞制成5%受、供著紅細(xì)胞生理鹽水懸液。6.2取2支小試管，標(biāo)明主側(cè)和次側(cè)，主側(cè)管加患者

28、血清（血漿）2滴，加供著5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液（洗滌或不洗滌均可）1滴，次側(cè)管反之。6.3每管各加liss液0.7ml，再加凝聚胺液2滴，混合均勻，。6.4以3400r/min離心15秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓試管底殘留0.1ml液體。6.5輕輕搖動試管，目測紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，必須重做;如有凝集，則進(jìn)行下一步。6.6加入懸浮液2滴，輕輕轉(zhuǎn)動試管混合并同時觀察結(jié)果。如果在 30-1min內(nèi)凝集散開，表示凝聚胺引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合;如果凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。如反應(yīng)可疑，可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。6.7結(jié)果判斷 如果主側(cè)管和

29、次側(cè)管內(nèi)紅細(xì)胞凝集散開，則為凝集胺引起的非特異性，表示配血結(jié)果相合，可以輸用。 如果主側(cè)管和次側(cè)管或單獨(dú)一側(cè)管內(nèi)紅細(xì)胞凝集不散開，則為抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，表示配血結(jié)果不相合，禁忌輸用。7 注意事項7.1 若受血者用血量大，需要10個以上獻(xiàn)血員時，獻(xiàn)血員間也要進(jìn)行交叉配血。7.2溶血標(biāo)本不能用于交叉配血，因為配血試管中發(fā)生溶血現(xiàn)象，表明有抗原抗體反應(yīng)，同時還有補(bǔ)體參與，是配血結(jié)果的嚴(yán)重情況。7.3血清中存在冷集素時，可影響配血結(jié)果的判斷。此時可在最后加懸浮液時，將試管立即放入37水浴中，輕輕轉(zhuǎn)動試管，并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。7.4當(dāng)懸浮液加入后，應(yīng)盡快觀察結(jié)果，以免反應(yīng)減弱或消失。7.5凝聚

30、胺是一種抗肝素試劑，若患者血液標(biāo)本中含有肝素，需多加幾滴凝聚胺溶液以中和肝素。8.參考文獻(xiàn)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.南京：東南大學(xué)出版社，1997， 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫sop文件編號：cdey-lab-xk -cz05版本/修訂號：b/0主題內(nèi)容交叉配血（微柱凝膠法）生效日期：20120101 第 19 頁 共48 頁laboratory of chengdu no.2 peoples hospital交叉配血（微柱凝膠法）1.目的： 在臨床用血前將患者血清和血細(xì)胞分別與獻(xiàn)血員血細(xì)胞和血清進(jìn)行交叉配血試驗，以排除各種因素引起的輸血反應(yīng)（如凝集或溶

31、血），保證用血安全。2.適用范圍：2.1 所有申請輸用全血及紅細(xì)胞懸液的標(biāo)本。2.2 申請輸用手工血小板的標(biāo)本。3.職責(zé)：輸血科主任負(fù)責(zé)對該標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。4.原理交叉配血就是將患者血清和血細(xì)胞分別與獻(xiàn)血員血細(xì)胞和血清進(jìn)行主次測交叉配試驗，以排除各種因素引起的輸血反應(yīng)（如凝集或溶血），保證用血安全。微柱凝膠檢測法是凝膠分子篩技術(shù)和免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的產(chǎn)物，通過調(diào)節(jié)凝膠（葡聚糖）的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分離游離紅細(xì)胞和凝集紅細(xì)胞的目的。如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實驗陰性；如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集

32、，即凝集實驗陽性。5.標(biāo)本5.1 標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血5.2標(biāo)本要求：5.2.1 抗凝劑：edta（濃度15g/l）或枸櫞酸鈉（濃度32g/l）抗凝5.2.2 采血量：至少不低于5ml的靜脈血（加入試管后注意與抗凝劑混勻）5.2.3 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于3500轉(zhuǎn)/分，時間必須大于15分鐘5.3 標(biāo)本采集要求5.3.1 采血時，一定要認(rèn)真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。5.3.2 血標(biāo)本容器要清潔干燥并事先貼好標(biāo)簽，加血標(biāo)本前要認(rèn)真核對、無誤后再將血液注入。5.3.3 血標(biāo)本標(biāo)簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。5.3.4 采血者要在申請單和標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，

33、寫清采血時間，及時送檢。5.3.5 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強(qiáng)抽血時）在病人輸液時采集標(biāo)本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。5.3.6 非急診病人輸血前，應(yīng)事先采取血標(biāo)本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核對。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標(biāo)簽、采取血標(biāo)本送檢。5.4 標(biāo)本儲存 待測標(biāo)本在2-8下的保存時間為72小時，已檢測標(biāo)本2-8冰箱保存7天。5.5 標(biāo)本運(yùn)輸 室溫運(yùn)輸5.6 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)5.6.1嚴(yán)重溶血、受污染，或者含有凝塊的樣品。5.6.2標(biāo)本床號姓名等與檢驗單不符。5.6.3標(biāo)本上未

34、注明采血者姓名6試劑6.1 試劑名稱：diamed低離子/抗人球蛋白卡 6.2 試劑生產(chǎn)廠家：diamed（瑞士達(dá)亞美）6.3 試劑說明：每張diamed凝膠卡由6個微孔管組成7.儀器 7.1離心機(jī)：id-centrifuge 12s離心機(jī) 7.2 孵育器：id-incubator 37si臺式保溫箱7.3 生產(chǎn)廠家：diamed（瑞士達(dá)亞美）8. 操作步驟8.1 預(yù)備取diamed低離子/抗人球蛋白卡，將有條形碼的一邊面向?qū)嶒炚?；并在此面?biāo)記病人標(biāo)本及獻(xiàn)血員的編號。（約定：第1管為主側(cè)，第2管為次側(cè)，以此類推） 8.2加樣：8.2.1先加紅細(xì)胞8.2.1.1受血者紅細(xì)胞：用40ul加樣槍取4

35、0ul受血者積壓紅細(xì)胞（rbc）加入備好1ml生理鹽水的試管中，混勻；制成4%的紅細(xì)胞懸液；取下吸頭，換上10ul加樣槍，取10ul此4%的紅細(xì)胞懸液加入次側(cè)管中。8.2.1.2獻(xiàn)血者紅細(xì)胞：用40ul加樣槍取40ul獻(xiàn)血者積壓紅細(xì)胞（rbc）加入備好1ml生理鹽水的試管中，混勻；制成4%的紅細(xì)胞懸液；取下吸頭，換上10ul加樣槍，取10ul此4%的紅細(xì)胞懸液加入主側(cè)管中。8.2.2.再加血清：8.2.2.1用40ul加樣槍取40ul受血者血清加入主側(cè)管；8.2.2.2用40ul加樣槍取40ul獻(xiàn)血員血清加入次側(cè)管8.3孵育10分鐘；8.4離心5分鐘8.5判讀結(jié)果，記錄。9. 結(jié)果判斷模式如果

36、紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實驗陰性，供受者血液相合；如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集，即凝集實驗陽性，供受者血液不相合。10. 操作性能10.1 凝膠微柱法為國際安全輸血檢查的推薦方法；10.2 測試結(jié)果安全可靠：對不完全抗體不會漏檢，在交叉配血過程中不會出現(xiàn)假陰性結(jié)果，可預(yù)防因igg類抗體引起的輸血反應(yīng)。結(jié)果判斷客觀性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高10.3 陰性、陽性、弱陽性的結(jié)果判斷都有明確的界定，不依操作者與實驗室的不同而變化。大多數(shù)傳統(tǒng)測試法仍然依賴于對液體環(huán)境下凝集反應(yīng)的解釋，由于缺乏客觀性的反應(yīng)終點(diǎn)，反應(yīng)結(jié)果的判讀準(zhǔn)確性因人而易。即使自動化判讀機(jī)也很難將微

37、弱的血細(xì)胞凝集與陰性反應(yīng)區(qū)別開來。 10.4 靈敏度高、特異性高、重復(fù)度好；10.5 客觀性好，避免主觀判讀結(jié)果的影響；10.6 檢測結(jié)果可較長時間保存 10.7 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。11 注意事項11.1 變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的陰或陽性結(jié)果；11.2 因為儲運(yùn)不當(dāng)?shù)脑?，有時會發(fā)現(xiàn)微管的頂部存在小水珠或氣泡，在使用類似的凝膠卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用；11.3 如果發(fā)現(xiàn)diamed卡封口損壞，或者管內(nèi)膠量不足或干裂，請不要使用；11.4使 用非達(dá)亞美2號稀釋液來配制紅

38、血球懸液可能會導(dǎo)致不良結(jié)果，所用的紅血球的懸液濃度與建議使用的濃度應(yīng)相符。11.5 纖維蛋白可吸附部分紅細(xì)胞，應(yīng)將血樣充分離心。11.6 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序可以檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集。11.7 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。12 參考文獻(xiàn)12.1全國臨床檢驗操作規(guī)程（第三版）12.2 黃德明 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書12.3 diamed 血型配血微量定型系統(tǒng)（diamed-id micro typing system）操作技術(shù)手冊 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫sop文件編號：cdey-lab-xk-cz06版本/修

39、訂號：b/0主題內(nèi)容抗體篩查試驗（微柱凝膠法）生效日期：20120101 第 23 頁 共48 頁laboratory of chengdu no.2 peoples hospital抗體篩查試驗（微柱凝膠法）1.目的： 發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體,避免因abo以外的血型不合引起的輸血反應(yīng),以保證患者用血安全2.適用范圍：2.1 輸血前檢查2.2 產(chǎn)前檢查2.3 新生兒溶血癥（hdn）3.職責(zé)：輸血科主任負(fù)責(zé)對該標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。4.原理 不完全抗體即abo系統(tǒng)以外其它系統(tǒng)的抗體,也稱為免疫抗體.多為igg,單倍體抗體，長度約24nm ，多經(jīng)妊娠或輸血后免疫產(chǎn)生。在鹽水介質(zhì)中可以與相應(yīng)紅

40、細(xì)胞反應(yīng)，但不能發(fā)生凝集，必須通過特定的方法（如抗人球蛋白）使致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。 抗體篩查就是利用3瓶抗體篩選細(xì)胞與待檢（患者）血清反應(yīng)，如果待檢（患者）血清中存在抗體，則應(yīng)該可以和這3瓶抗體篩選細(xì)胞中至少1瓶顯示反應(yīng)。 微柱凝膠檢測法是凝膠分子篩技術(shù)和免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的產(chǎn)物，通過調(diào)節(jié)凝膠（葡聚糖）的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分離游離紅細(xì)胞和凝集紅細(xì)胞的目的。如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實驗陰性；如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集，即凝集實驗陽性。5標(biāo)本5.1標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血5.2 標(biāo)本要求：5.2.1

41、抗凝劑：edta（濃度15g/l）或枸櫞酸鈉（濃度32g/l）抗凝5.2.2 采血量：至少不低于5ml的靜脈血（加入試管后注意與抗凝劑混勻）5.2.3 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于3500轉(zhuǎn)/分，時間必須大于15分鐘5.3標(biāo)本采集要求5.3.1采血時，一定要認(rèn)真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。5.3.2血標(biāo)本容器要清潔干燥并事先貼好標(biāo)簽，加血標(biāo)本前要認(rèn)真核對、無誤后再將血液注入。5.3.3血標(biāo)本標(biāo)簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。5.3.4采血者要在申請單和標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。5.3.5采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強(qiáng)

42、抽血時）在病人輸液時采集標(biāo)本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。5.3.6非急診病人輸血前，應(yīng)事先采取血標(biāo)本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核對。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標(biāo)簽、采取血標(biāo)本送檢。5.3.7標(biāo)本儲存 待測標(biāo)本在2-8下的保存時間為48小時5.4標(biāo)本運(yùn)輸 室溫保存5.5 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)5.5.1嚴(yán)重溶血、受污染，或者含有凝塊的樣品。5.5.2標(biāo)本床號姓名等與檢驗單不符。5.5.3標(biāo)本上未注明采血者姓名6. 試劑6.1 試劑名稱：diamed凝膠卡、標(biāo)準(zhǔn)抗體篩查細(xì)胞（0.8%）、達(dá)亞美2號稀釋液（dil2）6.2 試劑

43、生產(chǎn)廠家：diamed（瑞士達(dá)亞美）6.3 試劑說明：每張diamed凝膠卡由6個微孔管(兩人份)組成7.儀器 diamed-id micro typing system7.1 離心機(jī)：id-centrifuge 12 s 7.2 孵育器：id-incubator 37 s7.3 生產(chǎn)廠家：diamed（瑞士達(dá)亞美）8. 操作步驟8.1 、標(biāo)準(zhǔn)抗體篩查細(xì)胞（0.8%），2號稀釋液室溫平衡。準(zhǔn)備樣本，標(biāo)記達(dá)亞美卡。8.2 三管中分別加入抗體篩查、細(xì)胞50ul8.3 三管中均加入25ul待檢樣本血漿或血清8.4 37孵育15分鐘8.5 離心10分鐘，判斷結(jié)果，記錄。9. 結(jié)果判斷模式1+至4+為抗

44、體篩查陽性結(jié)果（抗人球法），表示樣本含abo系統(tǒng)以外抗體，需要進(jìn)一步做抗體鑒定（-）為陰性結(jié)果。10. 臨床意義：10.1 在交叉配血試驗前或輸血前，提前進(jìn)行抗體篩選和鑒定檢測，可發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的不規(guī)則抗體，提醒臨床醫(yī)生需提前備血，以防緊急用血時找不到相容的獻(xiàn)血員； 10.2 抗篩可以縮短交叉配血時間，快速獲得相容的供血10.3 通過抗體篩選/鑒定試驗，可以提高不相容性檢出率（0.01%）。也就是說在1萬例交叉配血試驗中，如果沒有抗體篩選/鑒定檢測，可能會有一例漏檢。而如果常規(guī)作抗體篩選/鑒定和交叉配血，則可避免漏檢，達(dá)到100%的準(zhǔn)確性。 11. 操作性能11.1 凝膠微柱法為國際安全輸血

45、檢查的推薦方法；11.2 結(jié)果判斷客觀性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高,陰性、陽性、弱陽性的結(jié)果判斷都有明確的界定，不依操作者與實驗室的不同而變化。大多數(shù)傳統(tǒng)測試法仍然依賴于對液體環(huán)境下凝集反應(yīng)的解釋，由于缺乏客觀性的反應(yīng)終點(diǎn)，反應(yīng)結(jié)果的判讀準(zhǔn)確性因人而易。即使自動化判讀機(jī)也很難將微弱的血細(xì)胞凝集與陰性反應(yīng)區(qū)別開來。 11.3 靈敏度高、特異性高、重復(fù)度好；11.4 客觀性好，避免主觀判讀結(jié)果的影響；11.5 檢測結(jié)果可較長時間保存 11.6 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。12. 注意事項12.1 變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的

46、陰或陽性結(jié)果；12.2 因為儲運(yùn)不當(dāng)?shù)脑?，有時會發(fā)現(xiàn)微管的頂部存在小水珠或氣泡，在使用類似的凝膠卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用；12.3 如果發(fā)現(xiàn)diamed卡封口損壞，或者管內(nèi)膠量不足或干裂，請不要使用；12.4使用非達(dá)亞美2號稀釋液來配制紅血球懸液可能會導(dǎo)致不良結(jié)果，所用的紅血球的懸液濃度與建議使用的濃度應(yīng)相符。12.5 纖維蛋白可吸附部分紅細(xì)胞，應(yīng)將血樣充分離心。12.6 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序可以檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集。12.7 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。13. 參考文獻(xiàn)13.1全國臨床檢驗操作規(guī)

47、程（第三版）13.2 黃德明 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書13.3 diamed 血型配血微量定型系統(tǒng)（diamed-id micro typing system）操作技術(shù)手冊成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫sop文件編號：cdey-lab-xk-cz07版本/修訂號：b/0主題內(nèi)容抗血清效價測定生效日期：20120101 第 25 頁 共48 頁laboratory of chengdu no.2 peoples hospital抗血清效價測定1.目的 抗體效價測定是一種半定量檢測抗體濃度的方法。把效價視為抗體的含量，在臨床輸血檢驗中用于鑒定標(biāo)準(zhǔn)血清效價的測定，以檢測抗血清試劑的質(zhì)量。2.

48、檢測試劑：2.1試劑2.1.1試劑名稱：abo血型定型試劑（人血清）2.1.2試劑生產(chǎn)廠家：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所、四川協(xié)和生物技術(shù)有限責(zé)任公司2.1.3試劑組成試劑1.抗-a血清，效價256，2-8避光保存，有效期為一年，在效期內(nèi)使用。試劑2.抗-b血清，效價128，2-8避光保存，有效期為一年，在效期內(nèi)使用.2.2試劑2.2.1試劑名稱：人abo血型反定型紅細(xì)胞試劑2.2.2試劑生產(chǎn)廠家：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司2.2.3試劑組成：a1、b及o型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。3.原理 將被檢抗血清用生理鹽水作倍比稀釋后，加入一定量的抗原紅細(xì)胞，觀察凝聚強(qiáng)度。以抗體稀釋后仍能與抗原紅細(xì)胞出現(xiàn)肉眼

49、明顯可見凝聚的最高血清稀釋倍數(shù)來表示抗體的效價。4.操作步驟4.1取10支小試管，用加樣器每管中加生理鹽水0.2ml，在第一管中加入0.2ml被檢血清抗-a或抗-b血清，混勻后吸取0.2ml加入第二管，以此類推，至第10管，最后棄去0.2ml。1-10管的稀釋度分別為1：1，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32， 1：64，1：128，1：256，1：512。同樣操作，再配制以上濃度10支小試管，已作對照操作。4.2將標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞a或b及o細(xì)胞用生理鹽水稀釋為2%濃度。4.3于每管中加入2%a或2%b型紅細(xì)胞生理鹽水懸液0.1ml，混勻。4.4對照試驗：于另外10支試管中每管加入2%o紅細(xì)

50、胞懸液0.1ml。4.5室溫孵育15分鐘。4.6以3000r/min離心1分鐘，以出現(xiàn)（+）凝集強(qiáng)度試管的血清稀釋倍數(shù)的倒數(shù)為該抗血清的效價。5結(jié)果判斷5.1一般鹽水凝集試驗可立即觀察，或置室溫1小時觀察結(jié)果。5.2若出現(xiàn)低稀釋凝集強(qiáng)度比高稀釋凝集強(qiáng)度要強(qiáng)，說明有前帶現(xiàn)象發(fā)生。5.3對1份血清重復(fù)測定，結(jié)果可能不一樣，如果只有一個稀釋度的差別，是正常誤差范圍。5.5抗-a血清效價應(yīng)該128,抗-b血清效價應(yīng)64。6注意事項6.1稀釋操作時要準(zhǔn)確，避免稀釋不勻出現(xiàn)“跳管”現(xiàn)象。6.2稀釋液的容量越小，可能產(chǎn)生的誤差越大。如果可能，可以增大稀釋稀釋容量。7 參考文獻(xiàn)7.1陜西省醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床輸血技術(shù)

51、與質(zhì)量管理手冊7.2全國臨床檢驗操作規(guī)程成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫sop文件編號：cdey-lab-xk -cz08版本/修訂號：b/0主題內(nèi)容 室內(nèi)質(zhì)量控制生效日期：20120101 第 28 頁 共48 頁laboratory of chengdu no.2 peoples hospital室內(nèi)質(zhì)量控制1目的 制度本制度，為了選擇適當(dāng)?shù)膶嶒灧椒ê筒襟E，連續(xù)評價本實驗室檢測工作的可靠性程度，監(jiān)測和控制本實驗室檢測工作的精密度，提高常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢測的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠，以保證輸血的安全可靠性。2 范圍 適用于本院輸血科工作人員室內(nèi)質(zhì)量控制。3 職責(zé) 輸血科工作人員需

52、按本制度常規(guī)進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控操作。4具體程序4.1試劑質(zhì)控4.1.1abo血型試劑質(zhì)控4.1.1.1檢測項目：抗a抗b血清試劑要進(jìn)行抗體效價、特異性、親和力的測定，abo紅細(xì)胞懸液要進(jìn)行特異性檢測。以及外觀，有效期的檢查。4.1.1.2檢測頻次：每新一批次，同批次新開瓶，每日開始試驗時采用相互驗證的方法檢測abo細(xì)胞和抗a、b血清的凝集強(qiáng)度，特異性。4.1.1.3操作：詳見“抗血清效價測定sop”。4.1.1.4結(jié)果分析：特異性：抗a只能和a細(xì)胞發(fā)生凝集，抗b只能凝集b細(xì)胞，凝集強(qiáng)度4+;o細(xì)胞無凝集。效價：抗a血清效價256,抗b血清效價128.親和力：凝集開始時間1mm2,外觀合格，并在有效期

53、內(nèi)才合格，否則失控。4.1.2抗d血清質(zhì)控4.1.2.1檢測項目：效價，陰性質(zhì)控，陽性質(zhì)控，有效期，外觀4.1.2.2質(zhì)控品：來源：本實驗室檢測出的o型rh陽性紅細(xì)胞和o型rh陰性紅細(xì)胞：制備：洗滌兩種紅細(xì)胞并制備成40%的紅細(xì)胞懸液；保存：2-8儲存。4.1.2.3檢測頻次：每新一批次，同批次新開瓶時檢測效價；每日開始試驗時按常規(guī)操作檢測陰陽質(zhì)控。4.1.2.4結(jié)果分析：抗d血清效價64，陽性質(zhì)控出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集4+，陰性質(zhì)控紅細(xì)胞不出現(xiàn)凝集，在有效期內(nèi)，外觀合格，否則視為失控。4.1.3凝聚胺試劑質(zhì)控4.1.3.1檢測項目：有效期，外觀，igg類抗體陰性、陽性質(zhì)控，igm類抗體質(zhì)控。4.1.

54、3.2質(zhì)控品：igg類抗體陽性質(zhì)控品：標(biāo)化后的igg抗d與o型rhd陽性紅細(xì)胞；igg類抗體陰性質(zhì)控品：ab型血清（經(jīng)確認(rèn)無不規(guī)則抗體）與o型rhd陽性紅細(xì)胞。igm類抗體質(zhì)控品:3個abo血型互不相同的edta抗凝血全血標(biāo)本，其中一個作為受者，另外2個作為供者。4.1.3.3檢測頻次：每新一批次，同批次新開瓶，每日開始試驗時。4.1.3.4：igg類抗體陽性質(zhì)控：標(biāo)化后的igg抗d與o型rhd陽性紅細(xì)胞進(jìn)行合血；igg類抗體陰性質(zhì)控：ab型血清（經(jīng)確認(rèn)無不規(guī)則抗體）與o型rhd陽性紅細(xì)胞進(jìn)行合血。igm類抗體質(zhì)控:3個abo血型互不相同的edta抗凝血全血標(biāo)本，其中一個作為受者，另外2個作為供者，進(jìn)行交叉配血試驗。詳細(xì)操作見凝聚胺法交叉配血sop。4.1.3.5結(jié)果分析：igg類抗體陽性質(zhì)控出現(xiàn)相應(yīng)的凝集強(qiáng)度，igg類抗體陰性質(zhì)控不出現(xiàn)凝集， igm類抗體質(zhì)控反應(yīng)結(jié)果與預(yù)期一致。在有效期內(nèi)，外觀合格。符合以上視為在空，否則為失控。4.2過程質(zhì)控4.2.1abo、rhd血型鑒定質(zhì)控4.2.1.1質(zhì)控品來源：本實驗室內(nèi)檢測出的a型rh陰性ed