肝愈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文

1、肝愈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文 【摘要】目的建立控制肝愈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法對肝愈膠囊中主要成分丹參、梔子、黃柏、黃芪、五味子進行了薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法測定黃芩苷的含量。結(jié)果薄層色譜法可以對該制劑中的丹參、梔子、黃柏、黃芪、五味子作出準(zhǔn)確鑒別；黃芩苷的線性范圍為0.120.58g，r=0.9997，平均加樣回收率為99.06，RSD為1.40(n=5)。結(jié)論方法靈敏、簡便、重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 【關(guān)鍵詞】肝愈膠囊黃芩苷薄層色譜高效液相色譜 Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardforGanyuCapsule.Meth

2、odsRadixSalviaeMiltiorrhiae,FructusGardeniae,CortexPhellodendri,RadixAstragaliandFructusSchisandraewereidentifiedbyTLC.BaicalinwasdeterminedbyHPLC.ResultsTLCspotsdevelopedwerefairlyclear,andtheblanktestshowednointerference.Baicalinshowedagoodlinearrelationshipintheconcentrationrangeof0.11680.5840g，a

3、ndtheaveragerecoverywasupto99.06%,RSDwas1.4%.ConclusionThemethodisaccurate,reproducibleandsimple.Itcanbeusedasthequalitycontrolofthispreparation. Keywords:GanyuCapsule;Baicalin;TLC;HPLC 肝愈膠囊由黃芩、丹參、梔子、黃柏、黃芪、五味子等中藥組成，具有清熱解毒、益氣活血的功效。主治氣陰兩虛型肝炎。為控制本品的內(nèi)在質(zhì)量，本實驗采用TLC，HPLC等方法對其進行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。 1儀器與試藥 Waters600E2487

4、型高效液相色譜儀美國；Millennium色譜工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)美國；BP211D電子天平德國。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。黃芩苷7159908供含量測定用，純度99.02%、丹參酮07669903、梔子苷07499806、鹽酸小檗堿7139813、黃芪甲苷07819806、五味子乙素07659706，對照品均購自中國藥品生物制品檢定所。肝愈膠囊3批樣品：040105，040108，040111自制。硅膠G青島海洋化工廠。 2方法與結(jié)果 2.1薄層鑒別 2.1.1丹參的鑒別1 取本品內(nèi)容物3g，研細(xì)，加乙醚20ml，超聲處理20min，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使

5、溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材粗粉1g和按處方量從中除去丹參藥材的陰性對照品粗粉4g，分別同法制成對照藥材溶液和陰性對照液。再取丹參酮A對照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法實驗1，吸取上述4種溶液各6l,分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯191為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性對照色譜在相應(yīng)的位置上無此斑點。見圖1。 2.1.2梔子的鑒別1 取本品內(nèi)容物3g，加乙醇20ml，超聲處理20min，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取梔子對照藥材粗粉1g和按處方量

6、從中除去梔子的陰性對照品粗粉3g，分別加乙醇10ml和20ml,同法制成對照藥材溶液和陰性溶液。再取梔子苷對照品，加乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各5l，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水5511為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點，而陰性對照色譜中無相應(yīng)的斑點。見圖2。 2.1.3黃柏的鑒別 取本品內(nèi)容物2g，加甲醇20ml,超聲處理20min，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取黃柏對照藥材粗粉0.2

7、g和按處方量從中除去黃柏的陰性對照品粗粉2g，分別加甲醇10ml和20ml,加熱回流提取15min，過濾，濾液濃縮至干，各加1ml甲醇使溶解，分別作為對照藥材溶液和陰性對照溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各3l,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液631.51.50.5為展開劑，置氨蒸氣飽和的層析缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點。見圖3。 2.1.4黃芪的鑒別1 取本品內(nèi)容物4g，加正丁醇30

8、ml，超聲處理1h，濾過，濾液用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次，20ml/次，棄去堿液，用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，正丁醇濃縮至干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材粗粉1g和按處方量從中除去黃芪的陰性對照品粗粉4g，分別加正丁醇15ml和30ml，同法制成對照藥材溶液和陰性對照溶液。再取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和陰性對照品溶液各8l，對照藥材溶液6l，對照品溶液4l，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水102011510以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1

9、0%硫酸乙醇溶液，置105烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點。見圖4。 2.1.5五味子的鑒別1 取本品內(nèi)容物5g，置索氏提取器中，加氯仿30ml，回流提取3h，回收氯仿，殘渣加氯仿2ml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材粗粉2g和按處方量從中除去五味子的陰性對照品粗粉5g,分別置索氏提取器中，各加氯仿15ml和30ml，同法制成對照藥材溶液和對照品溶液。再取五味子乙素對照品，加氯仿制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液、對照藥材溶液和陰性溶液各5l，對照品溶液3l，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF2

10、54薄層板上，以石油醚3060-甲酸乙酯-甲酸1551的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點。見圖5。 2.2含量測定 2.2.1色譜條件的選擇 色譜柱KromasilC18200mm4.6mm,5m,流動相：甲醇-水-冰醋酸55450.5流速1.0ml/min；檢測波長280nm；柱溫25；理論板數(shù)按黃芩苷峰計應(yīng)不低于1500。 2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取干燥至恒重的黃芩苷對照品2.92mg，置50ml量瓶中，加適量甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含0.00584mg的對照品溶液

11、。分別精密吸取對照品溶液2，4，6，8，10l，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以黃芩苷進樣量微克數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，得一直線，計算回歸方程為Y=2.43106X-3.74104，r=0.9997（n=5.結(jié)果表明黃芩苷在0.11680.5840g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 2.2.3供試品溶液的制備 取本品10粒，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，取3.0g精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml,稱定重量，超聲處理功率250W，頻率40kHz30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2.0ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖

12、勻后過0.45m微孔濾膜，濾液作為供試品溶液。 2.2.4精密度實驗 精密吸取濃度為0.00584mg/ml的黃芩苷對照品溶液5l，重復(fù)進樣5次，均值為609299，RSD=0.90%n=5，結(jié)果表明儀器精密度良好。 2.2.5穩(wěn)定性實驗 精密吸取供試品溶液5l，注入液相色譜儀，分別于0，1，3，7，12h測定峰面積。結(jié)果表明峰面積的RSD為0.90%，表明供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。 2.2.6空白實驗 取樣品和按處方比例不含黃芩的諸藥，按制劑工藝分別制成供試品溶液和陰性對照液，精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各5l，分別注入液相色譜儀，依法測定，結(jié)果陰性對照品溶液在與黃芩苷

13、對照品溶液相同保留時間處無色譜峰，表明無干擾。見圖6。 2.2.7重復(fù)性實驗 取同一批號樣品，按供試品制備方法平行制備5份，依法測定黃芩苷峰面積，分別計算含量，RSD為1.24%，表明重復(fù)性良好。 2.2.8回收率實驗 采用加樣回收法，精密稱取已知黃芩苷含量的同一批號樣品(040105)5份，1.6g/份，分別精密加入黃芩苷對照品8mg，按含量測定方法操作測定，計算，平均回收率為99.06%，RSD為1.4%。結(jié)果見表1。表1回收率考察數(shù)據(jù)（略） 2.2.9樣品含量測定 取3批樣品依法制備供試品溶液，精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5l，分別注入液相色譜儀，測定峰面積，計算樣品中黃芩苷的含量。

14、結(jié)果見表2。表2樣品含量測定數(shù)據(jù)（略） 3討論 在黃柏的薄層色譜鑒別實驗中，黃柏鑒別項下1的展開劑，醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水10611進行實驗，結(jié)果分離效果不好，Rf值較小，相鄰斑點分不開。后來選用黃連鑒別項下的展開劑，經(jīng)過多次調(diào)整，把展開劑中的水換成濃氨試液，即展開劑為苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(631.51.50.5)效果較好，結(jié)果較穩(wěn)定。 流動相的選擇“雙黃連顆粒”項下1黃芩苷含量測定的流動相，試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芩苷達(dá)不到基線，保留時間較短，經(jīng)調(diào)整將甲醇比例增大些，醋酸比例縮小，則達(dá)到基線分離、保留時間合適，故流動相選用甲醇-水-冰醋酸55450.5。 采用參考文獻1方法對肝愈膠囊進行薄層色譜鑒別，重現(xiàn)性好，陰性實驗無