脂肪干細(xì)胞在顆粒脂肪移植中的作用匯總

1、-研究原著脂肪干細(xì)胞在顆粒脂肪移植中的作用趙雪蓮，張春莉，蘇曉光，張卓男，韓 朋，張 潔，王艷玲，張錘（河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院整形美容外科，河北省石家莊市050000）引用本文：趙雪蓮，張春莉，蘇曉光，張卓男，韓朋，張潔，王艷玲，張錘.脂肪干細(xì)胞在顆粒脂肪移植中的作用J.中國(guó)組織 工程研究，2016，20（41）:6105-6111.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.41.004ORCID: 0000-0001-7793-300X（趙雪蓮）文章快速閱讀:脂肪干細(xì)胞對(duì)顆粒脂肪細(xì)胞移植的作用8只注射基礎(chǔ)培養(yǎng)液8只注射顆粒脂肪一8只注射脂肪干細(xì)胞和一:;顆粒脂肪結(jié)果

2、提示，脂肪干細(xì)胞能夠顯著性 的提高堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 的表達(dá)，改善移植物的微循環(huán)， 顯 著改善顆粒脂肪細(xì)胞的形態(tài)和功 能。趙雪蓮，女，1976年生， 河北省石家莊市人，河北 醫(yī)科大學(xué)畢業(yè)，副主任醫(yī) 師，主要從事乳房整形及 瘢痕的研究。中圖分類(lèi)號(hào):R394.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào)：2095-4344（2016）41-06105-07稿件接受：2016-08-23文題釋義：脂肪細(xì)胞培養(yǎng)：將吸脂來(lái)源的脂肪組織用D-Hanks沖洗，去除殘留的血細(xì)胞和組織碎片，把脂肪組織放入離心管中，記錄原始體積。向組織中加入等體積的0.1% I型膠原酶，放入 37 C氣浴振蕩器中消化30 min。然后將消化好的

3、組織靜置5 min，待其分層后，用吸管吸取位于懸液上層的脂肪細(xì)胞，將含有脂肪細(xì)胞的懸液以1 000 r/min（167冷），離心2 min后棄掉下層懸液得到脂肪細(xì)胞。摘要背景：血管基質(zhì)層細(xì)胞中含有大量的脂肪干細(xì)胞，有研究顯示脂肪干細(xì)胞在移植過(guò)程中可能發(fā)揮著很重要的作用。目的：觀(guān)察脂肪干細(xì)胞在顆粒脂肪移植中的作用。方法：選取10只雄性SPF級(jí)BALB/C小鼠，取出正常脂肪組織，提取動(dòng)物腹部脂肪中的脂肪干細(xì)胞 和顆粒脂肪，選取24只裸鼠作為移植受體，所有動(dòng)物分為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別為對(duì)照組、顆粒脂肪移植組、混合移植組（脂肪干細(xì)胞和顆粒脂肪）。2個(gè)移植組分別將顆粒脂肪細(xì)胞懸液及脂肪干細(xì)胞和顆粒脂 肪混勻

4、后細(xì)胞懸液注射到小鼠腹背左右肩胛處；對(duì)照組注射等量的細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)液。4周后，分離血漿及取岀移植物進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果與結(jié)論：混合移植組能顯著性的增加移植物的質(zhì)量，降低移植脂肪的吸收率，相對(duì)于顆粒脂肪移植組差異有顯著性意義（P 0.01）;移植后血漿中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子相對(duì)于對(duì)照組明顯提升，其 中混合移植組高于顆粒脂肪移植組 （P 0.01）;顆粒脂肪移植組堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的含量明顯 低于相混合移植組；混合移植組微血管密度顯著高于顆粒脂肪移植組（P 0.01）;動(dòng)物移植物中的細(xì)胞形態(tài)較單純顆粒脂肪細(xì)胞完好；混合移植組的脂肪油滴的數(shù)目明顯多于顆粒脂肪移植組；結(jié)果提示，脂肪干細(xì)胞能夠顯著性提高

5、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)，改善移植物的微循環(huán)， 顯著改善顆粒脂肪細(xì)胞的形態(tài)和功能。關(guān)鍵詞：干細(xì)胞；脂肪干細(xì)胞；顆粒脂肪移植；微血管密度主題詞：干細(xì)胞；移植；血管；組織工程基金資助：河北省2013醫(yī)學(xué)科學(xué)研究課題計(jì)劃（20130513）Zhao Xue-lia n. Associatechief physicia n.Departme nt of PlasticSurgery, the SecondHospital of Hebei MedicalUni versity, Shijiazhua ng050000, Hebei Provi nce,Chi naRole of adipose-d

6、erived stem cells in the fat tran spla ntati onZhao Xue-lian, Zhang Chun-li, Su Xiao-guang, Zhang Zhuo-nan, Han Peng, Zhang Jie, Wang Yan-ling,Zhang Chui (Department of Plastic Surgery, the Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, Hebei Province, China)AbstractBACKGROUND:The

7、re are a lot of adipose-derived stem cells in the vascular stroma. These cells areshown to play a very important role in the fat granule transplantation.OBJECTIVE: To explore the role of adipose-derived stem cells in the fat granule transplantation. METHODS: Normal adipose tissues were obtained from

8、 10 male BALB/C mice, SPF grade. Adipose-derived stem cells and fat granules were extracted from the abdominal fat tissues. Another 24 nude mice acted as recipients and were assigned into control, fat granule transplantation or mixed transplantation (adipose-derived stem cells+fat granules) groups.

9、In the latter two groups, fat granulesuspension and suspension of fat granules and adipose-derived stem cells were injected into the shoulder of rats, respectively. In the control group, the same volume of cell medium was injected. Four weeks later, separated plasma and grafts were taken out for ind

10、icator measurement.RESULTS AND CONCLUSION:Compared with the fat granule transplantation group, the mixedtransplantation could remarkably increase the weight of grafts, while reduce the absorption of grafted fat tissues ( P 0.01). After transplantation, the highest level of vascular endothelial growt

11、h factor in the plasma was obtained in the mixed transplantation group followed by fat granule transplantation group and control group ( P 0.01). Level of basic fibroblast growth factor and microvessel density were significantly higher in the mixed transplantation group than the fat granule transpla

12、ntation group (P 0.01). Better cellmorphology and higher number of fat droplets were found in the mixed transplantation group compared with the fat granule transplantation group. All these results indicate that adipose-derived stem cell transplantation can remarkably promote the expression of basic

13、fibroblast growth factor, improve graft microcirculation, and improve morphology and function of fat granules.Subject headings:Stem Cells; Transplantation; Vessels; Tissue EngineeringFunding: the Medical Science Research Project of Hebei Province in 2013, No. 20130513Cite this article:Zhao XL, Zhang

14、 CL, Su XG, Zhang ZN, Han P, Zhang J, Wang YL, Zhang C.Role ofadipose-derived stem cells in the transplantation of fat particles. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(41):6105-6111.0 弓 I言In troduct ion脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells , ADSCs）是一種能夠高度自我分化成各種細(xì)胞并且大量存在于 脂肪組織中的細(xì)胞群體1-4 O它能夠在特定的條件下分化 成骨

15、細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞等不同種類(lèi)的細(xì)胞5-8 O由于脂肪干細(xì)胞分化條件和方向的不確定性，目前臨床 上采用顆粒脂肪移植，主要應(yīng)用在美容整形等方面9-10 O但是研究中發(fā)現(xiàn)單純性移植顆粒脂肪細(xì)胞的移植物存 活率較差，目前多采用新鮮吸脂抽離物中獲得大量的自 體血管基質(zhì)片層段細(xì)胞（stromal vascular fraction ,SVF）,將其直接移植到皮下或不同層級(jí)的肌肉中，獲得較好的療效11-13。移植物存活率的干擾因素主要包括移 植物、注射方法、后期輔助治療等方面。血管基質(zhì)層細(xì) 胞中含有大量的脂肪干細(xì)胞，推測(cè)脂肪干細(xì)胞在移植過(guò) 程中可能發(fā)揮著很重要的作用14，但脂肪干細(xì)胞改善移植效果的相關(guān)

16、機(jī)制研究并未深入?；诖?，研究通過(guò)探 討脂肪干細(xì)胞在顆粒脂肪移植中的作用來(lái)解釋脂肪干細(xì)胞在脂肪移植中的作用及其提高脂肪移植的存活率 的相關(guān)機(jī)制。1 材料和方法Materials and methods1.1 設(shè)計(jì)隨機(jī)對(duì)照動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。1.2 時(shí)間及地點(diǎn) 2014年7月至2015年8月在河北醫(yī) 科大學(xué)第二醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室完成。1.3 材料1.3.1 試劑、耗材、儀器 胎牛血清、DMEM/F12培養(yǎng)液（美國(guó)gibco公司）；胰島素、雙抗、谷氨酰胺（美國(guó)sigma 公司）;熒光倒置顯微鏡（日本OLYMPUS公司）;蘇木精- 伊紅、油紅等染料（浩瑪生物科技有限公司 ）；血管內(nèi)皮 生長(zhǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)

17、因子的ELISA試劑盒（上海綠葉生物科技有限公司）；膠原蛋白酶、胰酶（上海偉進(jìn)生物科技有限公司）;SP試劑盒，二抗，一抗等（聯(lián) 科生物有限公司）o1.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SPF級(jí)BALB/C小鼠10只，體質(zhì)量（20 2） g ; SPF級(jí)裸鼠24只，體質(zhì)量（15 2） g，購(gòu)自 河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所有動(dòng)物均飼養(yǎng)在SPF級(jí)的動(dòng)物房中，溫度為（25 1） C，相對(duì)溫度為40% -60%。所用 動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)飼料均經(jīng)過(guò)60Co放射滅菌。1.4 實(shí)驗(yàn)方法1.4.1 脂肪干細(xì)胞的分離提取實(shí)驗(yàn)操作均需要在高標(biāo)準(zhǔn)的無(wú)菌潔凈室中完成， 取正常的BALB/C小鼠，麻 醉處死，取岀腹部白色脂肪組織，使用適量的PBS進(jìn)

18、行沖洗后將脂肪剪碎成1.0 -2.0 mm的大小，加入 0.075%的I型膠原蛋白酶溶液15-16，上述溶液的基質(zhì)為PBS，待消化好以后以600 r/min的離心轉(zhuǎn)速離心15 min。輕輕吸棄上層液體，將下層提取物用PBS再洗1次，重復(fù)上述操作， 最后將其重懸于低糖 DMEM為 基礎(chǔ)的完全培養(yǎng)基中（含有體積分?jǐn)?shù)10% -12%胎牛血清、1%的雙抗、100 U/mL的胰島素等）17-18，接種于 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)在37 C、體積分?jǐn)?shù) 5%CO 2的培養(yǎng)環(huán)境中，接種24 h后觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)，半換液。待細(xì)胞生長(zhǎng) 狀況較好的時(shí)候，正常換液傳代，傳代2次后，進(jìn)行月旨肪干細(xì)胞移植。1.4.2 顆粒脂肪分離19取

19、岀正常的BALB/C小鼠的腹 部脂肪細(xì)胞，將其洗凈后剪碎至0.5-1.0 mm大小，將其 放入DMEM/F12中以1 000 r/min離心5 min，棄上清再 度混懸即得到脂肪細(xì)胞顆粒。1.4.3 動(dòng)物分組及處理取正常的BALB/C小鼠10只，按照以上方法分離脂肪干細(xì)胞和顆粒脂肪，將脂肪干細(xì) 胞和顆粒脂肪按照一定的比例混合后移植到裸鼠的皮下組織中。本實(shí)驗(yàn)擬開(kāi)展3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，將24只裸鼠隨機(jī)平均分配到3個(gè)處理組中，每組8只動(dòng)物，分別為對(duì)照組； 顆粒脂肪移植組和脂肪干細(xì)胞+顆粒脂肪移植組（混合移植組）。1.4.4 移植方法實(shí)驗(yàn)中將移植物分別注射到每只動(dòng)物的腹背左右肩胛處的皮下組織中，注射深度為 2

20、.0- 3.0 mm。對(duì)照組注射等量的干細(xì)胞培養(yǎng)液 DMEM/F12。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將動(dòng)物用水合氯醛麻醉，脂 肪干細(xì)胞和顆粒脂肪按照不同的計(jì)量單位進(jìn)行注射，91取5 mL脂肪干細(xì)胞的細(xì)胞懸液（細(xì)胞濃度1X109 L-）和5g的顆粒脂肪混勻后，得到脂肪干細(xì)胞和顆粒脂肪的 混合物，混合物中干細(xì)胞的濃度為5X108 L-1，每只動(dòng)物注射1 000 mg的懸液，左右各500 mg移植物。同時(shí) 顆粒脂肪單獨(dú)移植組在相同位置各注射500 mg的顆粒脂肪。注射時(shí)注意注射速度要控制在0.5 mL/min，注射時(shí)保證移植物準(zhǔn)確的注射到動(dòng)物的皮下組織中，移 植完成后，觀(guān)察動(dòng)物的狀態(tài)，待動(dòng)物蘇醒后稱(chēng)質(zhì)量記 錄，移植后每

21、周測(cè)定一次動(dòng)物體質(zhì)量和觀(guān)察動(dòng)物移植 處的變化情況。1.4.5 移植后動(dòng)物處理注射移植后觀(guān)察動(dòng)物的每次狀況，每周測(cè)定動(dòng)物的體質(zhì)量情況，觀(guān)察有無(wú)異常情 況岀現(xiàn)；實(shí)驗(yàn)觀(guān)察 4周，實(shí)驗(yàn)結(jié)束動(dòng)物全部麻醉取血， 3 000 r/min離心15 min，分離血漿，用于測(cè)定相關(guān)生化 指標(biāo)；將肩胛處的移植物取岀，分離包膜和相粘連的結(jié)締組織，觀(guān)察各組移植物的形態(tài)有無(wú)差異，并稱(chēng)質(zhì)量 記錄；用體積分?jǐn)?shù) 4%的甲醛固定48 h后石蠟包埋切 片后做CD31免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)、蘇木精-伊紅染色和油紅O染色觀(guān)察脂肪顆粒的形態(tài)和微血管密度估算；血 漿用于ELISA試劑盒測(cè)定血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和堿 性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子水平。微

22、血管密度的估算：采用CD31對(duì)脂肪細(xì)胞進(jìn)行標(biāo) 記，其中的微血管密度則使用CD31的表達(dá)量表示，石蠟包埋的切片為3.0-4.0卩m經(jīng)過(guò)脫蠟處理，水化和抗原 修復(fù)，在常溫的條件下孵育一抗2 h，4 C過(guò)夜，兔源二抗標(biāo)記后在37 C的水浴鍋中孵育 60 min， PBS沖洗2 次，再用DAB顯色劑染色，室溫自來(lái)水沖洗終止顯色， 蘇木精復(fù)染、溫水沖洗、烘干、中性樹(shù)膠封固20-22。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道研究23-24，脂肪細(xì)胞中的微血管數(shù)目的計(jì)算：任何與周?chē)⒀?、其他結(jié)締組織分界清 楚的被標(biāo)記的單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞叢都作為獨(dú)立可計(jì)數(shù)的 微血管，在計(jì)數(shù)過(guò)程中，不考慮官腔和紅細(xì)胞的存在。 在低倍鏡及下尋找脂肪細(xì)胞中的微

23、血管密集區(qū)域進(jìn)行 計(jì)數(shù)。由計(jì)數(shù)軟件通過(guò)顯微鏡在高倍鏡下采集計(jì)數(shù)區(qū) 域圖像，然后按照計(jì)數(shù)規(guī)則對(duì)標(biāo)記的可代表微血管存 在的細(xì)胞或者細(xì)胞叢進(jìn)行計(jì)數(shù)。將所有計(jì)數(shù)面積區(qū)域 的實(shí)際大小調(diào)整為為1 mnX 1 mm，選擇3個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)域中的最高值的平均值代表這只動(dòng)物的脂肪移植物中的 微血管數(shù)。1.5 主要觀(guān)察指標(biāo)脂肪干細(xì)胞和顆粒脂肪細(xì)胞形態(tài)觀(guān)察；移植后動(dòng)物體質(zhì)量和移植物的質(zhì)量變化； 血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的變化；微血管密度的水平；蘇木精 -伊紅染色和 油紅O染色觀(guān)察裸鼠移植物脂肪組織周?chē)挠偷螖?shù)目及 細(xì)胞形態(tài)結(jié)果。1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析研究的數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS18.0軟件，所有數(shù)據(jù)均

24、采用x s表示。使用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法主要是方差齊性使用配對(duì)t檢驗(yàn)，方差不齊采用秩和檢驗(yàn)。P 0.05為差異有顯著性意義。A呂圖1脂肪干細(xì)胞和顆粒脂肪細(xì)胞的形態(tài)觀(guān)察(X100)Figure 1 Morphology of adipose-derived stem cells and fat granule cells (100)圖注：圖中A為脂肪干細(xì)胞；B為顆粒脂肪細(xì)胞。表1移植前后動(dòng)物體質(zhì)量和移植物質(zhì)量(x , n=8)Table 1 Animal body mass and graft weight before and after transplantation項(xiàng)目對(duì)照組顆粒脂肪移植組混合移植

25、組實(shí)驗(yàn)前體質(zhì)量（g）16.8 3.5016.4 ).3416.7 ).42實(shí)驗(yàn)后體質(zhì)量（g）17.6 ).4817.5 ).3917.8 ).40結(jié)束時(shí)體質(zhì)量（g）20.2 ).5519.2 ).6219.8 ).77移植物質(zhì)量（mg）23.6 11.2a625.5 19.0b889.8 +23.1ab表注：與顆粒脂肪移植組比較，aP 0.01 ；與對(duì)照組比較，bp .32c15.4 1.38c混合移植組22.4 .19db19.3 +2.01db表注：與顆粒脂肪移植組比較aP 0.05 , bP 0.01 ;與對(duì)照組相比 cP 0.05 , dP 0.01。表3各組微血管密度對(duì)比Table

26、3 Comparison of microvegroups_ 2(xs，n=8，/mm )issel density between two組別微血管密度顆粒脂肪移植組21.3 5.26混合移植組29.8 4.29a表注：與顆粒脂肪移植組比較，aP 0.012 結(jié)果 Results2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量分析實(shí)驗(yàn)選用受體裸鼠 24只，分為3組，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)脫失，全部進(jìn)入結(jié)果分析。2.2 移植后裸鼠一般狀況在實(shí)驗(yàn)觀(guān)察期間動(dòng)物各項(xiàng)活動(dòng)和狀態(tài)較為良好，未出現(xiàn)較嚴(yán)重的不良情況產(chǎn)生， 總體動(dòng)物飲食，活動(dòng)受移植物的影響較小。2.3 脂肪干細(xì)胞和顆粒脂肪細(xì)胞形態(tài)觀(guān)察見(jiàn)圖1。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)脂肪干細(xì)胞在分離之后，細(xì)胞呈

27、現(xiàn)長(zhǎng)梭形如圖1A所示，在培養(yǎng)傳代之后逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樗笮渭?xì)胞；顆粒脂肪分離之后，細(xì)胞呈現(xiàn)橢圓形的細(xì)胞形態(tài)（圖1B），在細(xì)胞周?chē)⒉己芏嘀居偷涡↑c(diǎn)，細(xì)胞形態(tài)多不相同。2.4 移植后動(dòng)物體質(zhì)量和移植物的質(zhì)量變化所有動(dòng)物稱(chēng)質(zhì)量數(shù)據(jù)均為采取禁食措施，各項(xiàng)數(shù)據(jù)均能真實(shí)反映動(dòng)物的體質(zhì)量變化。由表1可以發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過(guò)程中動(dòng)物的整體體質(zhì)量 有一定的下降趨勢(shì)，其中2個(gè)移植組相對(duì)于對(duì)照組體質(zhì)量岀現(xiàn)一定程度的下降，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)， 取岀移植物的質(zhì)量相差較大，顆粒脂肪移植組相比對(duì)照 組有較大的差異，差異有顯著性意義（P 0.01）?；旌弦浦步M的移植物質(zhì)量明顯高于顆粒脂肪移植組，并且差 異有顯著性意義（P 0.0

28、1） o2.5 血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的變化研究測(cè)定血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水平，采用 ELISA的試驗(yàn)方法測(cè) 定血漿中微量生長(zhǎng)因子水平，相關(guān)數(shù)據(jù)見(jiàn) 表2o由表2可以發(fā)現(xiàn)，移植后動(dòng)物血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng) 因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子均明顯高于對(duì)照組（P 0.05），其中混合移植組相對(duì)于顆粒脂肪移植組和對(duì)照組 均能顯著性的提高血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平，差異 有顯著性意義（P 0.01）;另外混合移植組與顆粒脂肪 移植組比較，差異有顯著性意義（P 0.01） o2.6 微血管密度的水平見(jiàn)表3o由表3可以看出動(dòng)物在移植后混合移植組移植物中 微血管密度明

29、顯高于顆粒脂肪移植組，差異有顯著性意義（P 200)觀(guān)察裸鼠移植物脂肪組織周?chē)挠偷螖?shù)目及細(xì)胞形態(tài)Figure 2 Number of fat droplets and cell morphology around the grafts in nude mice using oil red 0 (40) and hemXtoxylin-eosinstaining (200)圖注：混合移植組明顯的增加了脂肪組織周?chē)挠偷螖?shù)目及顏色。3 討論 Discussi on顆粒脂肪移植技術(shù)是替代傳統(tǒng)移植填充物的新型 手術(shù)治療方法，被廣泛的應(yīng)用于美容整形燒燙傷等方 面9，25-28。臨床上多采用自體脂肪細(xì)胞

30、移植來(lái)消除免疫 排斥等不良反應(yīng)，但是在移植的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，顆粒脂肪 移植后形成壞死29、炎癥以及高比率的脂肪吸收等現(xiàn) 象，提示在顆粒脂肪移植后的整體能量供給岀現(xiàn)了問(wèn) 題，血液微循環(huán)不足造成脂肪的流失的主要原因11。脂肪干細(xì)胞是一種能夠大量獲取、具有多種分化潛質(zhì)的多功能細(xì)胞，脂肪干細(xì)胞具有易獲取，低免疫原性、 組織相容性好以及抗擊凋亡等特點(diǎn)30，被廣泛的應(yīng)用于各項(xiàng)研究中。脂肪干細(xì)胞被認(rèn)為能在多方面協(xié)助移植 物，其中主要包括：移植后部分脂肪細(xì)胞岀現(xiàn)死亡等 消亡情況，脂肪干細(xì)胞會(huì)分化成顆粒脂肪細(xì)胞，進(jìn)而對(duì) 細(xì)胞形成補(bǔ)充，較少脂肪的吸收溶解；移植后在短期 內(nèi)移植物處于缺氧缺營(yíng)養(yǎng)支撐時(shí)期，脂肪干細(xì)胞可以促

31、 進(jìn)血管生成因子的釋放，進(jìn)而促進(jìn)血管再生，恢復(fù)移植 物的供養(yǎng)情況提高脂肪的成活率31-32;同時(shí)脂肪干細(xì)胞也具有自我恢復(fù)存活的功能，增加了移植物的自我修 復(fù)和減少脂肪吸收。另外有研究表明，脂肪干細(xì)胞具有 在缺氧的情況，繼續(xù)發(fā)揮細(xì)胞生物學(xué)功能，是一種很強(qiáng) 生命力的干細(xì)胞種群。研究主要探討了脂肪干細(xì)胞在顆粒脂肪移植中的作用，采用對(duì)比分析的試驗(yàn)方法，在24只裸鼠上設(shè)置3個(gè)組別分別為對(duì)照組、顆粒脂肪移植組、顆粒脂肪+脂肪干細(xì)胞移植組，通過(guò)測(cè)定血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水平、估算微血管密度、蘇 木精-伊紅染色結(jié)合油紅O染色等手段，探究脂肪干細(xì)胞在顆粒脂肪移植中的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示

32、，脂肪干細(xì) 胞具有很強(qiáng)的促進(jìn)脂肪細(xì)胞成活率、減少脂肪吸收率、 改善移植物的血液微循環(huán)、促進(jìn)脂肪細(xì)胞功能等方面的作用。同時(shí)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)混合移植組因?yàn)榧尤肓酥靖杉?xì) 胞，造成血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生 長(zhǎng)因子水平顯著高于單純顆粒脂肪移植組，血管內(nèi)皮生 長(zhǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子被認(rèn)為是在脂肪移 植的過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用的2種細(xì)胞因子33-37，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子主要是與機(jī)體內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2的受體相結(jié)合，促進(jìn)血管生成，由血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受 體2受體介導(dǎo)的血管生成可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖 以及細(xì)胞遷移，進(jìn)而誘導(dǎo)血管的再生，并且增加血管的 通透性，促進(jìn)新生血管網(wǎng)的重建，使得移植脂

33、肪組織得 到更充足的血供，從而提高移植脂肪組織的存活率，并 且降低移植脂肪組織的吸收率38-41。另外有研究表明，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子是對(duì)血管形成和再生有促進(jìn) 作用的生長(zhǎng)因子42，活化各種修復(fù)細(xì)胞，既作用于內(nèi)皮 細(xì)胞趨化因子，同時(shí)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的分裂，因此具有強(qiáng) 烈的促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖分化及心血管形成的作用43，在脂肪移植的早期可為移植的脂肪提供良好的血供，極大縮短組織的缺血時(shí)間，進(jìn)而降低組織由于缺血而造成 的壞死，增加存活率，在后期可減少移植脂肪的吸收率， 以獲得穩(wěn)定的手術(shù)效果44-45。研究中發(fā)現(xiàn)，移植4周后觀(guān)察移植物的重量發(fā)現(xiàn)顆 粒脂肪移植組相對(duì)于混合移植組的移植物的重量明顯 下降(P

34、0.01)，提示脂肪干細(xì)胞能顯著提高脂肪細(xì)胞 的存活率和降低脂肪細(xì)胞的吸收率。在微血管密度的測(cè) 定結(jié)果中發(fā)現(xiàn)顆粒脂肪移植組相對(duì)于混合移植組的微 血管密度明顯下降(P 0.01)，提示脂肪干細(xì)胞能顯著 性的提升移植物中微循環(huán)，改善血供提高移植物的存 活。在油紅O染色中也可以得到相同的印證。研究結(jié)果顯示在脂肪干細(xì)胞移植的過(guò)程中能夠顯著的改善移植 物的微循環(huán)和提高促血管生成因子的釋放，進(jìn)而促進(jìn)了 脂肪細(xì)胞的生成和提高脂肪移植的存活率。作者貢獻(xiàn)：設(shè)計(jì)、評(píng)估為第一作者，實(shí)施為全體作者。 利益沖突：所有作者共同認(rèn)可文章內(nèi)容不涉及相關(guān)利 益沖突。倫理問(wèn)題：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在戊巴妥納麻醉下進(jìn)行所有的手 術(shù)，并盡一切努

35、力最大限度地減少其疼痛、痛苦和死亡。文章查重：文章岀版前已經(jīng)過(guò)CNKI反剽竊文獻(xiàn)檢測(cè) 系統(tǒng)進(jìn)行3次查重。文章外審：文章經(jīng)國(guó)內(nèi)小同行外審專(zhuān)家雙盲外審，符 合本刊發(fā)稿宗旨。作者聲明：第一作者對(duì)研究和撰寫(xiě)的論文中出現(xiàn)的不 端行為承擔(dān)責(zé)任。論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù) （包括計(jì)算 機(jī)數(shù)據(jù)庫(kù)）記錄及樣本已按照有關(guān)規(guī)定保存、分享和銷(xiāo)毀， 可接受核查。文章版權(quán)：文章岀版前雜志已與全體作者授權(quán)人簽署 了版權(quán)相關(guān)協(xié)議。4 參考文獻(xiàn)Referen ces1 賈玉磊，人脂肪干細(xì)胞協(xié)同顆粒脂肪移植的實(shí)驗(yàn)研究 D. 河北醫(yī)科大學(xué)，2014.2 周紫微，趙宇.脂肪干細(xì)胞研究進(jìn)展與應(yīng)用前景J.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013,(7

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